Apport de la cytogntique dans le diagnostic des

Apport de la cytogénétique dans le diagnostic des phases leucémiques des lymphomes de la zone marginale : - l’expérience du laboratoire Biomnis Lyon - ATC , Rouen , 24 Septembre 2011 M. Roumiguières, V. Goutaloy

Les études cytogénétiques ont permis une grande avancée dans la classification des hémopathies lymphoïdes chroniques. Le diagnostic et le pronostic des SLP reposent sur: - les données cliniques -l’étude cytologique/histologique -l’étude immunophénotypique -l’étude cytogénétique www. biomnis. com 2

Devant la présence d’un hyperlymphocytose (>5000/mm 3) 1==> Etude cytologique du frottis sanguin : Cytologie typique de LLC : petits lymphocytes matures + ombres de Gümprecht 2==> Etude immunophénotypique : Monoclonalité + Score de Matutes LLC typique : score de Matutes > 3 LLC atypique : score de Matutes = 3 Score de Matutes < 3 = pas une LLC Immunophénotypage : Diagnostic de certitude de la LLC 3

Rôle « PRONOSTIQUE » de la CYTOGENETIQUE CARYOTYPE www. biomnis. com FISH 4

Culture en 72 h + Oligonucléotides: [DSP 30 (Cp. G stimulants)+ IL 2] 5

Culture en 72 h+ Oligonucléotides: [DSP 30 (Cp. G stimulants)+ IL 2] 6

Pour les scores de MATUTES ≤ à 3 Etude CYTOLOGIQUE : indispensable ex : Lymphocytes clivés et Lymphome folliculaire Etude CYTOGENETIQUE : peut permettre de préciser le DIAGNOSTIC et le PRONOSTIC du lymphome malin non hodgkinien B. -cas de la translocation (14; 18)(q 32; q 21) et lymphome folliculaire 7

CLASSICATION OMS DES LMNH-B 8

Parmi les LZM, 3 hémopathies bien distinctes sont identifiées en fonction des sites atteints : - le lymphome de type MALT (gastrique principalement) - 50 à 70% - le LZM splénique (S-MZL) – 20% - le LZM ganglionnaire (N-MZL) – 10% ZONE MARGINALE Ce sont généralement des lymphomes indolents du sujet âgé Prise en charge thérapeutique fonction de l'organe atteint : Antibiothérapie (MALT), Splénectomie 9

dans le cadre du LZM: DIAGNOSTIC HISTOLOGIQUE = DIAGNOSTIC DE CERTITUDE. . . . dans le cadre des phases leucémiques des LZM non MALT Le score de Matutes est souvent nul (=0) ou faible (groupe CD 5 -/CD 10 -) L’analyse cytologique de la prolifération lymphocytaire peut poser des problèmes diagnostiques (à l’exception des lymphocytes villeux) EXISTE-T-IL UN AUTRE OUTIL DIAGNOSTIQUE ? 10

LZMLZM : Profils génétiques différents LZM - Malt LZM Splénique ou ganglionnaire Translocations réciproques Anomalies de nombre Gains et/ou délétions t(11; 18)(q 21; q 21) API 2 / MALT 1 Translocations avec IGH en 14 q 32 Trisomie 3 / 3 q Del 7 q Trisomie 18 Del 6 q Trisomie 12 / 12 q Del 8 p t(1; 14)(p 22; q 32) – BCL 10 -IGH t(14; 18)(q 32; q 21) – IGH-MALT 1 t (3; 14)(p 14; q 32)- FOXP 1 -IGH www. biomnis. com 11

Comment poser un diagnostic de LZM ? Intérêt de la cytologie ? Oui si L. villeux Intérêt de l’immunophénotypage ? Matutes 0 à 2 et groupe CD 5 - / CD 10 - souvent insuffisant Intérêt de la cytogénétique ? Peut apporter une aide précieuse +++ 12

Etude de 3 cas cliniques et Experience de Biomnis sur 2009 -2011 www. biomnis. com 13

Lymphocyte B normal Hyperlymphocytose à 14 G/l Cytologie atypique 14

Immunophénotypage : Matutes < 3 (1/5) Groupe CD 5 - / CD 10 - Phase leucémique de quel LMNH-B ? 15

3 q 31 q 35 46, XX, dup(1)(q 12 q 44), del(7)(q 31 q 35) Délétion de la bande 7 q 32 = commune à tous les LZM 16

Evolution en 2 clones: 1 er clone : del (8)(p 12) 4646, XX, dup(1)(q 12 q 44), del(7)(q 31 q 35), del(8)(p 12) 17

2ème clone : der 8 t(8; 12)(p 12; q 13) = délétion 8 p et trisomie 12 q partielle 46, XX, dup(1)(q 12 q 44), del(7)(q 31 q 35), der(8) t(8; 12) (p 12; q 13) 18

Lymphocyte B normal Hyperlymphocytose à 58 G/l, Cytologie atypique 19

Immunophénotypage : Matutes < 3 (0/5) Groupe CD 5 - / CD 10 - Phase leucémique de quel LMNH-B ? 20

4747, XX, +12 21

i(8)(q 10) = délétion 8 p et trisomie 8 q D 12 Z 1 D 13 S 319 D 13 S 1020 4747, XX, i(8)(q 10), +12. nuc ish(D 12 Z 1 x 3, D 13 s 319 x 2, D 13 S 1020 x 2 22

Lymphocyte B normal Hyperlymphocytose à 33 G/l Cytologie très évocatrice : Lymphocytes villeux 23

Matutes < 3 Groupe CD 5 - / CD 10 - LZM splénique à lymphocytes villeux 24

3’IGH 46, XX, t(6; 14)(p 21; q 32). nuc ish(IGHx 2)(5’IGH sep 3’IGHx 1) 5’IGH LSI IGH Dual Color, Break Apart Rearrangement 25

ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM AU LABORATOIRE BIOMNIS 2009 2011 www. biomnis. com 26

17 cas identifiés : 7 hommes, 10 femmes Age moyen : 74 ans www. biomnis. com 27

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ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009 2011 Au point de vue cytologique : Très grand polymorphisme de la cellule lymphomateuse, Hétérogénéité des données cytologiques dans 94 % des cas (sauf L. Villeux) Taille moyenne, Chromatine mature, parfois nucléolée, Noyau +/- régulier, Cytoplasme au contour +/- régulier et +/- abondant, Nucléole +/- visible, = MANQUE FREQUENT DE SIGNATURE CYTOLOGIQUE www. biomnis. com 29

ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009 2011 Au point de vue immunophénotypique: Score de Matutes Fréquence 0 35 % 1 35 % 2 30 % 3 0% CD 5 - / CD 10 - dans 94% des cas ( 1 cas CD 5+ = LZM/CD 5+ ? ) www. biomnis. com 30

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Au point de vue cytogénétique : www. biomnis. com Anomalies cytogénétiques en association ou non Fréquence +3, +18 24 % del (7)(q 32 q 35) 21 % +3, del (7 q) 18 % +3, ou +3 q 12 % +3, +12 5% 3+, iso 8 q ( = del (8 p)), +18 5% +12, i(8)q (del (8 p)) 5% del 7, del(8 p) 5% +3, +18, del(14 q) 1 cas t (6; 14) 1 cas 32

Chromosomes impliqués Fréquence 3 65 % 7 41% 18 29 % 8 23 % 12 11 % 33

Anomalies cytogénétiques en association ou non Fréquence +3, +18 38 % association isolée ou avec caryotype complexe iso 8 q, del 6 q, del 14 q, +18 +3 , del 7 q association isolée ou avec caryotype complexe +3 q, del 6 q, 23 % del 6 q, del 7 q, 15% +3, +12 8% +12, i(8)q (del 8 p) 8% del 7, del 8 p 8% Associations d’anomalies chromosomiques dans 76 % des cas. www. biomnis. com 34

Anomalies cytogénétiques isolées Nombre de cas +3, ou +3 q 2 cas del (7)(q 32 q 35) 1 cas t(6; 14) 1 cas Anomalies isolées dans 24% seulement des cas www. biomnis. com 35

www. biomnis. com Nombre d’anomalies dans le LZM Fréquence 1 18 % 2 24 % 3 et > 3 58% 36

Pas de délétion ATM (caryotype et FISH) Pas de délétion 13 q 14 (caryotype et FISH) 2 délétions p 53 dans notre série (11 % des cas) par iso (17 q) => SEUL CRITERE PRONOSTIC PEJORATIF dans les LZM ? www. biomnis. com 37

Salido et al, Blood 2010 N = 330 perte gain 38

Chr 3 3 q 25 3 q 29 = région commune surreprésentée perte gain 39

Chr 7 7 q 32. 1 -32. 2 = région commune délétée Gènes candidats ? ? ? perte gain 40

dup(1 q) ? del(6 q) ? del(8 p)/+8 q? del(14 q) ? réarrangement 14 q 32 ? perte gain IGH Chr 1 Chr 6 Chr 8 Chr 14 41

Cytologie Diagnostic du LZM Immunophénotypage Cytogénétique 42

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