Predmeti 1 Medicinska mikrobiologijavjebe 2 Bakteriologija virologija parazitologijavjebe

Predmeti: 1. Medicinska mikrobiologija(vježbe) 2. Bakteriologija, virologija, parazitologija(vježbe) • Smjer: - Zdravstveno laboratorijski tehn. (3 raz) - Sanitarni tehničar(2 razred) • Farmaceutski tehničar (2 razred) • Medicinski tehničar, tehničarka (3 razred) • Pripremila: Ines Mišetić Lašić • Zdravstvena škola Split

UVOD • Prisjetimo se: ISHODI koje smo do sada usvojili • Važnost mikrobiološke dijagnostike – iz biološkog uzorka izolirati i identificirati patogenog uzročnika bolesti! • Ponovimo: • Koji je postupak i princip bakteriološke obrade uzoraka ? (navesti redosljed obrade i bitne metode i testove identifikacije patogenih vrsta). • Što je mikroskop i za što se koristi?

Mikroskopska dijagnostika • Velika važnost u mikrobiološkoj dijagnostici • Koriste se nativni i obojeni preparati Koristeći mikroskop dokazuje se : 1. Prisustvo patogene bakterije u direktnom preparatu biološkog uzorka(npr. likvor) 2. Oblik, pokretljivost i veličina stanica živih većih mikroorganizama u nativnim preparatima. 3. Morfologija i građa bakterijske stanice u obojenim preparatima.

Mikroskopski preparati Pripremila: Ines Mišetić Lašić, bacc. med. lab. dijag. Zdravstvena škola, Split

Mikroskopski preparati • Služe nam za promatranje morfoloških karakteristika mikroorganizama • Dijelimo ih u dvije kategorije: 1) NEOBOJENI (NATIVNI) PREPARATI 2) OBOJENI TRAJNI PREPARATI (vide se obojane stanice )

Neobojeni (nativni) preparati • Promatramo žive mikroorganizme-veće bakterije, gljivice, kvasce, ciste i jajašca parazita. • Dokazujemo pokretljivost bakterija- bičevi (flagele) • Stanice su neobojane, vidi se oblik i veličina • Dobro se vide samo veći mikroorganizmi • Neobojeni preparati nisu pogodni za proučavanje građe mikroorganizama • Moraju se pregledati brzo jer nisu trajni, brzo se osuše. • Pregledaju se sa malim povećanjem mikroskopa (objektivi 10 i 40 x), cik – cak metodom, desetak vidnih polja.

Vrste neobojenih preparata: • vlažni (nativni)preparati • viseća kap( za dokazivanje pokretljivosti bakterija, radi se od bujonske kulture) • tuš preparat – tzv negativno bojenje. Za dokazivanje kapsula bakterija i zavojitih bakterija

Vlažni (nativni )preparat • Najjednostavniji mikroskopski preparat za otkrivanje pokretljivosti bakterija i za proučavanje morfologije bakterija i gljivica i patazita. •

Nativni ili vlažni preparat • Uzorci od kojeg se može raditi nativni preparat su : • Sediment urina- gleda se prisustvo bakterija, gljivica i parazita u urinu. U biokemijskoj dijagnostici gledaju se stanice, eritrociti, leukociti, epitelne st, cilindri. . • Sediment likvora – dokazuje se prisustvo bakterija • Feces – dokazuju se ciste i jajašca parazita

Postupak izrade:

Izrada nativnog preparata od tekućeg uzorka (bujonska kultura gljivica ) • Pripremiti pribor(uzorak , stalak , pasterova pipeta, predmetno stakalce, pokrovno stakalce, pinceta) • Sa pasterovom pipetom stavitiuzeti kap uzorka iz epruvete i staviti na sredinu predmetnog stakalca. Prekriti sa pokrovnim stakalcom. • Mikroskopirati odmah sa cik – cak metodom sa malim povećanjem i zabilježiti i nacrtati viđeno.

VJEŽBA: Izrada nativnog preparata od krutog materijala(bakterijske kolonije) 1) Na sredinu predmetnog stakalca kapnemo kap fiziološke otopine Na. Cl 2) Sa ezom zahvatimo malo kolonije , prenesemo u kap i otopimo u kapi fiziološke otopine. Preko suspenzije pažljivo spustimo pokrovno stakalce. 3) Stavljamo ga na mikroskop i tražimo sliku na malom povećanju 10 x 4) Promatramo pod srednjim povećanjem 40 x, kondenzor je na sredini 5) Izoštravamo sliku pomoću mikrovijka i pregledamo preparat te uočimo i nacrtamo viđeno.

Izrada preparata:

Nativni preparat Neobojene stanice gljivica( 10 x 10)

Stanice gljivica u nativnom preparatu. , ve like ovalne, prela maju svjetlost.

Stanice plijesni i kvasnica u nativnom preparatu

Tuš preparat • Za dokaz kapsula bakterija i spiralnih bakterija. • Princip: kapsule i spiralne bakterije se ne boje sa uobičajenim metodama bojenja a isto tako ne primaju ni tuš (čestice tuša ne prodiru kroz njhovu stijenku) • Rezultat: sve u preparatu se oboji tušem u crno, osim kapsula ili spiralnih bakt. koje ne primaju tuš pa su neobojeni.

Spiralna bakterija u tuš preparatu

Kapsule u tuš preparatu

Morfologija bakterija - podjela bakterija po obliku stanice 1) KOKI-OKRUGLE BAKTERIJE- dolaze u formi: diplokoki, streptokoki, stafilokoki, tetrakoki i sarcine 2) BACILI-ŠTAPIĆASTE BAKTERIJE- forme su : bacili, kokobacili, streptobacili 3) SPIRILI-ZAVOJITE BAKTERIJE(po broju zavoja dijele se na : vibrioni, spirili, spirohete Napomena: morfologija i građa bakterijskih stanica gleda se u obojenim preparatima.

Streptokok u lancima u preparatu bojenom po Gramu Stafilokok u grozdovima u preparatu bojenom po Gramu

Zadatak za učenike • Nakon što pogledate prezentaciju molim odgovorite na pitanje? 1. Koji je oblik bakterijske stanice prikazan na četvrtom slajdu uz naslov prezentacije? Vaš odgovor postavite u virtualnoj učionici Zdravstvene škole u Splitu. Nastavnik: Ines Mišetić Lašić, Zdravstvena škola, Split

Pitanja za ponavljanje i vrednovanje • Navedi značaj mikroskopske dijagnostike? • Koje su vrste mikroskopskih preparata? • Što se promatra u nativnim(neobojenim)preparatima? • Što se dokazuje tuš preparatom? • Navedi kako razlikujemo bakterije s obzirom na morfologiju stanica? • Navedi pribor potreban za izradu nativnog preparata? • Navedi razliku u veličinii zmeđu bakterijskih stanica i stanica gljivica u nativnim preparatima?

Kraj • Hvala na pažnji! Nastavnik: Ines Mišetić Lašić Zdravstvena škola Split

Napomena • Za neke dijelove prezentacije( fotografije i crteži ) korištena literatura iz mikrobiologije za učenike, studente i nastavnike zdravstvenog usmjerenja. Literatura: Priručnik za vježbe iz opće mikrobiologije Autori: Hajsig, Delaš