DAPHTOXKIT F MAGNA Postupak 1 STANDARDNA PRIPREMA SLATKA

DAPHTOXKIT F MAGNA Postupak

1 STANDARDNA PRIPREMA – SLATKA VODA - ODMJERNA TIKVICA (2 lit) - BOČICA SA OTOPINOM KONCENTRIRANIH SOLI - DESTILIRANA (ili deionizirana voda)

2 ULITI SADRŽAJ 4 BOČICE KOJE SADRŽE OTOPINU KONCENTRIRANIH SOLI U +- 1 LITRU DESTILIRANE VODE U ODMJERNOJ TIKVICI OD 2 LITRE.

3 DOPUNITI TIKVICU DO OZNAKE “ 2 LIT” I ZRAČITI NAJMANJE 15 MINUTA

4 PRIPREMA “DAPHNIA EPHIPPIA” ODSTRANITI ALUMINIJSKU FOLIJU SA EPRUVETE KOJA SADRŽI JAJAŠCA ORGANIZMA.

5 ISPRAZNITI SADRŽAJ EPRUVETE U MIKROSITO

6 PROVJERITI DA SU SVA JAJAŠCA PRENESENA U SITO

7 DOBRO ISPRATI JAJAŠCA OBIČNOM VODOM (IZ SLAVINE)

8 PREMJESTITI JAJAŠCA U PETRI ZDJELICU SA SLATKOM VODOM

9 POSTAVITI PETRI ZDJELICU U INKUBATOR NA 72 SATA PRI TEMPERATURI OD 20 -22 o. C I POD KONSTANTNIM OSVJETLJENJEM OD 6000 LUX

10 PRIPREMA OTOPINA Npr. TEST NA OTPADNOJ VODI; 5 UZORAKA (C 1 -C 5) + JEDAN KONTROLNI POSTUPAK

11 ULITI 50 ml STANDARDNE (SLATKE VODE) U TIKVICE C 2, C 3, C 4 I C 5

12 ULITI UZORAK OTPADNE TEKUĆINE U TIKVICU C 1 DO OZNAKE 100 ml

13 PRELITI 50 ml OTPADNE TEKUĆINE IZ TIKVICE C 1 U MENZURU

14 PRELITI 50 ml OTPADNE TEKUĆINE IZ MENZURE U TIKVICU C 2 I DOBRO PROMUĆKATI.

15 50 ml PONOVITI PRETHODNI POSTUPAK RAZRJEĐIVANJA SA OSTALIM TIKVICAMA (npr. 50 ml iz C 2 u C 3 itd. )

16 PUNJENJE TEST PLOČE ULITI 10 ml VODE (SLATKA VODA) Control row U SVAKI UTOR KONTROLNOG REDA NA PLOČI

17 Test rows ULITI 10 ml KONCENTRIRANE OTPADNE TEKUĆINE U SVAKI UTOR PRIPADAJUĆEG RETKA OD C 5 DO C 1

18 NAKON 72 DO 80 SATI INKUBACIJE PROVJERITI STUPANJ IZLIJEGANJA ORGANIZAMA

19 POTREBNO JE MINIMALNO 120 TEK IZLEGNUTIH DAPHNIA DA BI SE PROVEO JEDAN TEST I ONE NE BI SMJELE BITI STARIJE OD 24 SATA

20 DVOSATNA PRED-HRANIDBA TESTNIH ORGANIZAMA UZETI JEDNU EPRUVETU SA SPIRULINOM I NAPUNITI JE SA VODOM (SLATKA VODA)

21 DOBRO PROTRESTI EPRUVETU SA SMJESOM SPIRULINE I IZLITI JE U PETRI ZDJELICU SA TEK IZLEGNUTIM DAPHNIAMA I LAGANO PROTRESTI DA SE RASPOREDI PO CJELOJ ZJDELICI

22 PRIJENOS DAPHNIA U UTORE NA TEST PLOČI - TEST PLOČA SA UTORIMA - “LIGHT BOX” SA PROZIRNIM STALKOM - MIKROPIPETA

23 PRENIJETI NAJMANJE 20 (aktivnih) DAPHNIA U UTOR ZA ISPIRANJE NA TEST PLOČI U KONTROLNOM RETKU.

24 ps cu g n i s in R PRENIJETI 20 DAPHNIA (minimalno) U SVE OSTALE UTORE ZA ISPIRANJE S CILJEM POVEĆANJA KONCENTRACIJE OTPADNE TVARI

25 Te st ro w PRENIJETI TOČNO 5 DAPHNIA IZ SVAKOG UTORA ZA ISPIRANJE U 4 UTORA PRIPADAJUĆEG RETKA

26 DA BI SE IZBJEGLO POVRŠINSKO PLUTANJE DAPHNIA ZA VRIJEME PRIJENOSA POŽELJNO JE UMETNUTI VRH MIKROPIPETE U TEKUĆINU I NE ISPUŠTATI ORGANIZME NA POVRŠINU TEKUĆINE

27 POSTAVITI KOMAD PARAFILMA NA TEST PLOČU, ZATIM POSTAVITI POKLOPAC I DOBRO GA PRIČVRSTITI

28 INKUBACIJA TEST PLOČE INKUBIRATI TEST PLOČU NA 20 +- 2 o. C U MRAKU

29 OČITANJE REZULTATA NAKON 24 I 48 SATI INKUBACIJE POSTAVITI TEST PLOČU NA OSVJETLJENI STOL I BILJEŽITI BROJ UGINULIH I NEPOKRETNIH DAPHNIA

30 DAPHNIE KOJE NE MOGU PLIVATI NAKON LAGANOG MUĆKANJA TEKUĆINE OKO 15 SEKUNDI SMATRAJU SE NEPOKRETNIM (čak i ako mogu još uvijek micati ticalima)

31 -ZABILJEŽITI REZULTATE NA OBRAZAC -IZRAČUNATI UKUPAN BROJ UGINULIH ILI NEPOKRETNIH DAPHNIA ZA SVAKU KONCENTRACIJU OTPADNE TEKUĆINE -IZRAČUNATI PROSJEČAN, OČEKIVANI REZULTAT U POSTOCIMA.