Vyeten mozkomnho moku Mrzov K stav klinick biochemie
Vyšetření mozkomíšního moku Mrázová K. Ústav klinické biochemie a laboratorní diagnostiky VFN a 1. LF UK
Co je mozkomíšní mok ? F CSF nebo také likvor F Tělní tekutina zajišťující: ¶ fyzikální ochranu mozku a míchy · transport biomolekul v mozku ¸ odstraňování metabolitů (CO 2, laktát) ¹ udržení konstantního nitrolebního tlaku º obranu vůči patogenním mikroorganismům
Tvorba a cirkulace likvoru
Odběr likvoru Lumbální punkce Místo vpichu je na spojnici vrcholů kostí kyčelních a křížení s páteří v místě L 4
Indikace odběru CSF Ø AKUTNÍ: • Neuroinfekce • Subarachnoidální krvácení • Maligní infiltrace mening Ø SPECIÁLNÍ: • Chronická zánětlivá onemocnění CNS Purulentní meningitida
VZHLED NORMÁLNÍHO LIKVORU • Před centrifugací • Po centrifugaci • Čirý, bezbarvý
LIKVOR SANGVINOLENTNÍ A XANTOCHROMNÍ
LIKVOR ZAKALENÝ
STATIM BIOCHEMIE Ø Pandyho zkouška Ø Celková bílkovina kvantitativně Ø Laktát Ø Glukóza Ø (Chloridy) Ø Spektrofotometrie
SPEKTROFOTOMETRIE
SPEKTROFOTOMETRIE Absorbance 0, 04 415 nm 0, 02 Bilirubin Oxyhemoglobin 450 - 460 nm 540 nm 575 nm Vlnová délka Normální nález Vlnová délka
IMUNOCHEMICKÁ VYŠETŘENÍ Ø Albumin Ø Kvocient albuminu (CSF-alb/S-alb) Ø Imunoglobuliny Ig. G, Ig. A, Ig. M Ø Specifické proteiny CNS: MBP, NSE, S 100 (β podjednotka) Ø Transferrin Ø Β-2 -mikroglobulin Ø CEA Ø Stanovení Ø Volné oligoklonálních pásů Ig. G lehké řetězce (kappa, lambda)
IZOELEKTRICKÁ FOKUSACE
FUCHS-ROSENTHALOVA KOMŮRKA Pravidlo L
KOREKCE ELEMENTŮ Ø Na 1000 ery odečítáme 1 -2 elementy Ø Příklad 1: 45 elementů 37 000 erytrocytů 45 - 37 = 8 (normální počet elementů) Ø Příklad 2: 450 elementů 37 000 erytrocytů 450 -37 = 413 (zmnožený počet elementů)
KOREKCE CELKOVÉ BÍLKOVINY Ø Na 1000 erytrocytů odečítáme 0, 003 g z celkové bílkoviny Ø Příklad: CB v likvoru je 1, 2 g/l erytrocytů je 250 000 1, 2 - (250 x 0, 003) = 1, 2 - 0, 75 = 0, 45
Průtoková cytometrie
PŘÍPRAVA PREPARÁTŮ
Cytocentrifuga
BARVICÍ TECHNIKY MGG GRAM
Základní biochemické vyšetření likvoru • • • Vzhled Pandy reakce Celková bílkovina Glukóza Laktát Spektrofotometrie • • Normální likvor Čirý, bezbarvý 0 arb. j. <0, 45 g/l 2, 2 - 4, 2 mmol/l 1, 1 - 2, 1 mmol/l negativní
Základní cytologické vyšetření • Normální likvor • Počet elementů • Počet erytrocytů • Kvalitativní cytologie • < 10 /3 • 0 • Lymfocyty klidové 70% • Základní barvení (MGG) • Barvení olejovou červení (lipofágy) • Monocyty klidové 30% • Barvení dle Grama (bakterie) • Berlínská modř (Fe 3+v siderofázích) • Další barvicí techniky
Ukázka normálního a patologického likvoru Normální nález: klidové lymfocyty monocyt Streptococcus pneumoniae
Základní biochemické vyšetření Ø Albumin Schema grafu dle Reibera Ø Imunoglobuliny albuminu Q Alb = CSF-Alb x 10 -3 S-Alb Ø Výpočet 2 3 Q Ig Ø Kvocient 4 1 5 lokální syntézy Imunoglobulinu Q Alb
Zkumavková ELISA
Princip ELISA metod
Destičková ELISA
Imunonefelometrie
Princip nefelometrie a turbidimetrie
Speciální vyšetření • Oligoklonální Ig. G • Bakteriologické vyšetření • Specifické protilátky proti infekčním agens • PCR • Specifické proteiny CNS (S 100 β, NSE, MBP) • Asialotransferin
Hnisavá neuroinfekce Elementy >900/3 Neutrofilní granulocyty Celková bílkovina >2 g/l Glukóza v CSF <40% S- glykemie Laktát > 3, 5 mmol/l Neutrofilní pleocytosa
Nehnisavé neuroinfekce Elementy desítky až sta/3 Lymfocyty Celková bílkovina < 2 g/l nebo N Glukóza Laktát Lymfocytárná pleocytosa N < 3, 5 mmol/l
Subarachnoidální krvácení Krvavý mok Po centrifugaci nažloutlý Spektrofotometrie: Oxyhemoglobin Bilirubin Erytrosiderofág Fagocytované erytrocyty Celková bílkovina ↑─↑↑ Glukóza N─↓ Laktát ↑ Siderofágy
Maligní infiltrace Elementy N - tisíce Maligní elementy Celková bílkovina N - ↑↑ Maligní elementy Glukóza Laktát ↑↑
Chronické zánětlivé onemocnění – RS Elementy desítky-sta/3 Lymfocyt, plasmatické b. Celková bílkovina N nebo mírně ↑ Glukóza N Laktát N IEF 2 oligoklonální Ig. G Plasmatické b. a lymfocyty
ZÁVĚR Přehled likvorologické diagnostiky: Ø Posouzení klinického stavu pacienta Ø Další vyšetřovací metody : CT, MRI, . . . Ø Základní vyšetření: biochemické a cytologické Ø Speciální vyšetření: 1. IEF, specifické proteiny CNS ( S 100β, MBP, NSE) 2. mikrobiologické vyšetření protilátky proti infekčnímu agens, autoprotilátky 3. PCR
Děkuji za pozornost
- Slides: 38