I cromosomi politenici di Drosophila la nascita della
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I cromosomi politenici di Drosophila: la nascita della citogenetica
Gli stadi di sviluppo di Drosophila melanogaster
I cromosomi politenici di Drosophila melanogaster • I cromosomi politenici, detti anche cromosomi giganti, si trovano nelle ghiandole salivari, nell’intestino e nei tessuti adiposi dei ditteri • Osservati per la prima volta da Balbiani (1881) • Si formano in seguito a endomitosi (ripetuti cicli di replicazione non seguiti da segregazione) • Si trovano in uno stato di interfase • I cromosomi omologhi sono appaiati • Sono uniti a livello di una regione centrale detta cromocentro (costituita da eterocromatina) • Presentano un bandeggio naturale (bande scure e bande chiare)
I cromosomi politenici di Drosophila melanogaster
La mappa dei politenici di Calvin Bridges 102 divisioni (1 -102) 6 sottodivisioni (A-F) bande X 1 -20; 2 L 21 -40 2 R 41 -60 3 L 61 -80 3 R 81 -100 4 101 -102
I puff sono delle regioni in cui la cromatina si decondensa permettere la trascrizione
I puff cambiano durante lo sviluppo larvale
I puffs sono sede di attiva trascrizione • Puff diversi possono essere visibili in fasi diverse dello sviluppo larvale e in tessuti diversi dello stesso individuo • Puff stadio-specifici e tessuto-specifici • Una delle prime evidenze di controllo dell’espressione genica negli eucarioti
Utilizzo pratico dei cromosomi politenici Grazie alla presenza di un bandeggio naturale i cromosomi politenici rappresentano un ottimo strumento sperimentale per: • Analisi di riordinamenti strutturali dei cromosomi • Mappatura per delezione • Mappatura di sequenze di DNA (mediante ibridazione in situ) • Microdissezione • Localizzazione di proteine cromosomiche (mediante immunofluorescenza indiretta)
Analisi citologica di delezioni cromosomiche
Mappatura per delezione Df 1 Df 2 Df 3 Individui mut/Df 1 hanno fenotipo mutante mentre individui mut/Df 2 e mut/Df 3 hanno fenotipo selvatico il gene di interesse mappa nella regione 3 B 1 -2
Ibridazione in situ con isotopi radioattivi
Ibridazione in situ fluorescente (FISH) Mappatura di sequenze di DNA
La microdissezione Fragments from section 3 X chromosome were dissected with a micromanipulator. The dissected region contains approximately 50 Bridges bands, equivalent to approximately 1, 000 kb of genomic DNA. The DNA was extracted, cut, ligated and cloned. From about 10 pg of DNA we obtained 80 recombinant clones, a sample of which were analysed and shown to contain Drosophila DNA which hybridises in situ to the region of section 3 of the X chromosome.
La microdissezione Fragments from section 3 of X chromosome were dissected with a micromanipulator. The dissected region contains approximately 50 Bridges bands (1, 000 kb of genomic DNA). The DNA was extracted, cut, ligated and cloned. From about 10 pg of DNA we obtained 80 recombinant clones which hybridises in situ to the region of section 3 of the X chromosome.
Studio della distribuzione di proteine cromosomiche mediante immunofluorescenza
La preparazione dei cromosomi politenici
Le ghiandole salivari si trovano nella parte anteriore della larva
La preparazione dei cromosomi politenici Schiacciamento in ac. acetico osservazione dissezione
Il risultato finale
E ORA…BUON LAVORO!
