La Cytogntique OncoHmatologique Antoine ITTEL Laboratoire de Cytogntique
La Cytogénétique Onco-Hématologique Antoine ITTEL Laboratoire de Cytogénétique Onco-Hématologique Département de Génétique Médicale CHU Timone Enfants, Marseille
La Cytogénétique Onco-Hématologique Principe général : § recherche d’anomalies chromosomiques acquises chez l’enfant et l’adulte § uniquement détectables dans la moelle osseuse, le sang, ou les organes lymphoïdes secondaires (au sein d’un clone cellulaire) D’après http: //atlasgeneticsoncology. org
Hématopoïèse Moelle osseuse : os iliaque, sternum, vertèbres, sacrum, côtes, extrémités fémur et humérus Cellules souches : autorenouvellement, totipotence, engagement en différentiation cellulaire Pathologie en Hématologie = prolifération clonale à départ médullaire Þ Degré d’envahissement médullaire à prendre en compte pour l’interprétation des anomalies
Intérêt de la Cytogénétique en Onco-Hématologie Permet de confirmer un diagnostic suspecté : certaines anomalies sont spécifiques d’une pathologie donnée Exemple : la leucémie myéloïde chronique Age médian : 50 ans 15% des leucémies de l’adulte Découverte fortuite + (baisse état général, splénomégalie) - Hémogramme : hyperleucocytose de 50 à 300 G/L (norm : 4 à 10 G/L) avec polynucléose (90 -95%) et myélémie et hyperplaquettose - Myélogramme : syndrome myéloprolifératif
95% LMC : t(9; 22)(q 34; q 11) Þ Traitement adapté : anti-tyrosine kinase (Glivec®, Sprycel®…) FISH Caryotype 46, XY, (9; 22)(q 34; q 11)
Intérêt de la Cytogénétique en Onco-Hématologie Permet de fournir des arguments pronostiques influençant la prise en charge thérapeutique Exemple : la leucémie lymphoïde chronique Adulte + de 50 ans 3 -10 nouveaux cas/an pour 100 000 habitants Découverte fortuite à l’hémogramme +++ (adénopathies, spénomégalie) Prolifération anarchique d’un clone lymphocytaire B portant un marqueur aberrant T - Hémogramme : au moins 5 G/L lymphocytes, en général de 30 à 50 G/L - Immunophénotypage : de Matutes 4 ou 5/5 score
LLC Caryotype 46, XY, del(13)(q 14 q 22) 47, XX, +12 ÞÞ Pronostic Bon pronostic intermédiaire
LLC FISH ATM/CEP 11 ATM (11 q 22. 3 -q 23. 1) : Rôle dans la réparation de l’ADN, la régulation du cycle cellulaire, l’apoptose CEP 11 11 Þ Nécessité de mise en place d’un traitement plus précocément, résistance thérapeutique, rechute précoce, survie globale significativement plus courte
LLC FISH p 53/CEP 17 p 53 (17 p 13. 1) : gène suppresseur de tumeur CEP 17 17 Þ Pronostic défavorable +++ Þ survie globale plus courte et non-réponse absolue au traitement par fludarabine ou pentostatine
LLC Anomalies cytogénétiques et pronostic Sur une série de 325 patients souffrant de LLC : Anomalie Nombre patients (%) Médiane de survie (mois) del 17 p 7 32 del 11 q 18 79 +12 16 114 Normal 18 111 del 13 q 55 133 Döhner et al. NEJM 2000
La Cytogénétique Onco-Hématologique Prélèvements : - Moelle osseuse : au moins 2 ml sur seringue héparinée - Sang : au moins 8 ml sur tube hépariné (20 millions de cellules) - Ganglion SLP, LA hyperleucocytaires SMD, LAL et LAM, SMP, myélomes, cytopénies Þ Sang Þ Moelle osseuse
La Cytogénétique Onco-Hématologique Mise en culture : Þ RPMI + sérum de veau fœtal - Durée : de 24 (cellules leucémiques à index mitotique élevé) à 96 h - Additifs : spécifiques du type cellulaire d’intérêt (5637, IL 2 + DSP 30…) - Synchronisation : FUDR (augmente résolution de l’analyse)
La Cytogénétique Onco-Hématologique Choc hypotonique : Þ KCl 37°C Fixation : méthanol et acide acétique (¼ - ¾) Þ Culot cytogénétique Etalement sous Thermotron® (température et degré d’humidité constants) Þ Cytogénétique conventionnelle : caryotype Þ Cytogénétique moléculaire : FISH
La Cytogénétique Onco-Hématologique Caryotype : § Résolution : 300 -400 bandes LAL hyperdiploïde 56, XXYY, der(1), +4, +9, +10, +11, +14, +18, +21 Þ Repérer les anomalies de nombre et de structure § Classer au moins 20 mitoses § Pour affirmer qu’une anomalie est clonale : - trisomie : 2 métaphases - monosomie : 3 métaphases - de structure : 2 métaphases NB : § Mosaïcisme fréquent : reflète le degré d’atteinte des cellules (attention aux caryotypes faussement normaux, aux anomalies cryptiques) § Possibilité de détecter différents clones porteurs d’anomalies distinctes (anomalie primaire : présente dans toutes les cellules ; anomalie secondaire : surajoutée à l’anomalie primaire)
La Cytogénétique Onco-Hématologique FISH : - Permet de confirmer des anomalies mises en évidence au caryotype : monosomie, trisomie, délétions, remaniements… - Sensibilité plus forte : met en évidence des anomalies invisibles au caryotype - Utile +++ en cas d’échec de caryotype Exemple : leucémie aiguë avec remaniement du locus MLL Fréquence : - 70 % des LA du nourrisson (LAL et LAM) - 7 % des LAL de l’enfant (après 2 ans) - 5 % des LAL de l’adulte - 5 % des LAM de l’adulte - Hématologie : Hyperleucocytose LAL-B mais aussi LAL-T (8% des LAL-T) LAM : LAM 4 ou M 5 - Cytogénétique : réarrangement de la bande 11 q 23 avec > 60 partenaires
FISH : remaniement de MLL Vysis (cen 5’ sg/tel 3’ so) t(1; 11) MLL : rôle de facteur régulateur de transcription ; rôle dans l’hématopoïèse Þ pronostic intermédiaire Þ très défavorable chez le nourrisson
La Cytogénétique Onco-Hématologique - Evolution rapide ces dernières années - FISH en pratique courante Þ Importance pour donner des arguments diagnostiques et pronostiques - Autre technique : CGH-array Þ Très prometteuse pour le futur M-FISH
REMERCIEMENTS Département de Génétique Médicale du Pr LEVY § Laboratoire de Cytogénétique Onco-hématologique § Laboratoire de Génétique Chromosomique : Dr Hélène ZATTARA Pr Anne MONCLA Dr Marina LAFAGE Dr Chantal MISSIRIAN Dr Elise KASPI Dr Cornel POPOVICI Ophélie PETIT-PRENANT § Laboratoire d’Hématologie des Pr SEBAHOUN et Pr MORANGE Dr Véronique BACCINI
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