Zkladn hematologick vyeten stav patologick fyziologie 1 LF

Základní hematologická vyšetření Ústav patologické fyziologie 1. LF UK

Co vyšetřujeme? Krev 2. Kostní dřeň - aspirační punkce - trepanobiopsie 3. Lymfatické uzliny - extirpace 1.

Přehled metod 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. FW Krevní obraz Koagulace Cytochemie Vyšetření metabolizmu Fe Vyšetření metabolizmu HGB Imunologie Průtoková cytometrie Cytogenetika a molekulární biologie

Sedimentace erytrocytů (FW) Ø Rychlost sedimentace závisí na tvorbě agregátů erytrocytů – penízkovatění (suspenzní stabilitě)

Ø Zrychlení - fibrinogen, imunoglobuliny, CRP a jiné proteiny akutní fáze, anémie Ø Zpomalení - albumin, polycytémie Ø Metoda Fahreus-Westergrenova (FW) Ø Norma: 2 -5 mm/h u mužů 3 -8 mm/h u žen (↓ ery, ↑ fibrinogen) Ø Nespecifické vyšetření – screening, sledování průběhu (dynamiky) nemoci

Krevní obraz (KO) kvantitativní vyšetření Ø Ø Ø Ø Hemoglobin (HGB) Hematokrit (HCT) Počet erytrocytů (RBC) Objem RBC (MCV) Množství HGB v RBC (MCH) Koncentrace HGB v RBC (MCHC) Distribuční šíře RBC (RDW) Retikulocyty (ret) Ø Ø Ø Počet trombocytů (PLT) Distribuční šíře PLT (PDW) Objem PLT (MPV) Počet leukocytů (WBC) Diferenciální rozpočet WBC - segmenty a tyče - eozinofily - bazofily - monocyty - lymfocyty kvalitativní vyšetření

Ø Automatické stanovení hematologickými analyzátory

Jak funguje analyzátor ? - impedanční – při průchodu částice mezi elektrodami vzroste impedance - počet impulzů = počet částic - amplituda = objem částice - optické – při průchodu částice přes fokusovaný světelný paprsek dojde k rozptylu světla

Ø Klasický krevní nátěr - při patologickém nálezu na analyzátoru - zhodnocení morfologie buněk

← sférocyty schistocyty →

Hemoglobin Ø Stanovení spektrofotometricky po hemolýze erytrocytů a přeměně na hemiglobinkyanid Ø Normální hodnoty ženy: 120 – 160 g/l muži: 130 – 175 g/l Ø Zvýšení: polycytémie, dehydratace Ø Snížení: anémie, hyperhydratace

Hematokrit Ø HCT udává procentuelní zastoupení erytrocytů v objemové jednotce krve (analyzátor vypočítá HCT z RBC a MCV) Ø Normální hodnoty ženy: 0, 35 – 0, 46 muži: 0, 40 – 0, 50 35 - 46 % 40 – 50 % Ø Zvýšení: polycytémie, dehydratace Ø Snížení: anémie, hyperhydratace

Počet erytrocytů Ø udáván v množství x 1012/l nebo x 106/μl Ø Normální hodnoty ženy: 3, 8 – 5, 2 x 1012/l muži: 4, 2 – 5, 8 x 1012/l Ø Zvýšení: polycytémie, dehydratace Ø Snížení: anémie, hyperhydratace

MCV – mean cell (corpuscular) volume Ø Výpočet: - určen přímo analyzátorem ! Ø Normální hodnota: 80 – 99 fl Ø Rozlišení - normocyty - mikrocyty - makrocyty

MCH – mean cell (corpuscular) hemoglobin Ø Výpočet: Ø Normální hodnota: 27 – 33 pg Ø Rozlišení - normochromní RBC (normo nebo makrocyty) - hypochromní RBC (většinou mikrocyty)

MCHC – mean cell (corpuscular) hemoglobin concentration Ø Výpočet: Ø Normální hodnota: 33 - 37 % Ø Hodnocení obdobné jako u MCH

RDW – red cell distribution width Ø Analyzátor vytvoří v paměti Priceovu-Jonesovu křivku, RDW je šířka distribuce (obdobně se stanovuje PDW) (RDW je mírou anizocytózy)

Počet retikulocytů Ø Stanovení z krevního nátěru obarveného brilantkrezylovou modří (počet / 1000 RBC) (analyzátorem – absolutní hodnoty) Ø Normální hodnota: 0, 5 – 1, 5 % Ø Zvýšení: zvýšená tvorba RBC v kostní dřeni (krvácení, hemolýza) Ø Snížení až vymizení: útlum erytropoézy, útlum dřeně

Počet trombocytů Ø Udává se v množství x 109/l nebo x 103/μl Ø Normální hodnoty: 150 – 450 x 109/l Ø Zvýšení: trombocytóza Ø Snížení: trombocytopenie Ø Funkční porucha: trombocytopatie

Počet leukocytů Ø Udává se v množství x 109/l nebo x 103/μl Ø Normální hodnoty: 4 – 10 x 109/l Ø Zvýšení: leukocytóza Ø Snížení: leukopenie

Diferenciální rozpočet leukocytů Ø Udává zastoupení jednotlivých druhů leukocytů v krvi Ø Vyjadřuje se v relativním (%) nebo absolutním počtu Poruchy: neutrofilie x neutropenie eozinofilie x eozinopenie bazofilie x bazopenie lymfocytóza x lymfopenie

Anémie

Ø 35 letá těhotná žena byla vyšetřena progredující únavu a zadýchávání při minimální zátěži. Klinické vyšetření až na bledé spojivky v normě.

Ø Bylo vysloveno podezření na anémii, provedeno vyšetření krevního obrazu Ø HGB HCT RBC MCV MCH RDW ret WBC PLT 71 g/l 23% 2, 5 x 1012 74 fl 22 pg 17, 1% 0, 2% 5, 4 x 109 450 x 109 (120 – 160 g/l) (35 - 46 %) (3, 8 – 5, 2 x 1012/l) (80 – 99 fl) (27 – 33 pg) (13 – 15 %) (0, 5 – 1, 5 %) mikrocytární hypochromní s anizocytózou hypoproliferativní (4 – 10 x 109/l) (150 – 450 x 109/l) Který parametr krevního obrazu diagnostikuje anémii? Ø Proč není anémie definována hodnotami RBC a HCT? Ø Jak lze anémii na základě hodnot KO blíže charakterizovat? Ø

Anémie (patofyziologická klasifikace) hyperproliferativní (zvýšené ztráty) hypoproliferativní (nedostatečná tvorba) nedostatek erytropoetinu krvácení hemolýza nedostatek faktorů důležitých pro erytropoezu porucha krvetvorné tkáně

Anémie (morfologická klasifikace) mikrocytární (hypochromní) normocytární (normochromní) makrocytární sideropenická anémie chronických chorob krvácení deficit vitaminu B 12 anémie chronických chorob některé hemolytické anémie aplastická anémie deficit kyseliny listové talasémie MDS jaterní choroby hypotyreóza

Vyšetření metabolizmu železa S-Fe Ø S-feritin Ø S-transferin Saturace transferinu Celková vazebná kapacita transferinu Ø (Solubilní transferinový receptor) Ø

Vyšetření metabolizmu železa Ø Tranzitní pool Fe je stanovován jako sérové železo (veškeré železo je vázáno na transferin) a jako TIBC (celková vazebná kapacita) Pool Fe v zásobárnách je Ø stanovován jako sérový feritin Ø

Vyšetření metabolizmu železa Ø TIBC se zvyšuje při sníženém Fe v séru (více neobsazeného transferinu) a při zvýšení sérového transferinu Ø Saturace transferinu je vypočtená jako S-Fe/ TIBC Ø s. Tf. R vzniká proteolýzou membránového Tf. R, je nepřímým ukazatelem exprese Tf. R v organismu => zvýšen u deficitu železa a intenzivní erytropoézy

Proč je sideropenická anémie mikrocytární? Proč je přítomna anizocytóza? mikrocyty mitózy prodloužená hemoglobinizace nedostatek Fe

Ø 50 letá žena přichází pro zhoršení dechu v několika posledních týdnech. Také si stěžuje na mravenčení prstů na levé noze. Při fyzikálním vyšetření zjišťujeme žlutě zabarvené skléry, červený a vyhlazený jazyk.

Ø Pro podezření na anémii byl vyšetřen krevní obraz: Ø HGB HCT RBC MCV MCH RDW ret WBC PLT 65 g/l 19, 3% 1, 7 x 1012 114 fl 33 pg 22 % 0, 4% 2, 0 x 109 140 x 109 (120 – 160 g/l) (35 - 46 %) (3, 8 – 5, 2 x 1012/l) (80 – 99 fl) (27 – 33 pg) (13 – 15 %) (0, 5 – 1, 5 %) (4 – 10 x 109/l) (150 – 450 x 109/l) O jaký typ anémie se jedná?

Anémie (morfologická klasifikace) mikrocytární (hypochromní) normocytární (normochromní) makrocytární sideropenická anémie chronických chorob krvácení deficit vitaminu B 12 anémie chronických chorob některé hemolytické anémie aplastická anémie deficit kyseliny listové talasémie MDS jaterní choroby hypotyreóza

Ø Vyšetření sérové koncentrace: vitaminu B 12 kyseliny listové Ø Proč je anémie makrocytární?

makrocyty ↑ prodloužená doba mezi bb děleními ↑ nedostatek kyseliny listové a vitaminu B 12

Ø HGB HCT RBC MCV MCH RDW ret WBC PLT 65 g/l 19, 3% 1, 7 x 1012 114 fl 33 pg 22 % 0, 4% 2, 0 x 109 140 x 109 (120 – 160 g/l) (35 - 46 %) (3, 8 – 5, 2 x 1012/l) (80 – 99 fl) (27 – 33 pg) (13 – 15 %) (0, 5 – 1, 5 %) (4 – 10 x 109/l) (150 – 450 x 109/l) Ø Proč má pacientka pancytopenii ? Ø Proč má pacientka parestézie?

hypochromní mikrocytární anémie makrocytární anémie hypersegmentovaný neutrofil

Hemolytické anémie

Vyšetření metabolizmu hemoglobinu Ø S-bilirubin – koncentrace odráží degradaci hemu (zvýšen u hemolytických anémií) S-haptoglobin (váže hemoglobin) Ø S-hemopexin (váže hem) (sníženy u hemolytických anémií) Ø Ø Elektroforéza hemoglobinu – zjištění abnormálních hemoglobinů (hemoglobin S)

Vyšetření antierytrocytových protilátek (→ dg. autoimunitních hemolytických anémií) Ø Přímý antiglobulinový test (Coombsův) - průkaz protilátek na povrchu erytrocytů pomocí antiglobulinového séra

Ø Nepřímý antiglobulinový test - průkaz volných protilátek v séru (po inkubaci RBC se sérem se přidá antiglobulinové sérum)

Imunologická vyšetření Ø Vyšetření krevních skupin Ø (Přímý antiglobulinový test) Ø (Nepřímý antiglobulinový test)

Vyšetření krevních skupin Ø ABO systém - vyšetření RBC pomocí diagnostických sér anti-A a anti-B - vyšetření sérových aglutininů anti-A a anti-B pomocí typových erytrocytů Ø Rh(D) systém - vyšetření pomocí anti-Rh(D) séra

bed-side test

Cytochemie Ø Průkaz látek v buňkách pomocí chemických reakcí, hodnocení periferní krve i kostní dřeně Ø Reakce na železo (Perlsova reakce) - průkaz železa v erytroblastech (sideroblasty), erytrocytech (siderocyty) a makrofázích (siderofágy) Ø Vyšetření některých enzymů (ALP, NE) - dg. a dif. dg. hematologických malignit

Průtoková cytometrie (flow cytometry) Ø technika umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzovat částice – buňky – v suspenzi. Umožňuje cíleně separovat buňky na základě jejich fyzikálních a chemických vlastností Ø FACS (Fluorescence-activated-cell-sorting) - třídění buněčné suspenze dle odlišného rozptylu světla a fluorescenční charakteristiky buňky

Ø Užití v hematologii: imunofenotypizace myeloproliferací a lymfoproliferací pomocí fluorescenčně značených monoklonálních protilátek

Děkuji za pozornost! Dotazy?