Validatie en implementatie van MALDITOF MS in een

Validatie en implementatie van MALDI-TOF MS in een klinisch microbiologisch lab Shana Vervaecke

Probleemstelling en doel • Selectieve media en biochemische testen o o Tijdsrovend Arbeidsintensief Duur Ervaring nodig • MALDI-TOF MS o Snellere identificatie o Goedkoper 2

MALDI-TOF MS 3

MALDI-TOF MS 4

MALDI-TOF scores 5

Validatie plan • • Betrouwbaarheid op MALDI-TOF ID Reproduceerbaarheid op MALDI-TOF ID Leeftijd cultuur van MALDI-TOF ID Stabiliteit van kiem op Maldi target 6

Betrouwbaarheid • 321 gekende kiemen • MALDI-TOF vs alternatieve methoden 7

Betrouwbaarheid • 281/321 kiemen met ID hoger dan 1, 700 • 272/281 kiemen met correcte ID 8

Betrouwbaarheid 9

Streptococcen (N=70) • Beta-hemolytische Streptococcen (N=30) o 100% ID scores ≥ 2, 000 • Alfa-hemolytische Streptococcen (N=40) o 17, 5% ID scores ≥ 2, 000 o Troebele suspensie van alfa-hemolytische Streptococcen 10

Streptococcus species in bacteriële oplossing • Alfa-hemolytische Streptococcus species o S. pneumoniae/S. mitis • Probleem bij aanbrengen • Troebele suspensie • 1 µL suspensie gespot op target 11

Streptococcus species in bacteriële oplossing Troebele suspensie • S. pneumoniae/mitis o 71% ID scores ≥ 2, 000 Directe methode • S. pneumoniae/mitis o 17, 5% ID scores ≥ 2, 000 12

Betrouwbaarheid 13

G- staven: 5% verkeerde ID • Shigella o Geen massaspectra in database o Geen onderscheid met massaspectrum E. coli • Enterococcus faecalis vs Streptococcus bovis o Gewijzigde nomenclatuur o Vroeger groep D Streptococcen • Burkholderia multivorans vs Burkholderia cepacia o Lid van Burkholderia cepacia complex 14

Betrouwbaarheid 15

70% mierenzuur extractie op gisten • 6/9 v/d Candida kiemen scores lager dan 2 • Dikke eiwitmantel rond gisten • Test: o 25 kolonies van 5 Candida species (2 x) o Vergeleken met resultaten betrouwbaarheid 16

70% mierenzuur extractie op gisten Met mierenzuur Zonder mierenzuur • 68% ID scores ≥ 2, 000 • 33% ID scores ≥ 2, 000 • 16% ID scores tussen 1, 700 en 2, 000 • 11% ID scores tussen 1, 700 en 2, 000 • 16% geen spectrum • 56% geen spectrum 17

Reproduceerbaarheid • Intrarun variaties o Kiem 8 maal op zelfde target • Interrun variaties o 4 verschillende runs o 4 verschillende dagen 18

Reproduceerbaarheid 19

Leeftijd cultuur • Zelfde cultuur • Meten na: o o 24 h incubatie 24 h op kamertemperatuur 48 h op kamertemperatuur … 20

Leeftijd cultuur 21

Stabiliteit van kiem op Maldi target • Kiem bedekt met matrix o Kiem op target aanbrengen o Meteen bedekken met matrix o Meten na bepaalde tijd • Kiem onbedekt o Kiem op target aanbrengen o Pas bedekken met matrix juist voor het meten o Meten na bepaalde tijd 22

Stabiliteit van kiem op Maldi target • Kiem bedekt met matrix o Na 48 h: 100% correcte ID • Kiem onbedekt o Na 31 h: 100% correcte ID 23

Besluit • 98% correcte MALDI-TOF identificatie • Beperkingen: o Shigella vs E. coli o S. pneumoniae/mitis • Gisten: mierenzuur extractie ? • Implementatie is een grote meerwaarde • Betrouwbaar • Goedkoper en sneller dan huidige methoden 24

Toekomstperspectief • Uitbreiden database (Bruker) • Koppelen aan LIS • MALDI-TOF gisten/schimmels: mierenzuur extractie ? 25

Validatie en implementatie van MALDI-TOF MS in een klinisch microbiologisch lab