stav patologickej fyziolgie Lekrska fakulta UPJ Koice Patofyziolgia

Ústav patologickej fyziológie Lekárska fakulta UPJŠ Košice Patofyziológia reaktívnych foriem kyslíka (ROS) František Ništiar

Voľné radikály a antioxidanty Ako spoznáme voľný radikál? n Reaktívne formy kyslíka a dusíka n Sú voľné radikály vždy pohromou? n Čo je oxidačný stres? n Čo je antioxidant? Ktoré poznáme? n Ako vieme oxidačný stres kvantifikovať? n Ochorenia spojené s oxidačným stresom n

Ako sa to začalo ¯ 1775 - Priestley: objav O 2 pozorovanie toxických účinkov O 2 ¯ 1900 - Gomberg: objav trifenylmetyl radikálu ¯ Do 1950/60: minimálna pozornosť bola venovaná biologickým účinkom voľných radikálov a reaktívnych foriem kyslíka

Dôkaz o existencii ROS ¯ 1954 - Gerschman et al. : Zistenie podobnosti medzi žiarením a toxicitou kyslíka ¯ 1969 - Mc. Kord a Fridovich: Objav superoxid ¯ ¯ dismutázy a predpovedanie existencie endogenného superoxidu 1973 - Babior et al. : Zistenie vzťahu medzi tvorbou superoxidu a bactericídnou aktivitou neutrofilov 1981 - Granger et al. : Zistenie vzťahu medzi lokálnou tvorbou ROS a ischemicko-reperfúznym poškodením čriev

¯ Voľné radikály majú jeden alebo viac nespárovaných elektrónov na vonkajšom orbitály, majú symból [ ]. Následkom toho majú zvýšenú reaktivitu s inými molekulami. Táto reaktivita je daná tým, že môžu ľahko prijať alebo dať elektróny. ¯ Prevalencia kyslíka v biologických systémoch je to, kvôli čomu je kyslík centrálnym radikálom a má viacero bežných typov. ¯ O 2 pôsobí v procesoch tak, že je stredobodom metabolizmu v aeróbnom živote, ako terminálny akceptor elektrónov sa redukuje na vodu. Prenos elektrónov na kyslík vedie k vzniku reaktívnych medziproduktov.

Čo je voľný radikál? Molekula, atóm, alebo ión schopný samostatnej existencie, ktorý obsahuje aspoň jeden nespárovaný elektrón radikál ión n O 2 • – molekula

Superoxid - zdroje v tele n Únik elektrónov na kyslík u u n u u u n fagocyty (respiračné vzplanutie) nefagocytárne bunky Niektoré enzýmy u n dýchací reťazec v mitochondriách (1 -2% celkovej spotreby O 2) iné podobné redoxné systémy, napr. mikrozomálny cytochróm P 450 monooxygenáza NAD(P)H oxidáza u n O 2 • – xantínoxidáza cyklooxygenáza lipooxygenáza Reakcie Fe. II-hemoglobínu s kyslíkom Autoxidácia rôznych látok (askorbát, glutatión a iné tioly, katecholamíny)

Superoxid n Vlastnosti: u u u n O 2 neveľmi reaktívny, oxidačné aj redukčné činidlo obmedzená možnosť prestupu cez membrány (len cez aniónové kanály alebo vo svojej protónovej forme) uvoľňuje železo z Fe-S clusterov (zhlukov) Osud: u dismutácia O 2 • – + 2 H+ O 2 + H 2 O 2 u • – reakcia s oxidom dusnatým NO • + O 2 • – OONO– (peroxynitrit)

Peroxid vodíka n Tvorba v tele: u H 2 O 2 dismutácia superoxidu (spontánna alebo katalyzovaná superoxiddismutázou) O 2 • – + 2 H+ O 2 + H 2 O 2 u priamo činnosťou niektorých enzýmov: t xantinoxidáza t monoaminooxidáza (MAO)

Peroxid vodíka n Vlastnosti: u u n H 2 O 2 nie je radikál voľne prestupuje cez biologické membrány sám osebe je celkom nereaktívny ale rýchlo reaguje s redukovanými prechodnými kovmi ako železo a meď (Fentonova reakcia) Osud: Fentonova reakcia: hydroxylový radikál u H 2 O 2 + Fe 2+ OH– + OH • + Fe 3+ u bezpečne odstránený glutatiónperoxidázou alebo katalázou

Hydroxylový radikál n Vznik v tele: u • OH ionizačné rariadenia: H 2 O H • + OH • Fentonova reakcia: hydroxylový radikál u H 2 O 2 + Fe 2+ OH– + OH • + Fe 3+ n Vlastnosti: u extrémne reaktívny. Poškodzuje biomolekuly blízko miesta svojho vzniku

Oxid dusnatý u Vznik v tele: t • NO No syntázová reakcia: L-arginín + O 2 + NADPH L-citrulín NADP + NO • t Tri rôzne NO syntázy: • NOS I (neuronálna, koštitutívna) • NOS II (fagocyty, induktabilná) • NOS III (endotelová, konštitutívna

Oxid dusnatý u Vlastnosti: • NO plynný radikál t reakcia s kyslíkom na dusitan (pomalá in vivo): t 4 NO • + O 2 + 2 H 2 O 2 NO 2– + 4 H+ reakcia s hemovým železom hemoglobínu (…fyziologická inaktivácia): Hb-Fe 2+-O 2 Hb-Fe 2+-OONO Hb-Fe 3+ + NO 3– t reakcia s hemovým železom guanylátcyklázy (…fyziologické účinky, relaxácia hladkého svalstva apod. ): GC-hem-Fe 2+ + NO • GC-hem-Fe 2+-NO t

Oxid dusnatý u Vlastnosti (pokračovanie): t • NO reakcia so sulfhydrylovou skupinou glutatiónu atď. na nitrozotiol (…transport NO): NO • + GSH GSNO + H+ + e– reakcia so superoxidom na peroxynitrit a konečne hydroxylový radikál (…toxicita): NO + O 2 • – OONO– (peroxynitrit) t OONO– + H+ HOONO OH • + NO 2 • kys. peroxydusitá t

¯ V súčasnosti sa skôr používa termín reaktívne formy kyslíka (RFK, ROS) ako radikály kyslíka lebo singletový kyslík (jeden z foriem), hydroxylová skupina, kyselina chlórna, peroxid vodíka a epoxidové metabolity endogénnych lipidov a xenobiotík obsahujú funkčnú skupinu s reaktívnym kyslíkom, ale nie sú radikály a nemusia reagovať s biologickými tkanivami radikálovými reakciami. ¯ Molekulový kyslík je biradikál, majúci dva nespárené elektróny stejného spinu. Ak je terminálnym akceptorom elektrónov redukuje sa na vodu, kyslík pôsobí v centrálnych metabolických procesoch aeróbneho spôsobu života.

Tvorba ROS

tripletový kyslík 3 O 2 excitácia 1 O 2 singletový kyslík e– superoxid • O 2– H+ • HO 2 hydroperoxyl e– peroxidový ión O 22– H+ HO 2– H+ H 2 O 2 e– hydrogénperoxidový ión hypotetický produkt • O 23– 2 H+ H 2 O oxén • O– H+ • OH hydroxylový radikál e– oxid O 2– 2 H+ H 2 O

Tvorba reaktívnych foriem

Reaktívne formy kyslíka a dusíka (RONS) ROS Voľné radikály: superoxidový anión O 2 - RNS . oxid dusnatý NO. hydroxylový radikál OH oxid dusičitý NO 2 . peroxyl ROO . alkoxyl RO . hydroperoxyl HO 2 . peroxid vodíka H 2 O 2 nitrozonium NO+ kyselina chlorná HCl. O nitroxyl NO– Látky, ktoré nie ozón O kyselina dusitá HNO 3 2 1 sú voľné singletový kyslík O 2 oxid dusitý N 2 O 3 oxid dusičitý N 2 O 4 radikály: nitronium NO 2 + peroxynitrit ONOO– alkylperoxynitrit ROONO

kaskáda (ROM cyklus) 4 O 2 v prítomnosti NADPHO 4 O 2 4 e- XO Cytochrómová kaskáda 4 O 2 - 4 O 2. - 4 e 4 O 224 e- SOD 4 O 234 e 2 H 2 O 2 + 2 O 2 4 O 24 - cytochróm c-oxidáza Reaktívne metabolity kyslíka 16 H+ KAT 2 H 2 O + 4 O 2 + 4 H+ + 4 e- O 2 2 H 2 O + 3 O 2 8 H 2 O 4 O 2 + 16 H+ + 16 e 8 H 2 O (výťažok pre tvorbu ATP)

Polčas niektorých reaktívnych foriem Reaktívne formy Polčas (s) Hydroxylový radikál ( OH) 10 -9 Alkoxylový radikál (RO ) 10 -6 Singletový kyslík (1 O 2) 10 -5 Peroxynitritový anión (ONOO-) 0. 05 – 1. 0 Peroxylový radikál (ROO ) 7 Oxid dusnatý ( NO) 1 - 10 Semichinónový radikál minúty/hodiny Peroxid vodíka (H 2 O 2) spontán. hodiny/dni (urýchlené enzýmami) Superoxidový anión (O 2 -) spontán. hodiny/dni Kyselina chlórna (HCl. O) Závisí od substrátu (urýchl. SOD na 10 -6) Fyziol. konc. (mol/l) 10 -9 - 10 -7 10 -12 - 10 -11

¯ ROS prítomné v cicavčích tkanivách sú endogenného aj exogenného pôvodu. Ich tvorba je esenciálna pre normálnu funkciu alebo metabolizmus väčšiny cicavčích buniek. ¯ Približne 90% všetkého kyslíka sa spotrebuje bunkami za katalytickej redukcie štyrma elektrónmi za zisku dvoch molekúl vody. Dnes už je jasné, že sa kyslík môže redukovať aj menším počtom elektrónov v enzýmových a neenzýmových reakciách. ¯ ROS sú, ale aj deštruktívne ak uniknú prísnej kontrole. Bunky majú vyvinuté batérie ochranných mechanizmov a molekúl na zabránenie a opravu poškodení vyvolaných oxidačným stresom.

Pôvod ROS Tvorba v organizme cicavcov Zdroje endogenné . NO exogenné synt. prostaglandinov radiácia, ultrazvuk dýchací reťazec fajčenie cigariet autooxidácia lieky O 2 e- OONOe. - O 2 HOONO NO 2. e-. e. OH H 2 O 2 OH H 2 O O 2. - O 2 Fe 2+ Fe 3+ H+ VOĽNÉ RADIKÁLY fagocyty teplo oxyhemoglobín pesticídy oxidatívne enzýmy infekcie akumulácia reduk. metab. hyperoxia, záťaž fyz. polutanty vo vzduchu (NOx, O 3) H+ Cl- Myeloperoxidáza H 2 O HOCl 1 O 2 H 2 O + Cl-

Odkiaľ pochádzajú voľné radikály? Hlavný producenty ROS : membránovo viazané enzýmy popr. koenzýmy, flavínové štruktúry, hemové koenzýmy, enzýmy s Cu v aktívnom centre 1. respiračný reťazec mitochondrií : predevšetkým superoxid a následne H 2 O 2 n cca. 1 - 4% O 2 vstupujúceho do respirač. reťazca (hlavne komplexy I a III)

Odkiaľ pochádzajú voľné radikály? II 2. endoplazmatické retikulum vznik superoxidu (cytochróm P- 450) 3. špecializované bunky (leukocyty, makrofágy) produkcia superoxidu NADP-oxidázou 4. Oxidácia hemoglobínu na methemoglobín (erytrocyt je „nabitý“ antioxidantmi)

Skúsme svoje závity preorientovať na riešený problém

Funkcia voľných radikálov v zdravom organizme Nástroj oxidáz a oxygenáz n cytochrómoxidáza (toxické medziprodukty, H 2 O 2 a superoxid, viazané na enzýme) n monoxygenázy (oxygenázy so zmiešanou funkciou) - aktivujú O 2 v ER pečene alebo v mitochondriách nadobličiek; hydroxylácia

Funkcia voľných radikálov v zdravom organizme II ROS a RNS proti bakteriám n enzýmový komplex NADPH-oxidáza leukocytov a makrofágov n myeloperoxidáza - katalýza reakcie H 2 O 2 + Cl- + H+ = HCl. O + H 2 O

Funkcia voľných radikálov v zdravom organizme III signálne molekuly primárny posol sekundárny posol info sieť n redoxný stav bunky ovplyvňuje funkciu tejto siete n redoxný stav: kapacita antioxidačného systému, dostupnosť redukčných ekvivalentov, intenzita oxidačnej záťaže (RONS) ROS: sekundárny posly n

Imunitná ochrana vs. regulácia masívna produkcia ROS ako nástroj imunitnej ochrany x indukcia zmien nízkych koncentrácií ROS, ktoré sú pravdepodobne regulačným mechanizmom

Enzymatické zdroje ROS Xantínoxidáza hypoxantín + 2 O 2 ® xantín + O 2. - + H 2 O 2 NADPH oxidáza NADPH + O 2 ® NADP+ + O 2. Amínooxidáza R-CH 2 -NH 2 + H 2 O + O 2 ® R-CHO + NH 3 + H 2 O 2 Myeloperoxidáza tvorba per. . . oxokyseliny H 2 O 2 + X- + H+ ® HOX + H 2 O NADH oxidázová reakcia Hb(Mb)-Fe 3+ + ROOH ® zlučenina I + ROH zlučenina I + NADPH ® NAD + zlučenina II + NADH ® NAD + E-Fe 3+ NAD + O 2 ® NAD+ + O 2. Aldehydoxidáza 2 R-CHO + 2 O 2 ® 2 R-COOH + O 2. Dihydroorotát dehydrogenáza dihydroorotát + NAD + O 2 ® NADH + O 2. - + kyselina orotová

Neenzymatické zdroje ROS a autooxidačné reakcie Fe 2+ + O 2 ® Fe 3++ O 2. Hb(Mb)-Fe 2+ + O 2 ® Hb(Mb)-Fe 3++ O 2. katecholamíny + O 2 ® melanín + O 2. Redukovaný flavín leukoflavín + O 2 ® flavín semichinón + O 2. Koenzým Q-hydrochinón + O 2 ® koenzým Q (ubichinón) + O 2. tetrahydropterín + 2 O 2 ® dihydropterín + 2 O 2. -

Kosť je predsa kosť, radikál len radikál

¯Do 1960 s, voľné radikály neboli považované za dôležité pre fyziológiu a patofyziológiu cicavčích buniek. ¯Objavy existencie superoxid dismutázovej (SOD) aktivity v cicavčích bunkách v 1969 Mc. Cord a Fridovich; súvislosť baktericídnej aktivity neutrofilov s tvorbou superoxidového radikálu (O 2. -) Babior a spol. 1973; spojitosť voľných radikálov s početnými fyziologickými a patofyziologickými procesmi. ¯O dekádu neskôr, 1981, Granger a spol. postavili hypotézu o úlohe týchto reaktívnych foriem v reperfúznom poškodení po črevnej ischémii.

Funkcia RONS v zdravom organizme • fagocyty (likvidácia infekčných agens) • funkcia signálnych molekúl (ovplyvnenie napr. syntézy cytokínov, regulátorov proliferácie ai. ) • účasť na uvoľňovaní a premene energie (dýchací reťazec) • súčasť enzýmových mechanizmov (dýchací reťazec - oxidázy, hydroxylácia endogenných látek a xenobiotík - oxygenázy)

ROS sú prísne kontrolované výsledkom čoho je rovnováha medzi ich tvorbou a elimináciou Enzýmy: SOD (c, m) , GPX (c, m), CAT (c, p) Neenzýmové antioxidanty: vitamíny (E, A, C), tioly, fenoly, ceruloplazmín, transferín, kyselina močová, albumín, etc. ROS: O 2 , H 2 O 2 , 1 O 2 OH, HCl. O c-cytozolový, m-mitochondriálny, p-peroxizomálny

Biologické antioxidačné ochranné mechanizmy Ochranné mechanizmy v organizme a. Katalitické odstraňovanie voľných radikálov O 2. - - spontánna dismutácia O 2. - c. Odstránenie Fe a Cu Feritín, transferín, laktoferín (Fe) Ceruloplazmín (Cu, Fe) Sérový albumín (Cu) n) (Cu/Zn-M áza pri vysokých koncentráciách O 2. -, . OH, LPO nízko m. w. tioly (napr. cysteín) vysoko m. w. tioly (napr. albumín) H 2 O + O 2 E ín tam Vi Fe 3+ Fe 2+ H 2 O 2 Katal b. Zhášače voľných radikálov (antioxidanty) Vitamín E ( -tokoferol) O 2. -, . OH, LPO Redukovaná kyselina askorbová LPO dism Superoxid utáza - superoxid dismutáza (SOD) - ceruloplazmín H 2 O 2 - glutation peroxidáza (GTPx) - kataláza (CAT) Organické hydroperoxidy - GTPx Disulfidy - GTPx Oxidovaný askorbát - GTPx . OH Feritín GS GSH H- pe ro xid áza GSSG H 2 O

Za patologických podmienok je biologická rovnováha porušená Enzýmy: SOD, GPX, CAT Neenzýmové antioxidanty: vitamíny (E, A, C), tioly, kyselina močová, ceruloplazmín, transferín, fenoly, albumín, etc. ROS: O 2 , H 2 O 2 , 1 O 2, OH, HOCl Následky uvedené na ďalšom obrázku

To je rovnováha!!!!!!! Drží jú dobre

¯ Porucha rovnováhy medzi tvorbou a elimináciou ROS sa vyvinie počas zápalu, ischémii/reperfúzii, porušenom metabolizme, účinku liekov, polutantov a pod. , ¯ Takéto poruchy rocnováhy vedú k poškodeniu mozgu, srdca, ciev, čriev, dýchacích ciest, svalov, parenchymatóznych orgánov (pečeň, obličky, pankreas), očí, kože, kĺbov, etc. ¯ Expozícia tkanív s ROS v rôznych biologických systémoch bola dokumentovaná ich schopnosťou poškodiť lipidy, proteíny a DNA. Výsledné poškodenie je potencované zvýšením voľného intracelulárneho Ca 2+ spôsobujúceho aktiváciu/ dezaktiváciu rôznych enzýmových systémov a bunkového poškodenia a smrti.

Mechanizmy ROS ktoré indukujú bunkové poškodenie LIPIDY PROTEÍNY DNA CUKRY Peroxidácia lipidov Oxidácia tiolov tvorba karbonylu poškodenie DNA Poškodenie transportných Poly ADP systémov Ca 2+ a iných iónov ribozylácia Schiffové bázy Expresia poškodeného génu Amadoriho produkty Poškodenie membrán Instabilita na udržanie normálneho gradientu iónov Deplécia ATP a NAD(P)(H) Aktivácia/dezaktivácia rôznych enzýmových systémov Poškodenie bunky AGEs (Advanced glycation end products)

Oxidačný stres Pri porušení rovnováhy medzi vznikom a odstraňovaním RONS nastáva tzv. oxidačný stres Rovnováha môže byť porušená na oboch stranách!!!

Poškodenie DNA Poškodenie n n n štiepenie cukorného kruhu modifikácia báz zlomy reťazca Dôsledok n n n mutácia translačné chyby inhibícia proteosyntézy

DNA je poškodzovaná reaktivnými metabolitmi kyslíka a dusíka Hydroxylový radikál – vysoko účinný a neselektivný: 1. reaguje s deoxyribózou (odoberá vodíky) – vzniká malondialdehyd a ďaľšie produkty Dôsledky – deštrukcia sacharidov a prerušenie reťazca. To vedie k aktivácii PARP (poly(ADPriboza)polymerázy - enzýmu viazaného na chromatín, ktorý využíva NAD+ k náprave zlomov). Nadmerná aktivácia PARP = deplécia NAD+ = interferencia so syntézou ATP = bunková smrť. 2. pripojuje sa k purínovým a pyrimidínovým bázam – mení ich na hydroxyderiváty a oxoderiváty Dôsledok – chybné párovanie báz pri replikácii DNA a zavedenie chyby do genetickej informácie Singletový kyslík – negeneruje reťazcové zlomy, reaguje hlavne s guanínom Produkty LPO (RO*, ROO*) môžu poškodzovať DNA Reaktívne metabolity dusíka Môžu spôsobiť nitráciu alebo deamináciu báz DNA

Dôsledky oxidatívneho poškodenia Modifikácia báz vedie k mutáciám. Príklad: RNS deaminujú A na HX, C na U a G na X, čo má za následok nesprávne párovanie báz (napr. správne párovanie A – T je nahradené HX – C)

V organizme prebieha: Neenzýmová LPO Prebieha popísaným spôsobom – reakciou s voľnými radikálmi. Dáva zmes rôznych produktov: Etán, pentán – vydychujeme pľúcami malondialdehyd (MDA), 4 -hydroxynonenal (HNE) sa naväzujú na proteíny a menia ich životnosť a funkciu. Enzýmová LPO Prebieha na aktívnych centrách hydroperoxidáz a endoperoxidáz (cyklooxygenáza, lipoxygenáza) a produkuje biologicky aktívne látky dôležité v riadení biologických dejov. Voľné radikály nie sú v tomto prípade uvoľňované z enzýmov, a tak neškodia.

Často diskutovaná otázka Sú prospešnejšie nasýtené alebo nenasýtené mastné kyseliny ? Odpoveď nie je jasná. Sú prospešnejšie ω 3 alebo ω 6 mastné kyseliny ? Grónski Eskymáci – veľmi nízka frekvencia srdcových ochorení, psoriázy, sklerózy multiplex – predpoklad, že je to spôsobené ω 3 mastnými kyselinami v rybom tukom. Štúdiá s podávaním rybieho tuku ako protektíva alebo liečiva nie sú presvedčivé. Možný dôvod: ω 3 mastné kyseliny v rybom tuku peroxidujú veľmi ochotne (vždy 20 -30% predávaného rybieho tuku je peroxidované).

Ja diskutujem zriedka, ale vecne. . .

Glykácia a glykooxidácia Glukóza v roztoku existuje v nealdehydickej kruhovej forme, čiastočne však aj v rovnom reťazci tvoriacom aldehyd. Aldehydy sú chemicky reaktívne a môžu sa viazať na aminoskupiny proteínov v procese nazývanom neenzymatická glykácia. Vzniká tzv. Schiffova báza. Zvýšená hladina glukózy v krvi vedie k patologickej hladine glykácie.

Po určitej dobe sa Schiffové bázy preusporiadajú. Vzniká Amadoriho produkt. Ten sa ďalej počas týždňov až mesiacov mení na konečné produkty pokročilej glykácie = Maillardovú zlúčeninu alebo advanced glycation end products (AGE). AGE sa môžu oxidovať kyslíkom za vzniku superoxidu ako aj ďaľších ROS. Glykáciu teda doprevádza glykooxidácia a oxidačný stres.

Glykácia mení vlastnosti modifikovaných proteínov Príklady negatívneho pôsobenia glykácie: inaktivace SOD = zvýšený oxidatívny stres glykácia apo. B v LDL = zmena náboja LDL částice a jej väzba na scavenger LDL receptory makrofágov AGE sú rozpoznávané špecifickými receptormi na povrchu endotelových a imunitných buniek a následne ovplyvňujú transkričné faktory a expresiu genov terčových buniek AGE zvyšujú syntézu adhezívnych molekúl na endotely ciev. Podporujú adhezivitu monocytov a ich prienik do cievnej steny. Tým podporujú vznik aterosklerózy. Zmeny v antigenicite (autoimúnne reakcie)

Proteíny = významný terč voľných radikálov Celý rad aminokyselín je hydroxylovaných hydroxylovým radikálom a nitrovaných peroxynitritom (tryptofán, fenylalanín, tyrozín) S proteínmi reagujú aj alkoxylové a peroxylové radikály vznikajúce pri LPO

Dôsledky poškodenia proteínov Zmena enzymatickej aktivity Zmena iónovej homeostázy bunky (porucha funkcie transportných pump) V cytozole sa hromadí Ca 2+ aktivácia proteáz a fosfolipáz Vznik nových antigénnych determinant a nástup autoimunitných reakcií Zmeny v molekulárnej bunkovej signalizácii

Poškodenie proteínov Poškodenie n n agregácia a sieťovanie, fragmentácia a štiepenie reakcia s hémovým železom modifikácia funkčných skupín Dôsledok n n n zmeny transportu iónov zmeny aktivity enzýmov proteolýza

Poškodenie lipidov - atak na nenasýtené MK Poškodenie n n strata násobných väzieb vznik reaktívnych metabolitov (aldehydy) Dôsledok n n zmena fluidity priepustnosti membrán vplyv na membránovo viazané enzýmy

Peroxidácia lipidov Tuky a oleje pri skladovaní na vzduchu žltnú (autooxidačná radikálová reťazová reakcia) V biologických systémoch tomuto procesu podliehajú PUFAs, tj. polynenasýtené mastné kyseliny s viacerými dvojitými väzbami

Tri fázy lipidovej peroxidácie Prvá fáza = iniciácia Hydroxylový radikál HO*, alkoxylový radikál RO* a peroxylový radikál ROO* Každá z týchto látok dokáže vytrhnúť vodík z metylénovej skupiny reťazca mastnej kyseliny. Mastná kyselina alebo lipid se tak stáva uhlíkovým radikálom (-*CH-) LH + HO* L* + H 2 O Druhá fáza = propagácia Po vytrhnutí vodíka s elektrónmi v uhľovodíkovom reťazci mastných kyselin sa usporiadajú tak, že medzi dvoma dvojitými väzbami je jedna väzba jednoduchá (= konjugovaný dién). Tieto látky reagujú s molekulárnym kyslíkom za vzniku peroxylového radikálu (LOO*) L* + O 2 LOO* je schopný vytrhnúť elektrón z mastnej kyseliny susedného lipidu, který sa tak stáva novým radikálom, zatiaľ čo LOO* sa premení na hydroperoxid (LOOH). LH + LOO* L* + LOOH Tretia fáza = terminácia Radikálová reakcia sa v lipidoch propaguje, pokiaľ sa radikál PUFA nestretne s iným radikálom alebo s vitamínom E, kedy sa reťazová reakcia ukončí vznikom stabilnej zlúčeniny (terminácia).

Výsledkom lipidovej peroxidácie sú: Hydroperoxidy mastných kyselín Cyklické endoperoxidy mastných kyselín Tieto peroxidy sú pomerne stabilné, pokiaľ sa nestretnú s prechodnými kovmi, ktoré katalyzujú Fentonovu reakciu. V nej sa lipidové peroxidy menia na alkoxylové radikály LO* a hydroxidový anion OH -. LOOH + Fe (II) [alebo Cu (I)] LO* + Fe (III) [alebo Cu (II)] + OH -

ROS v apoptóze NOXA (trauma, hypoxia pod homeostatickou metabolická insuficiencia kontrolou do určtej aktivácia excitačných receptorov) hranice Disbalancia iónov kaspáza/calpain tvorba ROS zlýhanie mitochondrií aktivácia Bcl-2 / Bax disbalancia BUNKOVÁ SMRŤ (nekróza/apoptóza)

¯Vieme, že voľné radikály majú vzťah k rôznym poruchám zdravia. ¯Sú rôzne patologické podmienky kde zohrávajú dôležitú úlohu extracelulárne aj intracelulárne ROS. ¯Ajkeď sa to intenzívne študuje, ostáva ešte veľa nezodpovedaných otázok o voľných radikáloch a ROS.

Patologické podmienky, pri ktorých pôsobia voľné radikály a miesta účinku ROS Hypo-, hyperoxygenácia a reperfúzie po Imunitné ischémii kataraktogenéza reakcie Chemickíá Radiačné poškodenie kancerogenéza starnutie a nádor senilná demencia Diabetes Ateroskleróza Fe, lieky Parkinsonizmus a chemická fajčenie, toxicita polutanty zápalové a liekmi reakcie vyvolané reakcie VOĽNÉ RADIKÁLY intracelulárne Intracelulárne a extracelulárne

Tvorba ROS počas ischémie a reperfúzie ATP I S AMP Xantín dehydrogenáza C H Adenozín É Ca 2+ proteázy M Inozín I A Hypoxantín+Xantín oxidáza O 2. - aktivované chemoattraktanty REOXYGENÁCIA Cl- H 2 O 2 O 2. - Extravazované Cirkulujúce neutrofily MPO Fe 2+ Fe 3+ Aktivátory HOCl . OH neutrofilov Chemoattraktanty Poškod. tkanív

ROS v sekvencii udalostí pri mŕtvici HYPOXIA ATP deplécia Depolarizácia buniek ( Mg blokuje NMDA rek. ) Uvoľnenie excitačných aminokyselín Ca 2+ influx do buniek Pomalá akumul. Ca 2+ v mitochondriách Aktivácia fosfolipáz, MPT póry otvrené v mitochondriách proteínkinázy, proteázy, kolaps gradietu H+ v mitochondriách endonukleázy, fosfatázy etc. vznik ROS vznik ONOO- Devastatorický účinok v bunkách NEURONÁLNA SMRŤ Terapeutické intervencie: cyklosporín (špecifický inhibítor MPT pórov), antioxidanty (lazaroidy, deferoxamín, SOD v lipozómoch, allopurinol)

Časté terče ROS resp. trakt črevá O 2 - O H HOCl H 2 O 2 mozog a nervy srdce a cievy

…a predsa nie je úplne guľatá!!!!!

¯ ROS účinkujú odlišne na jednotlivé tkanivá a zložky tkanív. ¯ Účinkujú okrem hladkosvalových buniek aj na epitel, endotel, inerváciu, membránové lipidy, receptory, transmitérové systémy, tvorbu prostanoidov, homeostázu Ca 2+, etc. )

Mechanizmy účinku ROS na respiračný trakt Fyziologické podmienky Patologické podmienky O 2. - Bez zmien H 2 O 2 Dominuje kontrakcia . OH kľudový Iniciálna zmena tonusu po ROS Pozdná zmena tonusu po ROS SOD- superoxid dismutáza; Cat – kataláza; LMWAO – nízko mol. hmotnostné antioxidanty epitel hladký sval Diameter trachey Dominuje relaxácia Dominuje kontrakcia dlhotrvajúca kontrakcia intenzívna kontrakcia kľudový Iniciálna zmena tonusu po ROS Pozdná zmena tonusu po ROS

¯ NO reaguje s O 2 - za vzniku nestabilného peroxynitritu, ktorý sa rozloží na tiež veľmi toxický OH. ¯ Nakoľko sú veľké energetické prírastky pri redukcii OH na H 2 O, tento radikál reaguje okamžite s každou biologickou molekulou v svojom bezprostrednom prostredí odovzdaním atómu vodíka.

Tvorba ROS v endotele a neutrofiloch OH OONO- L-arginín O 2 NOS NO NADPH O 2 NADPH NO NADPH e O 2 oxidáza n ATP AMP adenozín d NADP+ o inozín hypoxantín OH H 2 O 2 t O 2 MPO e XDH XO MPO l HCl. O kys. močová O 2 OH H 2 O 2 n e u t r o f i l

Účinky ROS na endotel a rozvoj aterosklerózy aterosklerotická lézia nahromadenie makrofágov Plazma proliferácia buniek aktívny kyslík, kolagenáza, elastáza, lipázy, proteázy poškodenie LDL membrány Intima fatty Streak uvoľnenie rastových faktorov adherencia trombocytov endoteliálne bunky monocyt aktivovaný kyslík Fe/Cu Oxidatívne modifikovaná LDL apo. B-viazaný 4 -hydoxynonenal, oxidované lipidy, hydroperoxidázy mastných kyselín Penové bunky tkanivové makrofágy monocyt

Choroby ktoré môžu mať ROS patogenézu Respiračný trakt I Normobarické hyperoxické poškodenie Bronchopulmonárna dysplázia Idiopatická fibróza pľúc Respiračný distres syndrómy (ARDS, IRDS) Emfyzém Chronická bronchitída a asthma bronchiale Asbestosis Inhalované polutanty, dym, chemikálie (napr. paraquat, bleomycín) a oxidanty (napr. SO 2, NOx, O 3) Črevá Ischémia/reperfúzia Crohnova choroba Ulceratívna kolitída a nekrotizujúca enterokolitída Žalúdkové a duodenálne vredy Chemikálie (napr. NSAID)

Na črevné problémy? ? ? …sebavedomie ale vylepšuje!!!

Srdce a cievy II Ischémia/reperfúzia (po infarkte, transplantácia) Chemikálie (napr. etanol, doxorubicín) Ateroskleróza/hypertenzia Deficiencia selénu Vasculitis Mozog a nervy Hyperbaricko hyperoxické počkodenie Parkinsonova choroba Alzheimerova choroba Amyotrofická laterálna skleróza Neuropatie (napr. diabetická) Neurotoxíny (napr. 6 -hydroxydopamín, MPTP) Deficiencia vitamínu E Neuronálna ceroidná lipofuscinóza Traumatické poškodenie/hemorágie/zápal Ischémia/reperfúzia HIV-demencia Mnohopočetná skleróza

ALZHEIMEROVA CHOROBA a oxidatívny stres ¯ oxidácia proteínov (karbonyly) - „krížové väzby“ ¯ Fe v neurónoch s fibrilárnymi agregátmi ( -hyperfosforly. proteín) ¯ obsah Al v neurónoch s fibrilárnymi agregátmi ¯ tvorba -amyloidu (priamy cytotoxický účinok, Cai, tvorba ROS aj v neprítomnosti Me 2+) ¯ aktivita mikroglie (mozgové makrofágy = zdroje ROS) ¯ aktivita CAT bez aktivity SOD následkom H 2 O 2 a OH ¯ tvorba lipidových hydroperoxidov a reaktívnych cytotoxických aldehydov (napr. HNE) Terapeutické intervencie: antioxidanty a zhášače ROS (napr. U-74500 A, U-78517 F, U-83836 E, vitamíny E, C), chelátory, CAT, deprenyl

Krv III Chemikálie (napr. fenylhydrazín, primakvín, sulfonamidy, Pb) Fotooxidácia protoporfyrínu Malária Anémie (kosáčikovité bunky, favizmus) Pečeň Ischémia/reperfúzia Chemikálie (napr. halogénované uhľovodíky, chinóny, etanol, acetaminofén) Akumulácia železa alobo medi Endotoxín Obličky Autoimúnna nefróza (zápal, napr. glomerulonefritída) Chemikálie (napr. aminoglykozidy, ťažké kovy)

IV Pankreas Akútna a chronická pankreatitída Diabetes mellitus Oči Prematuritná retinopatia Svetelná retinopatia Katarakty Laserová fotoablácia Koža Radiácia (slnečné, ionizujúce) Termálne poškodenie Chemikálie (fotosenzitizéry, napr. tetracyklíny) Kontaktná dermatitída Porfýria

V Svaly Svalová dystrofia Mnohopočetná skleróza Fyzická záťaž Iné Starnutie Tehotenstvo a novorodenecké komplikácie Radiačné poškodenie Nádory Chemikálie (napr. alloxán, predávkovanie železa, rádiosenzitizéry) Autoimunitné choroby (napr. Reumatoidná artritída, lupus erythematosus) Zápal (vo všeobecnosti)

Antioxidačný ochranný systém Tri typy ochrany n zábrana tvorby nadmerného množstva RONS n záchyt a odstránenie radikálov (lapače, vychy- távače, zhášače) n reparačné mechanizmy poškodených biomolekúl

Prehľad antioxidantov a vychytávačov ROS 1. Endogenné antioxidanciá enzýmové (cytochróm c, SOD, GSHPx, kataláza) n neenzýmové - membránové ( -tokoferol, -karotén, koenzym Q 10) - nemembránové (askorbát, uráty, transferín, bilirubín) n

Prehľad antioxidantov a vychytávačov ROS II 2. Exogenné antioxidanciá n inhibítory vzniku VR (regulácia aktivít enzýmov) n scavengery vzniklých VR (enzýmy, neenzýmy) n stopové prvky (Se, Zn)

Superoxiddismutáza (EC 1. 15. 1. 1, SOD) 2 O 2. - + 2 H+ H 2 O 2 + O 2 SOD - takmer vo všetkých aeróbnych organizmoch tri druhy - rôzne kofaktory (vždy metalický atóm) indukcia pri vyššej tvorbe superoxidu

Superoxiddismutáza Mn 2+ SOD (SOD 1) tetramér matrix mitochondrií menšia stabilita ako Cu, Zn - SOD fylogeneticky mladšia

Superoxiddismutáza Cu 2+/Zn 2+ SOD (SOD 2) dimér, Cu = redoxné centrum cytozol, intermitochondriálny priestor hepatocyt, mozog, erytrocyt vysoká stabilita, katalýza pri p. H 4, 5 -9, 5

Glutationperoxidázy odstraňujú intracelulárne hydroperoxidy a H 2 O 2 2 GSH + ROOH GSSH + H 2 O + ROH n cytozolová GSH - glutationperoxidáza (EC 1. 1. 9, c. GPx) n extracelulárna GSH - glutationperoxidáza (e. GSHPx) n fosfolipidhydroperoxid GSH - peroxidáza (EC 1. 1. 12, PHGPx)

Kataláza (EC 1. 1. 6, KAT) 2 H 2 O 2 2 H 2 O + O 2 inaktivácia H 2 O 2 : peroxizómy a mitochondrie hepatocytov, cytoplazma erytrocytov tetramér obsahujúci Fe, prítomnosť NADPH

Vysokomolekulárne endogenné antioxidanty n transferín n laktoferín n feritín n haptoglobín n hemopexín n ceruloplazmín n albumín n chaperóny

Nízkomolekulárne endogenné antioxidanty I Askorbát (vitamín C) syntéza kolagénu premena dopamínu na noradrenalín redukčné činidlo vstrebávanie železa antioxidačný účinok = redukcia O 2 · - , OH ·, ROO·, HO 2 · regenerácia tokoferylového radikálu prooxidant -tokoferol a vitamín E antioxidanty membrán produkujú hydroperoxidy, ktoré zneškodňuje GSHPx

Kyselina askorbová a jej metabolity

Nízkomolekulárne endogenné antioxidanty II ubichinon (koenzým Q) prenášač elektrónov v dýchacom reťazci tlmí radikálové reakcie v spolupráci s tokoferolom n karotenoidy, -karotén, vitamín A odstránenie radikálov v lipidoch n

Nízkomolekulárne endogenné antioxidanty III glutation (GSH, GSSG) vo všetkých cicavčích bunkách (1 -10 mmol/l) významný redox pufer 2 GSH GSSG + 2 e- + 2 H+ likviduje ROS, stabilizuje v redukovanej SH- skupine, regeneruje tokoferyl a askorbát substrát glutathionperoxidáz n

Nízkomolekulárne endogenné antioxidanty IV kyselina lipoová (lipoát) kofaktor PDH regenerácia tokoferylu, askorbátu n melatonín hormón hypofýzy (regulácia spánkového cyklu) lipofilný; vychytávač hydroxylových radikálov n

Nízkomolekulárne endogenné antioxidanty V kyselina močová (urát) - odpadová látka? nejhojnejší antioxidant plazmy, významná reabsorpcia, vychytávanie RO. , HCl. O, väzba Fe, Cu n bilirubín - inhibícia lipoperoxidácie n flavonoidy - chelatácia Fe, antikarcinogénne a protizápalové účinky n

To teda antioxidant je dobrý…. .

Stopové prvky ovplyvňujúce ROS Selén ovplyvňuje resorpciu vit. E, súčasť selenoproteínov Se = nedostatočná imunitná odpoveď, hemolýza erytrocytov, syntéza Met. Hb Zinok stabilizácia bunkových membrán, zvýšenie imunitnej odpovede, antagonista Fe

Potenciálna antioxidačná terapia I ¯ Inhibítory syntézy ROS Inhibítory NADPH-oxidázy Flavoproteínové inhibítory (FAD analóga, protilátky proti cyt. P 450 reduktázy) Látky tvoriace komplexy s Fe 2+ v cyt b (butylizokyanid, imidazol, pyridin) Mg 2+(schopné väzby s FAD), Fe 2+ , Cu 2+ chelátory (batofenantrolín, EDTA, EGTA, deferoxamín, bilirubín) Tiolové reagenty (N-etylmaleimid, 1 -naftol, 1, 4 -naftochinón) NADPH analóga (NADPH 2, 3 -dialdehyd) Inhibítory metabolizmu AA a PLA 2 IMAO (Deprenyl) Iné (kortikosteroidy, difenyliodonium) v Inhibítory xantínoxidázy (wolfrám, oxypurinol, allopurinol, pterinaldehyd, kyselina listová) v Antileukocytárne protilátky v

II ¯Látky podporujúce a doplňujúce enzymatické protektívne systémy v Superoxid dismutáza (SOD) SOD (Lip-SOD, PEG-SOD) diizopropylsalicylát meďnatý SOD mimetiká v Kataláza (Cat) Cat (Lip-Cat. TP, Peg-Cat. TP) v Glutationperoxidáza (GTPx) GSH, GSH metylester, GSH dietylmaleát nízko m. w. tioly (napr. cysteín) vysoko m. w. tioly (napr. albumín) L-2 -oxotiazidolidin-4 -karboxylát N-acetylcysteín Ebselen selén v Laktoperoxidáza a DT-diaforáza

III ¯ Látky interferujúce s metabolizmom Fe a Cu (deferoxamín, hemopexín, feritín, transferín, laktoferín, ceruloplazmín, sérový albumín) ¯ Antioxidanty v v v v v Vitamíny a ich analogá (vitamín E, vitamín C, karotenoidy, oxykarotenoidy) Deriváty fenolu (eugenol, guajakol, probukol, N, N-difenyléndiamín) Deriváty falónu (flavonoidy, izoflavonoidy, alirazín, green tea) Deriváty indolu (stobadín, karvedilol, melatonín, -karbolíny) Deriváty xantínu (allopurinol, oxypurinol, kyselina močová) 21 -amino steroidy (lazaroidy) Protizápalové lieky (piroxikam, kyselina flufenamová, hydrochinón, sulindak, fenylbutazón, indometacín, ibuprofén, naproxén, levamizol, sulfasalazín, kys. acetylsalicylová) Hypolipidemiká (lovastatín) Proteíny (albumín)

IV v Látky obsahujúce síru (cysteín, cysteamín, GSH, ditiotreitol, N-acetylcysteín, ACE inhibítory, dimetyltiomočovina, tiourea, tiomalát, hypotaurín, penicilamín, 2 -amino-2 -tiazol, dihydrolipoát, -merkaptopropionyl glycín, N-2 -merkaptopropionyl glycín, -merkaptoetanol, D, L-metionín, iné nízko a vysoko m. w. tioly). v Nitrozo zlúčeniny ( NO, nitrozopín) v Iné lieky ( -adrenolytiká, H 2 -antihistaminiká, blokátory Ca-kanálov, pentoxyfylín, karbanyláty, močovina, bilirubín, glukány, manitol, glukóza, 2 -metylaminochromany, DMSO, BHT, BHA, 2 -MEA, etoxykvín, kyselina -lipoová, Zn 2+)

V ¯Inhibícia tvorby O 2. v Nesteroidné antiflogistiká Antiasthmatiká ( -adrenomimetiká, kortikoidy, metylxantíny) v Prostaglandíny v Flavonoidy v Antibiotiká (napr. minocyklín) v Antimalariká v Inhibítory. CE v Dipyridamol v

VI/a ¯Zhášače alebo odstraňovače ROS. v Zhášače natvoreného O 2 Flavonoidy a iné prírodné produkty Vitamíny E, C, A( -karotén) Syntetické analóga PGB 2 Dipyridamol Pentoxifylín Antibiotiká. NO donory Kyselina 5 -acetylsalicylová Kyselina močová v Zhášače HCl. O v Zhášače alebo pohlcovače 1 O 2 Kyselina močová Taurín, hypotaurín Silymarín -karotén Vitamín E Stobadín

VI/b ¯Zhášače alebo odstraňovače ROS v Odstránenie H 2 O 2 Kataláza (nepracuje v prítomnosti. NO) N-acetylcysteín v Eliminácia OH. Manitol Tiomočovina Stobadín Melatonín Probucol kyselina 5 -acetylsalicylová Lazaroidy DMSO, DMTU, BHT kyselina močová Glukóza

VI/c ¯Zhášače alebo odstraňovače ROS v Lipidovú oxidáciu prerušujúce antioxidanty (anti LO. a LOO. ) Bilirubín Vitamín E Vitamín C -karotenoidy a oxykarotenoidy Stobadín Melatonín Kyselina -lipoová Kyselina močová Lazaroidy BHT, BHA Ehoxykvín 2 -metylaminochroman Boli získané určité pozitívne výsledky s pyridoindolom STOBADÍNOM (Katedra chémie a Katedra farmakológie)

Ako vieme oxidačný stres kvantifikovať ? Detekcia voľných radikálov n pomerne náročné vzhľadom na fyz. chem. vlastnosti Meranie produktov oxidačného stresu n jednoduchšie, široká paleta markérov oxidačného stresu

Markéry oxidačného stresu Posúdenie lipoperoxidácie: malondialdehyd (MDA), konjugované diény, izoprostány Posúdenie poškodenia proteínov: proteínové hydroperoxidy Posúdenie poškodenia DNA: stanovenie modifikovaných nukleozidov

Terapeutická vhodnosť ako antioxidantu I CHOROBA Kardiovaskulárne ANTIOXIDANT TERAPEUTICKÝ ÚSPECH Karotenoidy Kyselina askorbová Tokoferoly Selén Probucol Flavonoidy Novorodenecká hypoxia Penicillamín vyvolávajúca poškodenie Tokoferoly Ischémia/reperfúzia SOD, SOD+CAT srdca, mozgu, čriev, obličiek Kyselina lipoová Allopurinol Tokoferoly Deferoxamín Transplantácia a prezervácia SOD, SOD+CAT tkanív Tokoferoly Kyselina askorbová Karotenoidy + + + + + +

II CHOROBA Intravaskulárne hemoragie Agregácia trombocytov Hemochromatóza Traumy hlavy Subarachnoidálne krvácania Respiračný distres syndróm (IRDS, ARDS) Bronchiálna asthma Poškodenie pľúc ANTIOXIDANT TERAPEUTICKÝ ÚSPECH Tokoferoly Kyselina askorbová Flavonoidy Stobadín Deferoxamín Lazaroidy Deriváty stobadínu Fenyl-butyl-nitóny Lazaroidy SOD Allopurinol Tokoferoly SOD+CAT Tioly Tokoferoly N-acetylcysteín Tioly + + ++ + +

ROS v slede dejov pri NEUROTRAUMY TRAUMA Excitačné uvoľnenie aminokyselín (GLU) Ca 2+ influx do buniek Aktívácia zápalovej kaskády Aktivácia proteáza/lipáza (PAF, eikozanoidy, Depolarizácia buniek cytokíny, aktivácia PMN) ( Mg bloku NMDA rec. ) Tvorba ROS Na+influx devastácia bunky Edém NEURONÁLNA SMRŤ TRIÁDA: EXCITOTOXICITA, Ca-OVERLOAD, OXIDATÍVNY STRES Terapeutické intervencie: -SH donory (N-acetylcysteín), lazaroidy, steroidy, deferoxamín, SOD, vitamíny A, E, C, pyridoindoly, stobadin, PBN, flavonoidy (kvercetin), PAF antagonisti (BN 520210)

III CHOROBA Influenza (chladová) Retrolentálna fibroplazia Katarakta Zápalové ochorenia čriev (IBD) Hepatopatie Intoxikácia paracetamolom Chemické otravy Fotosenzibilizácia UV ožiarenie ANTIOXIDANT TERAPEUTICKÝ ÚSPECH Kyselina askorbová Tokoferoly 5 -aminosalicyláty Sulfasalazin Sulfapyridin SOD+CAT Glukány Kyselina lipoová Silymarín Stobadin N-acetylcysteín Glutation Deferoxamín Karotenoidy Tretionín Karotenoidy + + + + ++

IV CHOROBA ANTIOXIDANT TERAPEUTIC. ÚSPECH Parkinsomizmus SOD Penicillamín Deferoxamín Tokoferoly + Wilsonova choroba Penicillamín ++ Cerebro-vaskulárne spazmy Karotenoidy Tokoferoly Tioly SOD+CAT Karotenoidy Kyselina askorbová Tokoferoly Selén Flavonoidy Tioly Reumatoidná artritída Nádory

Závery I ROS účinkujú prostredníctvom: ¯ zvýšenie peroxidácie membránových lipidov ¯ zvýšenie tvorby prostaglandínov ¯ zvýšenie intracelulárneho voľného vápnika ¯ alterácia konduktivity iónových kanálov ¯ alterácia aktivity enzýmov ¯ alterácia uvoľňovania/účinku neurotransmitérov ¯ redukcia polčasu a biologicky aktívnych látok ¯ poškodenie proteínov ¯ poškodenie DNA, génov a proteosyntézy ¯ poškodenie uhľovodíkov Mechanizmy účinku ROS sa líšia v mnohých biologických tkanivách. Ich účinky závisia od podmienok samotného tkaniva, príslušného epitelu, endotelu, inervácie apod.

Závery II Účinkom ROS je možné zabrániť alebo ich zastaviť pomocou: Œredukcie ich tvorby - eliminácia nežiadúcich fyzických a chemických vplyvov - ochrana tkanív pred chronickým zápalom - ochrana tkanív pred ischémiou ich elimináciou interakcia s ich účinkom - substitúcia antioxidačných enzýmov - substitúcia neenzýmových antioxidantov a zhášačov - protekcia buniek pred intracelulárnym voľným akumulovaným vápnikom a jeho účinkami

Obranné mechanizmy závislé na glutatióne

Závery III Terapeutické úspechy za použitia antioxidantov, odpratávačov a zhášačov Tieto sú Klinických štúdií s dobrým výsledkom napr. pri fotosenzibilizácii, intoxikácii paracetamolom, hemochromatóze Kontroverzných klinických štúdií napr. pri ischémii/reperfúziiusion, subarachnoidálnom krvácaní, respiračných distres syndrómoch Minimálny terapeutický účinok napr. in asthma bronchiale, nádory

Ďakujem za pozornosť