Lpuisement clonal des lymphocytes T CD 8 aprs

L’épuisement clonal des + lymphocytes T CD 8 après transplantation de sang de cordon ombilical Présenté par Catherine Gravel Supervisé par Dr Hugo Soudeyns Département de microbiologie et d’immunologie Université de Montréal

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Cellules Souches Hématopoïétiques 3

Source de CSH Moelle osseuse Avantages Sang de cordon ombilical Riche source de CSH Moins Gv. HD Meilleur prise de la greffe Pas risque pour le donneur Moins d’infections opportunistes Pas contaminations virales Reconstitution plus rapide du système immunitaire et hématopoïétique Permet plus grande disparité entre donneur et receveur (HLA) Maladie du greffon contre l’hôte (Gv. HD) Moins de CSH (juvénile) Inconvénients Risqué pour le donneur Plus de non prise Contamination du receveur pathogènes présents chez le donneur Reconstitution plus lente Plus susceptible aux infections opportunistes Incidence de rechute leucémique autour de 20% dans les deux cas 4

Lymphocytes T CD 8+ Cellule présentatrice d’antigène Lymphocyte T 5

Récepteurs inhibiteurs Ø Expression transitoire permet de réguler l’activité des lymphocytes T CD 8+ suite à une infection. Ø Lors d’infection chronique et de tumeur, l’expression prolongée provoque un dysfonctionnement des lymphocytes T CD 8+ : Épuisement clonal 6

Épuisement clonal Ø Caractérisé par la perte des capacités: • proliférative • cytotoxiques • production de cytokines Ø Touche les lymphocytes T CD 8+ spécifiques à l’antigène Ø Lymphocytes T CD 8+ épuisées sont distinguables selon les récepteurs inhibiteurs exprimés 7

Recherche antérieure dans notre laboratoire - Fréquence des lymphocytes T CD 8+ exprimant PD-1 augmente puis redescend suite à la TSCO - Associé à la rechute leucémique donc pourrait être un marqueur de rechute (Mérindol et al. 2011) 8

D’autres marqueurs? Ø LAG-3: régule négativement la prolifération cellulaire, l’activation et l’homéostasie des lymphocytes T Ø BTLA: inhibe la production de cytokines 9

Hypothèse Ø La fréquence des lymphocytes T CD 8+ exprimant les récepteurs inhibiteurs BTLA et LAG-3 est associée à leur dysfonctionnement et à la rechute suite à une TSCO. Objectif Ø Suivre la fréquence des lymphocytes T CD 8+ exprimant BTLA et LAG-3 chez les receveurs de TSCO. 10

Méthodologies ü Étude prospective avec suivi de 2 ans ü Patients pédiatriques, Service d’hémato-oncologie, CHU Sainte-Justine ü TSCO en traitement d’une leucémie ü Consentement libre et éclairé ü Cible de recrutement : 20 patients Ø Isoler les PBMC des patients Ø Marquage des cellules et cytométrie en flux 11

Résultats préliminaires Stratégie d’acquisition BTLA / LAG 3 12

Marquages contrôles Fréquence des lymphocytes T CD 8+ 14 12 10 Non stimulées 8 Anti-CD 3 PHA-L 6 PHA-P 4 Dyna. Beads 2 0 BTLA LAG 3 Récepteurs inhibiteurs BTLA & LAG 3 13

Greffés 18 Fréquence des lymphocytes T CD 8+ 16 14 Patient #1 (6 mois postgreffe) 12 10 Patient #1 (12 mois postgreffe) 8 6 Patient #2 (3 mois postgreffe) 4 2 0 BTLA LAG 3 BTLA & LAG 3 Récepteurs inhibiteurs 14

Conclusions Ø Fréquence lymphocytes T CD 8+ exprimant BTLA et/ou LAG 3 augmente peu après la greffe puis redescend Ø Ces résultats sont compatibles avec ce qui a été observé avec PD-1 et l’épuisement clonal des lymphocytes T CD 8+ 15

• Un cas de rechute de leucémie (patient #2). Pour avoir des résultats significatifs, il faudra compléter l’étude tel que prévu au devis (20 patients, suivi de 2 ans) 16

Remerciements Dr. Hugo Soudeyns, Directeur de stage, Unité d’immunopathologie virale, CHU Sainte. Justine Insaf Salem Fourati, Étudiante au Doctorat, Département de microbiologie et immunologie, Université de Montréal Martine Caty, Assistante de recherche, Unité d’immunopathologie virale, CHU Sainte-Justine Dr. Natacha Merindol, Unité d’immunopathologie virale, CHU Sainte-Justine Dr. Michel Duval, Service d’hématologie-oncologie, CHU Sainte-Justine Dre. Françoise Le Deist, Département de microbiologie et immunologie, CHU Sainte-Justine Samira Mezziani, Service d’hémato-oncologie, CHU Sainte-Justine Dr. Martin A. Champagne, Service d’hémato-oncologie, CHU Sainte-Justine Groupe de recherche en transplantation et immunologie du sang de cordon (GRETISC) Société de Leucémie et Lymphome du Canada (SLLC) Comité d’organisation du programme des stages d’été (COPSÉ) Fonds de la recherche du Québec-Santé (FRQ-S) 17

Conclusions Ø Fréquence lymphocytes T CD 8+ exprimant BTLA et/ou LAG 3 augmente peu après la greffe puis redescend Ø Ces résultats sont compatibles avec ce qui a été observé avec PD-1 et avec l’épuisement clonal des lymphocytes T CD 8+ Ø Un cas de rechute de leucémie (patient #2) pour avoir résultats significatif il faut compléter l’étude tel que prévu au devis (20 patients, suivi de 2 ans) L’association de récepteurs inhibiteurs à la rechute pourrait mener à une immunothérapie préventive chez les patients leucémiques ayant reçu une TSCO 18