I CROMOSOMI Cromosomi due eliche identiche chiamate cromatidi
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I CROMOSOMI
• Cromosomi due eliche identiche chiamate cromatidi gemelli. • Cromatidi gemelli identici fra di loro, uniti a livello del centromero • I cromosomi hanno due bracci, uno corto (p= petite) e uno lungo (q)
2 n=40 2 n=46 2 n=64 2 n=88 2 n=10 2 n=60 ? 2 n=38 2 n=78
2 n=268 Agrodiaetus (farfalla) 2 n=2 Formicidae (formica)
Classificazione dei cromosomi: p e q sono i due bracci del cromosoma divisi dal centromero p = braccio corto q = braccio lungo Acrocentrici: centromero in posizione subterminale (in prossimità di una delle estremità) Telocentrici: centromero in posizione terminale
Classificazione dei cromosomi: Submetacentrici: centromero in posizione submediana (spostato verso una delle due estremità) Metacentrici: centromero in posizione mediana
Cariotipo: corredo cromosomico di un individuo o della specie cui appartiene. Nell’uomo è costituito da 23 paia di cromosomi. Cariogramma: rappresentazione schematica del corredo cromosomico di un individuo.
ANALISI DEL CARIOTIPO • Cromosomi in metafase (mitosi) • I cromosomi sono sistemati in base: • Centromero • Colorazione della cromatina
I cromosomi sono visibili solo durante la divisione cellulare, sono quindi studiati in cellule in coltura che vengono stimolate a dividersi e bloccate in metafase (uso di sostanze che impediscono la formazione del fuso mitotico)
Il materiale biologico più comunemente usato su cui eseguire un’analisi citogenetica è rappresentato da: Linfociti Fibroblasti Cellule del liquido amniotico Cellule dei villi coriali Tessuto Tumorale
L’ analisi citogenetica è divisibile tecnicamente in PRELIEVO DEL CAMPIONE
L’ analisi citogenetica è divisibile tecnicamente in PRELIEVO DEL CAMPIONE COLTURA DELLE CELLULE
L’ analisi citogenetica è divisibile tecnicamente in PRELIEVO DEL CAMPIONE COLTURA DELLE CELLULE PROCESSAZIONE E FISSAZIONE
L’ analisi citogenetica è divisibile tecnicamente in PRELIEVO DEL CAMPIONE COLTURA DELLE CELLULE PROCESSAZIONE E FISSAZIONE BANDEGGIO E ANALISI
COLTURA SEMINARE 72 ore a 14 gg ANALIZZARE BANDEGGIARE PREPARARE VETRINI
Allestimento delle colture e dei preparati Terreno di coltura+colchicina Colchicina • Alcaloide vegetale • Inibisce la polimerizzazione dei microtubuli e la formazione del fuso mitotico
Allestimento delle colture e dei preparati Soluzione ipotonica per distendere i cromosomi Fissativo (alcol metilico o acido acetico) disidratazione e fissaggio
• Scelta della tecnica di bandeggio G Q R • Analisi al microscopio a luce normale o fluorescenza, dotato di sistema fotografico e/o software per analisi
TECNICHE DI BANDEGGIO Tecniche Classiche (bande distribuite su tutto il cromosoma) • Bandeggio Q (1958) • Bandeggio G (1971) • Bandeggio R Tecniche Speciali (marcano numero ristretto di strutture) • Bandeggio C (1978) • Bandeggio DA-DAPI • Bandeggio NOR (RNA, ribosomi) (1973)
BANDEGGIO G (GTG/GHG) • Tripsina (digestione delle proteine) / Trattamento Termico • Colorazione con Giemsa • Colorazione alternata bande chiare/scure Bande chiare: ricche in GC Bande scure: ricche in AT (proteine associate più facili da denaturare) Bandeggio G, ottenuto colorante Giemsa e con tripsina. Il bandeggio G è caratterizzato da un’alternanza di bande chiare e scure. Le bande chiare corrispondono a regioni caratterizzate da attività trascrizionale, replicazione precoce, basso contenuto di DNA ripetuto e sensibilità alla DNasi I. Le bande più scure corrispondono alle zone ricche in Adenina e Timina, relativamente povere di geni, e risultano quindi corrispondenti e sovrapponibili alle bande Q. Il potere di risoluzione di questo tipo di colorazione è alquanto grossolano, infatti una banda citogenetica ha una dimensione media di circa 5 Mb (5 milioni di basi) e può contenere centinaia di geni.
telomero centromero bande G SCURE ricche in AT pochi geni bande G CHIARE ricche in GC molti geni telomero
METAFASE Low power x 100 High power x 1000
Cariotipo umano di un individuo di sesso femminile
Cariotipo umano di un individuo di sesso maschile
• Identificare i cromosomi con più facilità in base a forma e colorazione
46, XX 46, XY
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