Mikroskopi Varfr mikroskop m Celler och cellstruktur 10

Mikroskopi

Varför mikroskop? m Celler och cellstruktur 10 -3 Mikroorganism 1 mm 10 -4 Äggcell (0, 150, 2) Protozoer 10 -5 10 -6 Ljusmikroskop 1 mm Mitokondrier Bakterier 10 -7 Elektronmikroskop 10 -8 10 -9 10 -10 Ribosomer Plasmamembran 1 nm Ribonukleo protein Aminossyra väteatom virus

Olika linstyper • Konvexa linser • Konkava linser • Samlar strålar mot fokus, brännpunkt • kan ge en reell bild • kan användas som lupp, virtuell bild • används som läsglas • sprider ljusstrålarna • ger en virtuell bild • används för närsynthet

Princip för http: //www. microscopyu. com/tutorials/java/kohler/index. html

Bildkonstruktion

Skarp bild: För varje punkt i föremålet finns en motsvarande punkt i bilden. • Reella bilder kan fångas på en skärm, kan fås av konvex lins, jmf fotografi. • Virtuella bilder, som ej kan fångas upp av skärm, fås av luppen, glasögon, jmf spegelbild.

Olika kvalitets begrepp hos en bild • Upplösning: Mått på hur litet ett avstånd mellan två punktformiga föremål kan vara, utan att dess bild flyter ihop. Litet avstånd för hög upplösning. • Kontrast: Hur tydligt ett objekt framstår mot bakgrunden. • Skärpedjup: Mått på hur bra föremål, som är separerade i djupled, kan avbildas skarp samtidigt. Hög förstoring ger litet skärpedjup

Preparering för mikroskopering Principle & use of the Leica SP 1600 saw microtome Application Report (Page 2 of 5) Preparat för ljusmikroslop c: a 6 – 8 mm Infärgas med färg som binder till olika strukturer med olika affinitet Preparat för TEM c: a 40 – 80 nm Infärgas med ämnen som innehåller tungmetaller t. ex uran (uranylacetat) eller bly (blycitrat)

Mikroskop tekniker • Ljusmikroskop Ljusfälts-mikroskop Mörkfälts-mikroskop Faskontrast-mikroskop Fluorescens-mikroskop Confokal-mikroskop Polarisations-mikroskop • Elektronmikroskop SEM (Scanning Electron Microscope) TEM (Transmission Electron Microscope)

Ljusfältsmikroskop Infärgning för att få ökad kontrast Skin section stained with haematoxylin and eosin showing sebaceous glands and hair follicles

Ljusfältsmikroskop Ljusabsorption

Ljusfältsmikroskop

Mörkfältsmikroskop Ljusreflexion Ingen infärgning behövs

Mörkfältsmikroskop Live and dry blood darkfield microscopy analysis Brina Eidelson ANP, MLDUK

Faskontrastmikroskop Ljuset ur fas

Faskontrastmikroskop preparat 0: te ordningen 1: a ordningen Ljuset en kvarts våglängd ur fasplatta Ljuset halv våglängd ur fas

Faskontrastmikroskop The urine contains epithelial cells, red and white blood cells and baccilli shaped bacteria. Grando, Danilla

Faskontrastmikroskop

Luciferin-luciferas komplex En ljusbringande substan och ett bakteriellt enzym (NADH konc. 0, 1 n. M – 1 p. M)

Eldfluga – Luceferas system ATP konc ner till 0, 001 p. M

Fluorescens

Fluorescensmikroskop Exitation Acredine Orange Snabb test av Malaria 440 480 Emission 520 650

Fluorescensmikroskopi objektiv UVlampa

Fluorescensmikroskop

Konfokalmikroskop

Bildkonstruktion i konfokalmikroskop

Polarisationsmikroskopi 1 2 Dubbelbrytande amyloidfiber

Polarisationsmikroskop objekt polarisations filter

TEM-bilder av Celler 200 nm

SEM mitokondrie (200000 X) Guldplatinerat Biol. Inst. Shizuoka Univ.

SEM acept. asu. edu/Pi. N/rdg/elmicr. shtml

Elektronmikroskop (TEM)

Upplösning för olika tekniker TECHNIQUE eye optical microscope LIMITS ”praktiskt” retina diffraction of light diffraction of electrons transmission electron microscope diffraction of electrons near-field scanning probe microscopies "aperture" size scanning electron microscope 1 nm = 10 – 6 mm RESOLUTION 200000 nm 70 nm 300 nm 3 nm 0, 1 nm 0. 01 - 10 nm

Repetition: mikroskoptyper som bygger på ljusinteraktion

Repetition elektronmikroskop provet ”belyses” med ljus TEM : Transmission Electron Microscope Bygger på att elektroner bestrålning där en del av electronerna absorberas i materialet SEM: Scanning Electron Microscope Bygger på spridning av electroner mot en plattinerad yta

SEM Damm tuss 800 x

Bloodceller

SEM