Zanimanje Prehrambeni tehniar Nastavni predmet Prehrambena mikrobiologija vjebe

Zanimanje: Prehrambeni tehničar Nastavni predmet: Prehrambena mikrobiologija (vježbe) Razred: Treći Vježba br. 23: Mikroorganizmi u tlu Ishod učenja: • izolirati i determinirati broj mikroorganizama Primjer vrednovanja • navesti utjecaj mikroorganizama na hranu, zdravlje i okoliš. Predmetni nastavnik: Tihana Jaković, dipl. ing. Prehrambeno-tehnološka škola, Zagreb

CILJ VJEŽBE: Dokazati prisutnost m. o. u zemlji. Prvo napiši u dnevnik rada naslov vježbe te MATERIJAL I PRIBOR: Sterilna Petrijeva zdjelica, sterilne Erlenmeyerove tikvice (2), kuhinjska sol Na. Cl, hranjivi agar u prahu, destilirana voda, stakleni štapići, sterilizator, aluminijska folija, vateni čepovi, plamenik, digitalna vaga, sterilni aplikator za uzimanje brisa, uzorak tla. Nacrtaj tipične bakterije koje se mogu naći u/na našem tijelu:

U dnevnik rada nacrtaj tipične predstavnike bakterija koje se mogu naći u zemlji (tlu) i uzrokovati bolesti Bacillus anthracis je gram pozitivna, aerobana, nepokretna štapićasta bakterija, ima kapsulu. Bakterija se javlja pojedinačno ili češće u obliku lanaca. Posebno je patogen za životinje iz grupe biljojeda kao što su konji, goveda, koze i ovce. Spore antraksa se mogu naći u svim prerađevinama bolesne stoke - mesu, koži, krznu, vuni i rogovima.

Tetanus je teška zarazna bolest koju uzrokuje anaerobna bakterija Clostridium tetani. Do infekcije ovim bacilom dolazi putem ozljeda i rana na koži. Simptome uzrokuje toksin koji proizvodi Clostridium tetani. Tetanus je proširen po čitavom svijetu. Spore C. tetani se nalaze u zemlji, prašini, izmetu domaćih životinja i mogu živjeti neograničeno.

Meni Clostridium perfringens je Gram-pozitivna, nepokretna bakterija. U vegetativnom obliku je prisutna u probavnom traktu životinja i ljudi, a preko izmeta dospijeva u okolinu (zemlja, voda).

Potom napiši POSTUPAK RADA: Izvagali smo 2, 30 g hranjivog agara i dodali 100 ml destilirane vode. Zagrijavali smo hranjivu podlogu do vrenja. Također smo izvagali 0, 85 g Na. Cl-a i dodali 100 ml destilirane vode. Hranjivu podlogu hranjivi agar i fiziološku otopinu smo stavili na sterilizaciju 121°C/15 minuta. Nakon sterilizacije hranjivu podlogu smo ohladili na 45°C. VAŽNO: Cijelo vrijeme radimo na sterilan način, tj. u blizini upaljenog plamenika i sa strerilnim priborom, kako bi na hranjivi agar nacijepili samo m. o. iz zemlje, a NE i one sa suđa, iz zraka, iz vode i sl.

U aplikator za uzimanje brisa smo pipetom ulili 10 ml fiziološke otopine. Zatim smo pomoću aplikatora uzeli bris zemlje i vratili aplikator u fiziološku otopinu. Homogenizirali smo sastav u aplikatoru za uzimanje brisa. Pipetom smo uzeli 1 ml fiziološke otopine s brisom zemlje (tla) te prenjeli u Petrijevu zdjelicu. U istu smo Petrijevu zdjelicu dodali hranjivi agar toliko da prekrije dno zdjelice. Petrijevu zdjelicu smo stavili na inkubaciju do sljedećih vježbi. VAŽNO: Cijelo vrijeme radimo na sterilan način, tj. u blizini upaljenog plamenika i sa sterilnim priborom, kako bi na hranjivi agar nacijepili samo m. o. iz zemlje, a NE i one sa suđa, iz zraka, iz vode i sl.

Aplikator za bris

OČITAVANJE REZULTATA NAKON INKUBACIJE Na hranjivom agaru su nakon inkubacije porasle kolonije bakterija, što znači da su u zemlji (tlu) prisutne različite vrste bakterija. Mnoge od bakterija koje su narasle na hranjivom agaru su potpuno bezopasne (nepatogene) i normalno žive u zajednici s čovjekom.

Izgled Petrijeve zdjelice (pogled kroz dno zdjelice) nakon inkubacije Vaš zadatak je: Nacrtati Petrijevu zdjelicu nakon inkubacije Izbrojati kolonije koje su porasle (dakle ovo je neizravna metoda određivanja broja m. o. , pa u njoj brojimo KOLONIJE, a nakon toga CFU-formulom računamo približan broj ŽIVIH STANICA BAKTERIJA – zašto ŽIVIH? ? ? Jer samo žive stanice bakterija mogu rasti na agaru i stvarati kolonije) Pomoću formule za CFU izračunaj približan broj živih stanica bakterija u uzorku zemlje

Opišite izgled kolonija prema natuknicama na str. 24 u skripti i prebroj kolonije: ZAPAŽANJA: • Oblik: • Rub: • Površina: • Uzdignutost: • Boja: • Veličina: • Struktura: Broj izbrojanih kolonija bakterija = ? ZAKLJUČAK: M. o. u zemlji (tlu) smo dokazali tako da smo uzeli bris zemlje, te prenjeli m. o. na hranjivi agar (nacijepili smo m. o. ) i nakon inkubacije su narasle kolonije bakterija, što znači da su u zemlji prisutni m. o. , točnije bakterije.

Nakon inkubacije, za P. zdjelicu izračunaj približan broj živih bakterijskih stanica pomoću CFU formule: Razrjeđenje = 10 -1 (uzeti bris smo razrijedili 10 puta (u omjeru 1: 10)). Volumen uzorka (brisa) = 1 m. L CFU = ?

Primjer računa za CFU:

https: //www. youtube. com/watch? v=h_A 8 y. VY 1 k. Bg Pogledaj video na You. Tube-u i odgovori na ova kratka pitanja: • Kakvog je oblika bakterija Clostridium perfringens? • Je li to Gram-pozitivna ili negativna bakterija? • Stvara li ova bakterija spore? • Čemu služe spore kod bakterija?

Za kraj odgovori na pitanja za ponavljanje: PITANJA ZA PONAVLJANJE: 1. Jesu li rezultati vježbe u skladu s tvojim očekivanjima (broj kolonija)? Obrazloži svoj odgovor? 2. Usporedi rezultate u sve četiri posljednje vježbe i napiši u kojem uzorku je došlo do najvećeg, a u kojemu do najmanjeg porasta bakterijskoh kolonija? 3. Kako možeš biti siguran da porasle kolonije pripadaju bakterijama? 4. Što znači veći porast kolonija u Petrijevoj zdjelici? Sve što napišeš u dnevnik rada fotografiraj te pošalji na „školska zadaća” Sretno