Zanimanje Prehrambeni tehniar Nastavni predmet Prehrambena mikrobiologija vjebe
Zanimanje: Prehrambeni tehničar Nastavni predmet: Prehrambena mikrobiologija (vježbe) Razred: Treći Vježba 19 (drugi dio): Očitavanje rezultata nakon inkubacije Prethodni test kolimetrije Tihana Jaković, dipl. ing. Prehrambeno-tehnološka škola, Zagreb Ishod učenja: • usvojiti temeljna znanja o mikroorganizmima i njihov utjecaj na hranu, zdravlje i okoliš Primjer vrednovanja • navesti utjecaj mikroorganizama na hranu, zdravlje i okoliš.
Najprije u dnevnik rada (u nastavku vježbe 19) stavite podnaslov „Očitavanje rezultata nakon inkubacije” U audio zapisu ću vas podsjetiti kako smo prošli put pripremili pokus, odnosno prethodni test kolimetrije Uzorak nam je bila voda iz potoka, za koju sumnjamo da je zagađena koliformnim bakterijama (njih dokazujemo ovim testom) kako bismo vidjeli kako izgleda pozitivan test Prethodni test kolimetrije prije inkubacije
Desno na fotografiji je pozitivna epruveta prethodnog teste kolimetrije, a dolje stalak sa svih 5 epruveta nakon inkubacije Dovoljno je da je jedna od pet epruveta pozitivna da bismo zaključili da je cijeli prethodni test kolimetrije pozitivan na koliformne bakterije Uzmimo za primjer da smo mi dobili 4 pozitivne epruvete i jednu negativnu Što znači da je epruveta pozitivna? KLIKNI NA ZVUČNIK
Jedan od produkata cijepanja laktoze (koja je u sastavu hranjive podloge briljant zelenog laktoza žučnog bukona i koju „vole“ koliformne bakterije i koriste ju kao hranu) pod djelovanjem koliformnih bakterija je plin CO 2 (uz koji još nastaje i mliječna kiselina). CO 2 se zadržava u Durchamovim epruveticama. Ako je barem u jednoj epruvetici nastao plin CO 2, test na koliformne bakterije je pozitivan, a sama ta epruveta se označava kao pozitivna epruveta. Također, može doći do zamućenja bujona i stvaranja navlake. Promatraj prozirnost, boju i da li se pojavio mjehurić CO 2 u Durchamovim epruveticama. Sve nastale promjene zapiši u dnevnik rada te dodaj svoja zapažanja i zaključke. Skicirajte u dnevnik rada pozitivnu epruvetu s prethodnog slajda i napišite sve nastale promjene u toj epruveti u odnosu na epruvete prije inkubacije!
Tablica: Tablica po Swaroopu – najvjerovatniji broj (MPN – indeks) koliformnih bakterija u 100 ml vode Prema broju pozitivnih epruveta iz prethodnog testa, a iz tablice po Swaroopu, odredi MPN indeks, odnosno najvjerojatniji broj koliformnih bakterija u 100 m. L ispitivanog uzorka vode. Pretpostavimo da smo mi u našem pokusu dobili 4 pozitivne epruvete (epruvete u kojima se u Durchamovim epruveticama stvorio plin CO 2, boja se iz briljantno zelene promijenila u žutu, sadržaj epruvete se zamutio, svorila se navlaka na vrhu i/ili talog na dnu epruvete Glavni pokazatelj da je epruveta pozitivna na koliformne bakterije je plin CO 2 u Durchamovoj epruvetici Broj pozitivnih epruveta s laktoza bujonom (s 10 m. Luzorka vode) Najvjerovatniji broj koliformnih bakterija u 100 ml vode (MPN (Most Probable Number) – indeks) 0 0 1 2 2 4 3 8 4 13 5 23
https: //www. youtube. com/watch? v=rv. UQq Llmuk. Y Pogledajte video (link iznad) – u videu dio koji se odnosi na Escherichiu coli (koja je jedan od glavnih predstavnika koliformnih bakterija) počinje u 2. minuti Poslušajte audio zapis u kojemu vam navodim par bitnih činjenica za razumijevanje Odgovorite na pitanje: Koja je najčešća bolest uzrokovana infekcijom ovom bakterijom?
Za kraj: PITANJA ZA PONAVLJANJE: 1. Koji šećer razgrađuju koliformne bakterije? 2. Koji plin se pritom razvija i gdje se on zadržava? 3. Što se dogodi s tekućom podlogom (bujonom) u kojoj su se razmnožile bakterije? 4. Ako je bujon promijenio boju, a u Durchamovoj epruvetici se razvio plin CO 2, to znači da je voda zagađena fekalijama i opasna je za upotrebu (piće i kupanje)? 5. Da Ne Sve što napišete u dnevnik rada fotografirajte te pošaljite na „školska zadaća” Sretno
Za učenje: Koliformne bakterije su Gram-negativne, nesporogene, štapićaste bakterije, aerobne i fakultativno anaerobne. Koliformne bakterije su primarno nepatogene i normalno obitavaju u donjem intestinalnom traktu (debelom crijevu) čovjeka i toplokrvnih životinja, gdje su odgovorne za normalnu probavu hrane. Koliformne bakterije se izlučuju fekalijama, te dospijevaju u otpadne vode, a preko njih u prirodne vode. Ukoliko su u fekalijama prisutne i patogene bakterije, one će također zajedno s koliformnim bakterijama dospjeti u otpadne i/ili prirodne vode. Mnoge patogene bakterije su u okolišu prisutne u malim koncentracijama te je njihovo dokazivanje otežano. Stoga se koriste tzv. indikatorske bakterije za detekciju (određivanje) vjerojatne prisutnosti patogenih bakterija. Indikatorske bakterije su primarno nepatogene i prirodno se izlučuju u velikom broju iz ljudskog i životinjskog probavnog trakta. Koliformne bakterije su najpodobnija skupina indikatorskih bakterija za ocjenu higijenske ispravnosti vode. One imaju sposobnost cijepanja laktoze. Njihovo dokazivanje se provodi primjenom KOLIMETRIJE (sastoji se od tri testa: prethodni, potvrdni i završni) te od IMVi. C testa (biokemijski test).
Kolimetrija Za dokazivanje koliformnih bakterija koriste se tri testa: PRETHODNI TEST – uzorak ispitivane vode se nacijepi na briljant zeleni laktoza žučni bujon (tekuća hranjiva podloga); koliformne bakterije vrše razgradnju laktoze uz tvorbu mliječne kiseline i CO 2, koji se zadržava u Durchamovim epruvetama nakon inkubacije 48 h na 37°C. POTVRDNI TEST – iz pozitivne epruvete s laktoza bujonom (pozitivna epruveta je ona u kojoj se briljant zeleni laktoza žučni bujon zamutio, a u Durchamovoj epruveti se stvorio plin CO 2) nacijepi se uzorak na čvrstu podlogu na ljubičasto-crveni žučni agar; nakon inkubacije 48 h/37°C narastu ljubičaste kolonije metalnog sjaja (u slučaju prisutnosti kolifornih bakteria u ispitivanom uzorku vode). ZAVRŠNI TEST – izrasle kolonije se ponovno precijepe u epruvetu s briljant zelenim laktoza žučnim bujonom i s Durchamovim epruvetama, te usporedno na kosi agar; test je pozitivan ako se nakon inkubacije pojavi plin u Durchamovim epruvetama, a na agaru narastu kolonije koje obojimo po Gramu (Gram negativni štapići su dokaz koliformnih bakterija).
- Slides: 9