Instituto de Ciencias Marinas de Andaluca ICMAN RING

Instituto de Ciencias Marinas de Andalucía (ICMAN) RING TEST FOR A WHOLE-SEDIMENT TOXICITY ASSAY WITH THE BENTHIC MARINE DIATOM Cylindrotheca closterium EXERCICIO INTERLABORATORIO DUN ENSAIO DE TOXICIDADE CON SEDIMENTO USANDO A DIATOMEA Cylindrotheca closterium Cristiano V. M. Araújo Julián Blasco Ignacio Moreno-Garrido

Sedimentos estuarinos destino final de contaminantes: impacto urbano e industrial sumidero / fuente de contaminantes y nutrientes biodiversidad funcionamiento Calidad ambiental del sedimento elutriatos y agua intersticial sedimento

Sedimento - organismos bentónicos ORGANISMO DE ENSAYO Cylindrotheca closterium (diatomea) Representante del microfitobentos Relevancia elevada: productor primario Microalgas - organismos de ensayo Importante en el ciclo de materia y energía, producción de oxígeno, estabilización del sedimento Selenastrum capricornutum Phaeodactylum tricornutum Alta sensibilidad

OBJETIVOS Evaluar y optimizar el ensayo de toxicidad en sedimento usando Cylindrotheca closterium para aplicación en programas de calidad ambiental de sedimentos marinos y costeros. Evaluar la viabilidad y variabilidad (intra e interlaboratorial) del método.

Ría de Huelva La draga es hundida en el sedimento Sedimento superficial aislado por la tapa

Muestras de sedimento Cepa de microalga Soluciones: cultivo y ensayo

Cepa de microalgas Medio de cultivo Aclimatarlas a Añadir agua Milli-Q, Na. Cl, temperatura Na. SO 4, solución stock 01 y ambiente 02, medio f/2 y silicato Verte el contenido de las pipetas Cultivo 01: Incubar Renovar el cultivo después de la 1ª (cultivo 02) y 2ª (cultivo 03) semanas.

Ensayo de toxicidad Medio del ensayo Frascos del ensayo Añadir agua Milli-Q, Na. Cl, Na. SO 4, Añadir 2 g de peso seco solución stock 01 y 02, solución sedimento y 48 m. L de nutritiva y silicato medio El día siguiente Cultivo 03 (crecimiento exponencial) Frascos del ensayo Añadir las algas Centrifugar y lavar el cultivo con el medio de ensayo Incubar - al final de 72 h, hacer el recuento celular Inóculo concentrado

RESULTADOS Densidad celular final de poblaciones de Cylindrotheca closterium tras 72 h de exposición a Densidad celular tras 72 h (cels m. L-1) x 104 cuatro muestras de sedimento. Los ensayos representan diferentes laboratorios. Ds: nº de células en el control al final del ensayo Dc: nº de células en la muestra test Di: nº de células inicial (1 x 104 cels m. L-1) Ensayos

RESULTADOS Inhibición de crecimiento (%) de células de Cylindrotheca closterium expuestas al sedimento A. Mediana SD de los 3 valores centrales Intervalo entre el 2º y 3º cuartiles

RESULTADOS Inhibición de crecimiento (%) de células de Cylindrotheca closterium expuestas al sedimento B. Mediana SD de los 3 valores centrales Intervalo entre el 2º y 3º cuartiles

RESULTADOS Inhibición de crecimiento (%) de células de Cylindrotheca closterium expuestas al sedimento C. Mediana SD de los 3 valores centrales Intervalo entre el 2º y 3º cuartiles

RESULTADOS Replicabilidad y reproducibilidad (en %) del porcentaje de inhibición de crecimiento obtenido para cada laboratorio y muestra. Muest ras Ensayo Ra R’ b 7 (CV en %) 16. 7 1 7. 29 63 19 0. 46 6. 98 >10 0 73 31 0. 87 0. 85 3. 70 17 17 1 2 3 4 5 6 A -c 4. 28 >10 0 5. 47 0. 67 B 5. 41 35. 0 3 67. 5 3 16. 6 8 C 20. 1 5 0. 64 27. 2 2 5. 99 a: R representa la reproducibilidad calculada con todos los datos. b: R’ representa la reproducibilidad calculada sin el datos del ensayo #3. c: No hubo crecimiento celular en ninguna de las réplicas.

RESULTADOS Z ≤ 2: satisfactorio 2 < Z ≤ 3 aceptable (cuestionable) Z > 3 insatisfactorio Xlab: resultado de un laboratorio. X: mediana de los resultados de todos laboratorios (excepto ensayo #3). IQR(n): rango intercuartil (diferencia entre los cuartiles superiores (75%) e inferiores (25%) normalizado (multiplicado por 0. 7413 - factor sacado a partir de la distribución normal de los datos).

CONCLUSIONES El ensayo propuesto ha sido valorado positivamente por todos laboratorios pese la falta de experiencia con el organismo usado; Alrededor del 80% de los ensayos (17 de 21) presentaron resultados considerados satisfactorios (Z score ≤ 2); La practicidad y relevancia del ensayo, y la buena reproducibilidad (pequeña variabilidad) de los resultados favorece a la implementación del ensayo con Cylindrotheca closterium expuesta a todo el sedimento como método estándar para evaluar la calidad del sedimento estuarino.

AGRADECIMIENTOS PROYECTO

Instituto de Ciencias Marinas de Andalucía (ICMAN) RING TEST FOR A WHOLE-SEDIMENT TOXICITY ASSAY WITH THE BENTHIC MARINE DIATOM Cylindrotheca closterium EXERCICIO INTERLABORATORIO DUN ENSAIO DE TOXICIDADE CON SEDIMENTO USANDO A DIATOMEA Cylindrotheca closterium Cristiano V. M. Araújo Julián Blasco Ignacio Moreno-Garrido