SEROLOKA DIJAGNOSTIKA COVID19 INFEKCIJE Nensi Aramini mag med

SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA COVID-19 INFEKCIJE Nensi Araminčić, mag. med. lab. diagn. , nastavnica savjetnica Medicinska škola u Rijeci

PREDGOVOR U ovoj prezentaciji objašnjen je značaj i dobrobit provođenja serološke dijagnostike Covid-19 infekcije u populaciji te usporedba serološke i molekularne dijagnostike. Nadalje, definirana su protutijela, vrste, njihova zadaća i normalne vrijednosti u krvnom serumu, s posebnim naglaskom na Ig. M i Ig. G.

1. PCR 2. SEROLOGIJA 3. KRVNI SERUM 4. PARNI SERUMI 5. IMUNOGLOBULINI 6. TITAR PROTUTIJELA KLJUČNI OBRAĐENI POJMOVI

Trenutni zlatni standard u dijagnostici Covid-19 infekcije je molekularna dijagnostika RT-PCR (polimeraza lančane reakcije) iz brisa grla ili nazofarinksa. RT-PCR metodom virusna RNA otkriva se u akutnoj fazi infekcije iz respiratornih uzoraka. RT-PCR metoda ne daje podatak o imunološkom statusu inficiranoga sa SARS-Cov-2 uzročnikom. RT (eng. Real Time) – test izvođen u realnom vremenu MOLEKULARNA DIJAGNOSTIKA COVID-19 INFEKCIJE

DEFINICIJA SEROLOŠKE DIJAGNOSTIKE Serologija podrazumijeva dijagnostiku bolesti dokazivanjem reakcije protutijela i stranoga, npr. virusnoga antigena.

Serološka dijagnostika počiva na dokazu specifičnih protutijela na S-protein zvan „spike” s površine virusa SARS-Cov-2 u krvnom serumu bolesnika. Nazočnost protutijela predstavlja imunološki odgovor organizma na strani antigen. U prvom tjednu infekcije ovim virusom bilježi se porast Ig. M protutijela, a kasnije i Ig. G protutijela. Rast razine Ig. M protutijela počinje oko 5 -og dana od početka infekcije, a za njima do 15 og dana rastu i Ig. G protutijela. SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA COVID 19 INFEKCIJE

ZAŠTO DOKAZIVATI PROTUTIJELA? Dokaz protutijela bitan je kod: 1. bolesnika u početnoj fazi bolesti kod kojega nije potvrđena SARS-Cov-2 RNA iz briseva gornjih dišnih puteva. 2. zdravog kontakta u početku samoizolacije, pri čemu prisutna protutijela upućuju na potencijalno latentnoga prenositelja bolesti.

Dobrobit od serološkog testiranja je sljedeća: 1. tako se identificiraju osobe koje su se oporavile, razvile imunitet i koje se mogu vratiti na posao, što je bitno u održavanju sustava npr. zdravstva, policije i vojske. Takve osobe doprinose razvoju kolektivnoga imuniteta. Stjecanjem kolektivnoga imuniteta prekida se širenje virusa. 2. tako se utvrđuje IFR COVID-19 – omjer smrtnosti od infekcije i ukupan broj osoba koje su se zarazile i oporavile bez simptoma ili s blagom slikom bolesti 3. ostaje i opcija da bi se možda mogla protutijela imunih osoba koristiti u liječenju teško oboljelih od Covid-19 (ovo zahtjeva daljnje znanstvene studije i ispitivanja) DOBROBIT SEROLOŠKOGA TESTIRANJA

Biološki uzorak je krvni serum dobiven iz venske krvi uzete bez antikoagulansa. Uzima se 5 - 10 m. L venske krvi iz koje se izdvaja krvni serum. Krvni serum je krvna plazma bez proteina fibrinogena. U pravilu se uzimaju tzv. parni serumi, uzorci uzeti u razmaku od 23 tjedna da bi se pratilo kretanje titra protutijela. Kvaliteta uzorka utječe na rezultat testiranja! UZORAK KRVI ZA SEROLOŠKU DIJAGNOSTIKU

U sterilnu epruvetu bez antikoagulansa u aseptičkim uvjetima uzima se 5 -10 m. L venske krvi Ostavi se na sobnoj temperaturi da se izdvoji koagulum Uzorak se centrifugira 5 -10 min. /3000 rpm Odvoji se supernatant – krvni serum Krvni serum se čuva na temperaturi hladnjaka (+4°C) do 7 dana Dulje vrijeme alikvotirani uzorak čuva se duboko zamrznut (20°C) POSTUPAK S UZORKOM

Dvije su serološke metode ključne: 1. imunokromatografija 2. ELISA (eng. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Ovim metodama se određuje nazočnost Ig. M i Ig. G protutijela, otkrivaju se bolesni, izliječeni i asimptomatski slučajevi. Dokazano je da visoki titar protutijela predstavlja rizik za razvoj težih oblika bolesti neovisno o dobi, spolu i komorbiditetu! U obzir dolaze indirektni testovi kojima se određuju specifična anti-SARS-Cov-2 Ig. M/Ig. G protutijela pojedinačno ili ukupno. SEROLOŠKI TESTOVI U COVID-19 INFEKCIJI

IMUNOKROMATOGRAFIJA I ELISA

Obje metode detektiraju protutijela na virusni antigen u krvnom serumu Brze su, daju rezultat kroz 10 – 15 minuta Pogodne su za otkrivanje i bolesnih i izliječenih osoba Daju uvid u opseg populacije koja je došla u kontakt s virusom Opsežno testiranje ovim metodama daje uvid u mogući budući razvoj bolesti u populaciji te planiranje epidemioloških mjera ZNAČAJ IMUNOKROMATOGRAFIJE I ELISA TESTOVA

Molekularna dijagnostika Covid-19 Serološka dijagnostika Covid-19 Naziv testa Vrsta biološkoga uzorka Vrijeme potrebno do nalaza Tumačenje dobivenoga nalaza RT-PCR Bris grla i/ili nazofarinksa Nekoliko sati Imunokromatografija i ELISA Krvni serum 10 -15 minuta Dokaz virusne RNA u ispitivanome uzorku Dokaz Ig. M/Ig. G protutijela u ispitivanome uzorku Značaj dobivenoga nalaza Otkrivanje zaraženih SARSCov-2 virusom Detektiranje imunološkoga statusa pojedinca i populacije MOLEKULARNA VS. SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA COVID-19

Imunoglobulini (antitijela, protutijela) su proteinske molekule koje proizvode plazma stanice, a predstavljaju odgovor imunološkoga sustava na ulazak stranog antigena u organizam. Ima ih 5 klasa: Ig. M, Ig. G, Ig. D, Ig. A i Ig. E. Svaka od klasa ima svoju ulogu u obrani organizma. Imunološki odgovor teče na sljedeći način: Antigen T-Ly B-Ly plazma stanice Ig. M (Ig. G) PROTUTIJELA

OD ANTIGENA DO PROTUTIJELA Antigen T-Ly B-Ly plazma stanice protutijela

Ig. M je najveće protutijelo, pentamer, prvo reagira na infekciju i ukazuje na akutnu fazu oboljenja. Referentna vrijednost: 0, 4 – 2, 3 g/L PROTUTIJELA

PROTUTIJELA Ig. G protutijelo je monomer, štiti međustanični prostor od infekcije, njegov dokaz upućuje da je prethodno postojalo obolijevanje ili je provedeno cijepljenje, što nije slučaj u Covid-19 infekciji. Referentna vrijednost: 7 -16 g/L

PROTUTIJEL A

Ig. A protutijelo je dimer, na sluznici intestinalnoga i respiratornoga sustava. Sekretorni Ig. A nalazi se u sekretima: bronha, crijeva, znoju, suzama i kolostrumu. Štiti intestinalni i respiratorni sustav od virusnih infekcija. Referentna vrijednost: 0, 7 – 4, 0 g/L PROTUTIJELA

Nalaz seroloških testova izdaje se kao titar protutijela. Titar protutijela – najveće razrijeđenje krvnoga seruma u kojemu su još prisutna pozitivna protutijela. KRETANJE TITRA PROTUTIJELA

PONOVIMO… 1. Koji biološki uzorak dolazi na serološku dijagnostiku Covid-19 infekcije? 2. Što su imunoglobulini? Nabrojite njihove klase! 3. Koja protutijela dokazujemo u serološkoj dijagnostici Covid-19 infekcije? 4. Koji serološki testovi dolaze u obzir u dokazu anti-SARS-Cov-2 protutijela? 5. Što je titar protutijela? 6. Koji je značaj serološkog testiranja u korona pandemiji za pojedinca, a koji za društvo?

ZAKLJUČAK Serološka dijagnostika Covid-19 infekcije ima značaj uz upotrebu molekularnih testova i pravilno provođenje epidemioloških izvida. Serološkim testiranjem se utvrđuje imunološki status pojedinca kao i pojava kolektivnog imuniteta. Razvojem kolektivnoga zaustavlja se širenje bolesti. Cijepljenje ostaje najbolja sekundarna mjera prevencije zaraznih bolesti. To je put k eradikaciji uzročnika iz populacije. imuniteta

Znanje je utočište u nevolji. Aristotel I ZA KRAJ…