Preimplantaatiodiagnostiikka Jaana Lhdetie Lketieteellinen genetiikka Turun yliopisto PGD

Preimplantaatiodiagnostiikka Jaana Lähdetie Lääketieteellinen genetiikka Turun yliopisto

PGD taustaa ensimmäinen raportti 1990 laboratorioiden määrän kasvu hidasta, tällä hetkellä n. 50, 17 maassa tutkittavien tautien määrän kasvu nopeaa IWG perustettu 1990 ESHRE PGD Consortium 1997 valvoo, kehittää ja auttaa PGD laboratorioita

PGD: n tarve perinnöllisen taudin riski autosomaalisen dominantin, resessiivisen tai Xkromosomaalisen taudin riski kromosomipoikkeavuuden riski jo koetut raskauden keskeytykset jos raskauden keskeytys ei tule kyseeseen infertiliteetti iän aiheuttama aneuploidiariski

Alkiodiagnostiikan menetelmiä alkiobiopsia yleensä 4 -8 soluasteella 3. päivän kohdalla yksittäisen solun analysointi FISH-menetelmät PCR-menetelmät blastomeerin fuusioiminen hiiren tai naudan munasoluun kromosomianalyysi

PGD (ESHRE) 1997 -1998 323 pariskuntaa, 392 PGD-sykliä 302 alkionsiirtoa 66 raskautta yhteensä tietoja syntyneistä 79 PGDraskauden lapsesta raskauskomplikaatioita 17 % ennenaikainen synnytys 27 % yksisikiöisillä 13 % kaksosilla 73 %

Alkiodiagnostiikan tarkkuus (ESHRE) 61 sikiötä ja 11 vastasyntynyttä 21 istukkanäytettä, 38 lapsivesinäytettä yhteensä 68: ssa 70 tapauksesta tulos varmistui oikeaksi yksi trisomia 16 löytyi, haettu X-kromosomaalista incontinentia pigmenti tautia yksi dystrofia myotonica sikiö löytyi -> raskaudenkeskeytys (1. 4 % virhediagnoosin riski)

FISH-menetelmät indikaatioalueet: kromosomipoikkeavuudet sukupuolen kromosomikoettimia usein ainakin 5 13, määritys (X-kromos. taudit) 18, 21, X ja Y ongelmat: mosaikismi translokaatiot vaativat räätälöidyt koettimet

PCR-menetelmät strategioita yhden solun geenin PCR: ssä sisäkkäiset alukkeet (nested PCR) koko genomin monistus ensin, esim. PEP ongelmia alleelispesifinen monistuminen tai toisen alleelin “poisputoaminen” (ADO) huomattava kontaminaatioriski

Fluoresoiva PCR käytetään fluoresoivalla leimalla varustettuja alukkeita PCR-tuotteet analysoidaan esim. sekvensaattorilla alleelien kokoero todetaan, esim. CF, DM soveltuu monen taudin diagnostiikkaan herkkyys ja nopeus suurempi alleelispes. monistuminen vähäisempää

Kvantitatiivinen PCR monistetaan valikoituja kromosomispesifisiä mikrosatelliitteja multiplex-PCR käytetään fluoresoivia alukkeita analysoidaan PCR-tuotteet automaattisekvensaattorilla lasketaan piikkien pinta-alasta alleelien suhteet (normaali 1: 1, trisomia 2: 1)

Vertaileva genominen hybridisaatio CGH ei vielä käytössä 1) alkiosolusta monistetaan koko genomi ja leimataan esim. vihreäksi 2) terveen henkilön genominen DNA leimataan esim. punaiseksi molemmat hybridisoidaan yhdessä kromosomipreparaattiin lasilla mikroskoopin kuva-analysaattori laskee vihreä/pun. fluoresenssin suhteen: liikaa vihreää = esim. ylimääräinen kromosomi liikaa punaista = puuttuva kromosomi

DNA-sirut vaatii koko solun DNA: n monistamisen siru on yl. kaupallisesti tuotettu ja siinä on haluttu kokoelma tunnistettavien tautien mutaatioita, esim. Suomi-siru kromosomikäsivarsisiru DNA-passi (tulossa) (? ) siru luetaan automaattisella kuvaanalysaattorilla

Kromosomisto esiin uudella tavalla yhdestä solusta Willadsen ym. 1999 ihmisen blastomeeri fuusioidaan naudan munasolun kanssa – 2 translokaatiopotilasta – 87 solua 64 metafaasia – 1 terve sikiö Verlinsky ja Evsikov 1999 ihmisen blastomeeri fuusioidaan hiiren tsygootin kanssa 191 solua, 138 metafaasia (74 %)

Iän perusteella tehty alkiodiagnostiikka kyseessä pikemminkin seulonta joissakin keskuksissa jo tärkein indikaatioryhmä geneettinen riski suhteellisen pieni indikaatio: raskaaksitulon mahdollisuuden parantaminen lapsettomuushoidossa

PGD - tarve ja kustannukset arvioitu Englannissa 1999: tarjonta 128 PGD: a /vuosi kysyntä 256 PGD: a / vuosi saatavuus epätasaista henkilö- ja laitekustannukset perustaminen 139 000 puntaa käyttökulut/vuosi 55 000 puntaa

Kloonaaminen ja alkiodiagnostiikka alkiotutkijat ja genetiikot vastuussa päätettävä indikaatioista lailliset, moraaliset ja eettiset rajat kokonaisen ihmisen kloonaaminen kielletään ‘varaosien’ tuottamisen mahdollisuus sairaiden solujen, kudosten jopa kokonaisten elinten korvaaminen