Chemiczne i spektroskopowe metody analizy cholesterolu zwizku o

Chemiczne i spektroskopowe metody analizy cholesterolu- związku o dużym znaczeniu biologicznym Zapraszam do oglądania prezentacji

W dniu 17 listopada bieżącego roku wraz z nauczycielem prowadzącym projekt Panią Renatą Rak udaliśmy się do Wrocławia, aby na Uniwersytecie Ekonomicznym we Wrocławiu uczestniczyć w zajęciach dotyczących „Nauki i technologii dla żywności”

Na zajęciach wykonywaliśmy: Żelazowe roztwory kompleksów cholesterolu Pomiary absorbancji z zastosowaniem spektrometru UV/VIS Wykrywanie cholesterolu metodami chemicznymi a) Próbą Salkowskiego b) Próbą Libermanna-Burchardta Identyfikację związku chemicznego przy pomocy widm IR oraz krzywą kalibracyjną (na podst. pomiarów fotokolorymetrycznych)

Żelazowe roztwory kompleksów cholesterolu Na początku przy pomocy palników odparowywaliśmy roztwór z pewną ilością cholesterolu. Po wykonaniu czynności oraz ochłodzeniu probówki dodawaliśmy do niej odmierzone pipetą ilości substancji (1, 5 cm 3 kwasu octowego i 1 cm 3 odczynnika żelazowego). Po wstrząśnięciu probówki i odczekaniu 10 min porównywaliśmy zabarwienie naszych roztworów z przygotowanymi probówkami.

Próbka Cholesterol [µg] Kwas octowy [cm 3] Odczynnik żelazowy [cm 3] P 1 100 1, 5 1 P 2 80 1, 5 1 P 3 60 1, 5 1 P 4 40 1, 5 1 Wykonaną przez siebie próbkę porównałem z przygotowanymi roztworami kompleksów cholesterolu. Ustaliłem, że barwa wskazuje na zawartość mniejszą niż 40 µg.

Pomiary absorbancji z zastosowaniem spektrometru UV/VIS Kolejnym punktem naszego projektu był pomiar absorbancji przygotowanych przez nas roztworów za pomocą spektrometru.

O spektrofotometrii Spektrofotometria – technika pomiarowa polegająca na ilościowym pomiarze transmisji lub odbicia światła przez próbkę. Od połowy XX wieku stanowi główne narzędzie spektroskopii absorpcyjnej i odbiciowej w bliskim nadfiolecie i świetle widzialnym, a dawniej również w podczerwieni, znajdując szerokie zastosowanie w chemii analitycznej, biologii, medycynie i badaniach materiałowych.

Do kuwet kwarcowych wlaliśmy roztwory z cholesterolem, które następnie wkładaliśmy do komory pomiarowej wcześniej już wspomnianego spektrometru. Maszyna dokonała analizy próbek i wyświetliła na ekranie komputera wartość absorbancji. Kuweta kwarcowa

Wykrywanie cholesterolu metodami chemicznymi Po ustaleniu ilości cholesterolu powróciliśmy do pracowni chemicznej, gdzie mieliśmy do zrealizowania dwa doświadczenia: a) Próbę Salkowskiego b) Próbę Libermanna- Burchardta

Próba Salkowskiego Do dwóch analitycznych próbek mieliśmy dodać 1 cm 3 chloroformu, 5 kropli substancji z próbek (oznaczonych literami) oraz 1 cm 3 stężonego kwasu siarkowego. Obserwowaliśmy zmianę zabarwienia próbek. Czerwone zabarwienie warstwy chloroformowej i dolnej z zieloną fluorescencją wskazuje na obecność cholesterolu.

Równanie reakcji pierwszego doświadczenia

Próba Libermanna- Burchardta Drugie doświadczenie było wykonywane bardzo podobnie z tą różnicą, że zamiast 1 cm 3 kwasu siarkowego (jak było w próbie Salkowskiego)dodawaliśmy 7 kropel bezwodnika octowego oraz 1 -2 krople kwasu siarkowego, po czym wstrząsaliśmy probówkę. Jeśli w probówce znajdował się cholesterol, po dodaniu kwasu siarkowego można było zauważyć szybką zmianę barwy od czerwonej poprzez niebieską (aż do zielonej)

Równanie reakcji drugiego doświadczenia

Identyfikacja związku chemicznego przy pomocy widm IR oraz krzywą kalibracyjną (na podst. pomiarów fotokolorymetrycznych) Ostatnim elementem naszych zajęć była praca z komputerami. W pracowni posługiwaliśmy się arkuszem kalkulacyjnym Excel oraz nowopoznanym programem Origin- służącym do wizualizacji danych pomiarowych.

1. 4 R 2 = 0. 9992 1. 24 1 0. 9 1. 4 0. 8 Series 1 0. 6 0. 52 0. 4 0. 2 0. 138 0 0 50 100 150 Zawartość substancji [mg/100 cm 3] Podstawowe roztwory Linear(Series 0) 1. 24 1. 2 Absorbancja przy 550 nm 1. 2 Podstawowe roztwory+ mój roztwór 1 0. 9 0. 8 Series 1 0. 6 0. 52 0. 4 0. 267 0. 2 0. 138 0 0 100 200 Zawartość substancji [mg/100 cm 3] Linear(Series 0 )

Tabela do wyznaczenia krzywej kalibracyjnej oraz obliczania cholesterolu w analizowanej próbce Próbka Cholesterol [µg] Absorbancja P 1 100 1, 24 P 2 80 0, 9 P 3 60 0, 52 P 4 40 0, 138 PA 46, 6 0, 267 Długość fali [nm] 550

Widmo IR Porównanie widm IR 3 substancji oraz cholesterolu

Prezentację wykonał Maciej Pucek kl. IID