METODA IDENTIFIKASISELEKSI AROMA METODA Metoda konvensional organoleptik Rasa

METODA IDENTIFIKASI/SELEKSI AROMA METODA Metoda konvensional (organoleptik ) • Rasa beras (Reinke et al. 1991) • Bau daun/bulir padi (dipanaskan/ direaksikan dengan KOH atau I 2 -KI (Sood 1978) KELEMAHAN/KELEBIHAN Sulit dilakukan jika jenis sampel banyak Memerlukan panelis yang banyak, sulit dan tidak reliable Kemampuan panelis membedakan rasa/ bau sampel akan berkurang akibat abrasi lidah atau kerusakan organ penciuman Biesei enzim BADH 2 (Srivong et al. 2008) Laborius, rentan (protein), perlu sampel banyak, dan sensitivitas terbatas Deteksi 2 AP • GC (Lorieux et al. 1996, Widjaja et al. 1996) • Isotop stabil (Yoshihashi 2002) Laborius/memakan waktu Memerlukan sample yang banyak. Marka molekular (Cordeiro et al. 2002) • SNPs (single nucleotide polymorphisms) • SSRs (simple sequence repeats) Mudah, cepat, sampel sedikit Mendekteksi gen aromatik Tidak dapat membedakan status gen PCR dengan marka badh 2 • Marka Bradbury et al. (2005 a) • RM 223 (Lang and Buu 2008) • FM-E 7 & FM-E 2 (Shi et al. 2008) • Badex 7 -5 (Sakthivel et al. 2009) Mudah, cepat, sampel sedikit Mendekteksi gen aromatik Dapat membedakan status gen Paling sensitif (efek amplifikasi)

METODOLOGIOUTLINE : OUTLINE METODA JADWAL PENELITIAN KEGIATAN PENELITIAN Tanam 4 -5 bulan (Pandanwangi) Silang dan Ciherang) Analisis Tanam Panen F 1 Tanam Analisis 4 -5 bulan Panen BC 1 F 1 Backcross Akhir th. ke I 4 -5 bulan Analisis Backcross Tanam Panen BC 2 F 1 Panen BC 3 F 1 Akhir th. ke II Backcross Panen BC 4 F 1 Analisis Tanam (homozygot) Selfing Panen BC 5 F 1 Panen BC 5 F 2 Tanam Analisis Backcross Benih Ciherang nontransgenik beraroma pandan yang siap diuji lokasi

Seleksi progeni persilangan N = Nonaromatik, A = aromatik 585 BP 355 BP N A N-A ESP INSP Non aromatik Aromatik 585 bp IFAP EAP 257 BP 355 bp Visualisasi 257 bp hm λ hm Elektroforesis PCR ht hm = homozygot ht = heterozygot External Sense Primer (ESP) = TTGTTTGGAGCTTGCTGAGT Internal Non-Fragrant Sense Primer (INSP) = CTGGTAAAAAGATTAGGCTTA Internal Fragrant Antisense Primer (IFAP) = CATAGGAGCAGCTGAAATATATACC External Antisense Primer (EAP) = AGTGCTTTACAAAGTCCCGC

HASIL: PCR PADI NONAROMATIK DAN AROMATIK DENGAN PRIMER BRADBURY bp N C IR F T M P G PM PK Air 1000 500 100 * Padi Non-Aromatik N = Nipponbare C = Ciherang IR = IR 64 F = Fatmawati T = Taipei 309 * Padi Aromatik * M = Mentik Wangi P = Pandan Wangi * G = Gunung Perak PM = Pulu Mandoti PK = Pare Kembang

AMPLIFIKASI DENGAN PRIMER LANG AND BU M Keterangan : M = marker 1000 bp Padi Nonaromatik Cih = Ciherang 140 bp 200 bp 160 bp 120 bp Padi Aromatik PW = Pandan Wangi RL = Rojo lele MW = Mentik Wangi GP = Gunung Perak