Impostazione di una strategia di purificazione Strategia che

Impostazione di una strategia di purificazione Strategia: • che fornisca un processo affidabile, ripetibile, economicamente vantaggioso, • che produca un enzima avente purezza e stabilità operative adeguate

Scelta dei passaggi di purificazione • Da quale fonte l’enzima proviene (animale, vegetale, microbica) • Enzima endo o esocellulare • Aspetto delle soluzioni • Formulazione finale desiderata (soluzione, sospensione, prodotto liofilizzato) • Attività specifica finale desiderata (estratto grezzo, enzima altamente purificato) • Presenza di interferenti

Impostazione di una strategia di purificazione • Soluzioni tampone e cofattori necessari – Controllo del p. H – Controllo della temperatura – Inibitori di proteasi (fenilmetilsulfonil fluoruro, benzamidina, pepstatina, leupeptina) – Ioni metallici (gruppi prostetici) – Tensioattivi (ionici, non ionici, sali di ammonio quaternario) – Agenti riducenti (mercaptoetanolo, ditiotreitolo)

Schema tipo di purificazione • Lisi cellulare • Chiarificazione dei lisati • Passaggi preliminari a bassa efficienza • Passaggi di purificazione ad alta efficienza

Impostazione di una strategia di purificazione • Implicazioni tecniche della strategia di purificazione↔trasferire in maniera idonea fino alla scala industriale necessaria (scaling up) – Tempi – Strumentazione – spazi • Implicazioni economiche – Costi sostenibili – Risorse umane disponibili