NENSI ARAMINI MAG MED LAB DIAGN NASTAVNICA SAVJETNICA

• NENSI ARAMINČIĆ, MAG. MED. LAB. DIAGN. , NASTAVNICA SAVJETNICA IZOLACIJ A DNA I RNA • NASTAVNI PREDMET: BIOKEMIJA • OBRAZOVNA RAZINA: 3. RAZRED • OBRAZOVNI PROFIL: ZDRAVSTVENOLABORATORIJSKI TEHNIČAR/KA • MEDICINSKA ŠKOLA U RIJECI

DRAGI UČENICI, • U OVOJ PREZENTACIJI UPOZNAT ĆETE SE S METODAMA IZOLACIJE DJELIĆA MOLEKULA DNA I RNA KOJE SU POTREBNE U MEDICINI, BAKTERIOLOGIJI, VIROLOGIJI, GENETICI, FORENZICI, DIJAGNOSTICI NASLJEDNIH OBOLJENJA…

ŠTO ZNAMO O DNA I RNA? • DNA – NUKLEINSKA KISELINA, OBLIKA SPIRALNO SAVIJENE DVOSTRUKE UZVOJNICE, NOSITELJ JE GENETSKE INFORMACIJE ŽIVOGA SVIJETA • RNA – NUKLEINSKA KISELINA, OBLIKA JEDNOSTRUKE UZVOJNICE, ODGOVRNA ZA SINTEZU PROTEINA

IZOLACIJA DNA

POSTUPAK IZOLACIJE DNA • HUMANA DNA MOŽE SE IZOLIRATI IZ PUNE KRVI (LEUKOCITA), TKIVA, URINA, PRIMARNIH STANIČNIH KULTURA. POSTUPAK IZOLACIJE OBUHVAĆA SLJEDEĆE FAZE: • 1. LIZU STANICA • 2. UKLANJANJE STANIČNIH PROTEINA, RNA I DRUGIH MOLEKULA KEMIJSKOM EKSTRAKCIJOM (FENOL-KLOROFORM) ILI ENZIMSKIM REAKCIJAMA (RNAZA, PROTEINAZA K) • 3. IZOLACIJA DNA TALOŽENJEM S KONCENTRIRANIM ETANOLOM • 4. OTAPANJE DNA U PUFERU, PH =8, 0

POSTUPAK IZOLACIJE DNA - FAZE

IZOLACIJA DNA IZ LEUKOCITA

PONOVIMO • NAVEDI ZNAČAJ MOLEKULE DNA? • IZ KOJIH UZORAKA SE MOŽE IZOLIRATI DNA? • GDJE IMA PRIMJENU ANALIZA IZOLIRANE MOLEKULE DNA? • U KOLIKO FAZA TEČE IZOLACIJA DNA?

IZOLACIJA RNA

POSTUPAK IZOLACIJE RNA IZOLACIJA RNA JE NUŽNA U PROUČAVANJU TRANSKRIPCIJE. MOŽE SE IZOLIRATI IZ LEUKOCITA, TJELESNIH TEKUĆINA, STANICA TKIVA I STANIČNIH KULTURA. POSTUPAK IZOLACIJE OBUHVAĆA SLJEDEĆE FAZE: 1. LIZU STANICA UZ INHIBICIJU RNAZA 2. ODVAJANJE RNA OD DNA I PROTEINA ULTRACENTRIFUGIRANJEM, EKSTRAKCIJOM I PRECIPITACIJOM 3. IZOLACIJU RNA S KISELIM GVANIDIN-TIOCIJANATOM I FENOL-KLOROFORMOM NAPOMENA: IZOLACIJU RNA OMETA AKTIVNOST RNAZA, ENZIMA RIBONUKLEAZA KOJI SU PRISUTNI NA LABORATORIJSKOM POSUĐU I U KEMIKALIJAMA. ZATO JE NUŽNA INAKTIVACIJA RNAZA S 0, 1% OTOPINOM DIETILPIROKARBONATA (DEPC).

POSTUPAK IZOLACIJE RNA-FAZE

IZOLACIJA RNA IZ BILJNOG TKIVA

PONOVIMO • ŠTO OTEŽAVA IZOLACIJU RNA? • IZ KOJIH UZORAKA JE MOGUĆE IZOLIRATI RNA? • NAVEDI ZNAČAJ MOLEKULE RNA?