X MEETING NAZIONALE SIFC DELLA SOCIETA ITALIANA PER

X MEETING NAZIONALE SIFC DELLA SOCIETA’ ITALIANA PER LO STUDIO DELLA FIBROSI CISTICA XX CONGRESSO ITALIANO DELLA FIBROSI CISTICA Isolamento di Scedosporium complex dal tratto respiratorio dei pazienti con fibrosi cistica: comparazione del risultato delle colture con terreni selettivi e non (Progetto 2013 -2015 SIFC) L. Cariani, D. Girelli, A. Biffi, D. Guarneri, V. D. Iula, N. Ravenni, P. Cocchi, D. Dolce, E. Fiscarelli, G. Ricciotti, E. Manso, P. Morelli, S. Rapagnani, M. L. Garlaschi, E. Torresani. Salerno 29 ottobre-1 novembre 2014

Scedosporium Complex • Fungo filamentoso • Ubiquitario (acqua e ambiente) • Non documentata la trasmissibilità da paziente • Patogeno opportunista emergente in FC 5 specie distinte: • S. apiospermum sensu stricto (Pseudoallescheria apiosperma) • S. boydii (P. boydii) • S. aurantiacum • S. dehoogii • P. minutispora

Scedosporium Complex

Scedosporium Complex • Dopo A. fumigatus è il principale agente fungino isolato dalle vie respiratorie di pazienti FC (Prevalenza dal 3. 4% al 15, 9%) • Colonizzazione cronica associata ad un grave danno polmonare • Reazioni broncopolmonari allergiche • Controindicazioni al trapianto di polmone • Infezione invasiva localizzata nei pz trapiantati di polmone

Studio retrospettivo sull’isolamento di muffe durante gli anni 2009 e 2010 da espettorati di pazienti con FC.

Prevalenza di Scedosporium complex negli anni 2009 e 2010 da espettorati di pazienti con FC Centro. Iso N° pazienti positivi / N° pazienti regolari al follow up 2009 2010 1 3/98 4/98 2 2/262 1/262 3 17/505 20/509 4 0/288 0/303 5 11/279 13/280 6 0/81 0/86 7 0/208 0/224 8 2/68 9 0/48 0/52 35/1. 837 40/1. 882 Totale 4% 3. 9% 4. 6% 2. 9%

Scedosporium Complex Isolamento su terreno semi-selettivo Sce. Sel Germania: 11. 9 % (Horré R et al. ; Mycoses 2010) Australia : 15. 9% (Blyth CC et al. , JCM 2010) Francia: 14, 3% ( Zouhair R et al. , Med Mycol 2013) Italia (studio retrospettivo senza terreno selettivo Sce. Sel+)~ 3. 85 % (Manso E et al, , 2 nd Meeting ECMM ⁄ISHAM Working Group in FRI-CF, Angers, 2011)

Scedosporium Complex Prevalenza pz FC = 14, 3% Pseudallescheria boydii 62% Scedosporium apiospemun 24% Scedosporium aurantiacum 10% Pseudallescheria minutispora 4% Tutte le specie sono in grado di colonizzare cronicamente il tratto respiratorio dei pz FC Differente sensibilità ai vari antimicotici a seconda della specie

Il terreno Sce. Sel+ è stato preparato dalla ditta Liofilchem secondo la formulazione riportata in Tabella. ●

Centri partecipanti FC ● 7 Centri FC coinvolti nello studio

Scopo principale dello Studio ●Comparare la crescita di Scedosporium complex (SC) su terreno selettivo Sce. Sel+ agar, con quella su terreni selettivi per B. cepacia complex (BCSA o B. cepacia medium) e micologici (Sabouraud +cloramfenicolo) ●Valutare se la bassa prevalenza di SC, evidenziata nello studio precedente, sia attribuibile al non utilizzo del terreno Sce. Sel + o ad una effettiva inferiore prevalenza di SC in Italia rispetto ad altri paesi europei

Materiali e Metodi I q CRITERI DI INCLUSIONE Pz FC in grado di espettorare q TIPOLOGIA CAMPIONE Campioni (espettorato) provenienti dalle basse vie respiratorie dei pazienti FC q NUMEROSITA’ CAMPIONE Analisi di circa 2. 000 espettorati in un anno q OBIETTIVO SECONDARIO Conservazione dei ceppi isolati e identificazione mediante sequenziamento

Materiali e Metodi III Tabella raccolta dati • Lettura e valutazione della numerosità espressa UFC di ogni singolo microrganismo dopo 3, 8 e 15 giorni

Risultati I ● 2101 pazienti afferenti ai centri (1087 maschi e 1014 femmine, età mediana = 20 anni) ● ad oggi sono stati arruolati 736 pazienti e processati 827 espettorati

Risultati II • Campioni positivi per Scedosporium complex su Sce. Sel+ = 44 (5. 32%) • Campioni positivi per Scedosporium complex su Sabouraud selettivo = 39 (4. 71%) • Campioni positivi per Scedsporium complex su terreno per B. cepacia = 14 (1, 7%) • Campioni positivi solo su Sce. Sel+ = 5 (0. 6 %) Sabouraud BCSA Milano Napoli Firenze Roma Genova Teramo N tot % Pos su sce. Sel 14 2 8 14 3 3 44 5, 32 Pos su Sab 13 2 6 13 3 2 39 4, 71 Pos su BCSA 10 2 2 0 0 0 14 1, 7 1 0 2 1 0 1 5 0, 6 Pos solo su sce. Sel Sce. Sel+

Risultati II • Nel 30% dei campioni è stata rilevata su Sce. Sel+ crescita di batteri Gram negativi, prevalentemente P. aeruginosa fenotipo mucoide. • Nel 50% dei casi è stata rilevata Candida spp e solamente nel 2% dei casi A. fumigatus %Milano %Napoli %Firenze %Roma %Genova %Teramo Batteri gram negativi 35 25 25 17 50 25 Candida spp 60 50 50 50 Geotricum capitatum 0 0 0 1, 8 0 0 A. fumigatus 4 0 2 0, 6 4 0

Conclusioni • La valutazione dei risultati mette in evidenza che solo 5 campioni (0. 6%) in più sono risultati positivi per SC su Scesel+ rispetto a Sabouraud. • Questo esiguo numero potrebbe essere spiegato tenendo conto sia di una scarsa selettività di Sce. Sel+ rispetto a Gram negativi, quali P. aeruginosa, sia di una effettiva minore prevalenza di SC nella popolazione FC italiana rispetto a quella europea. • Al contrario il terreno ha dimostrato una buona selettività verso A. fumigatus e verso altre specie di miceti filamentosi. Nel prosieguo dello studio, per verificare la prima ipotesi e ridurre o eliminare la considerevole interferenza dei Gram negativi sulla eventuale crescita di SC, la ditta produttrice fornirà ai centri un nuovo lotto di Sce. Sel+ addizionato di una concentrazione maggiore di cloramfenicolo.

Conclusioni Grazie per l'attenzione!