UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS MAESTRIA EN BIOQUIMICA CLINICA

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS MAESTRIA EN BIOQUIMICA CLINICA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS CAMPUS IV MICROSCOPIA OPTICA Presenta: Q. F. B Karla Alejandra López Guzmán

La microscopía es la técnica de producir imágenes visibles de estructuras o detalles demasiado pequeños para ser percibidos a simple vista El nombre deriva etimológicamente de dos raíces griegas: mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa observar Los microscopios pertenecen a dos clases, el de luz (óptico) y el electrónico, según el principio en que se base la amplificación

� Diferencias Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticos. También se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. entre el electrónico y el óptico: microscopio La potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda de la luz visible. El microscopio electrónico utiliza electrones para iluminar un objeto. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas El microscopio fotónico compuesto esta integrado por dos tipos de componentes:

COMPONENTES MECÁNICOS: Son aquellos que sirven de sostén, movimiento y sujeción de los sistemas ópticos y de iluminación así como de los objetos que se van a observar. � COMPONENTES ÓPTICOS: Son los objetivos, los oculares, el condensador y los prismas. Los tres primeros están constituidos por sistemas de lentes positivos y negativos.

Condensador: Es el componente óptico que tiene como función principal concentrar y regular los rayos luminosos que provienen de la fuente luminosa � La imagen que forman los objetivos es aumentada de tamaño, invertida y real. Objetivos. Se consideran los elementos más importantes en la formación de la imagen microscópica, ya que establecen la calidad de la imagen en cuanto a su nitidez y la capacidad que tiene para captar los detalles de la misma (poder de resolución). Están constituidos también por un juego de lentes, en este caso, convergente y divergente, para eliminar, en la medida de lo posible, una serie de aberraciones que afectarían la calidad de las imágenes formada

Microscopio de transparencia o de campo claro. Este microscopio se caracteriza porque emplea luz natural o luz artificial como energía luminosa para formar las imágenes del objeto que se observa La muestra que se va a observar debe ser teñida con algún colorante que permita hacerla destacar sobre el fondo claro o brillante que proviene de la fuente luminosa Imagen obtenida con células teñidas con azul de toluidina, 400 x

Microscopio de campo oscuro. Se denomina así por que La imagen que se forma está constituida por una serie de estructuras brillantes sobre un fondo oscuro El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada. Dado que la imagen solo se forma con las luz difractada, siempre más débil que la luz directa deben formarse fuentes lumínicas muy intensas, lo que no siempre es fácil sobre todo cuando los objetos son vivos y, por consiguiente, sensibles a fuertes iluminaciones

El microscopio de campo oscuro se emplea para ver células vivas (protozoarios, bacterias, células descamadas, etc. ) en las cuales no se han aplicado sustancias fijadoras ni colorantes. También se observan partículas de un tamaño inferior a los 0. 2 de micrómetro; esto se debe a que los rayos de luz oblicuos que inciden en ellas forman un halo luminoso brillante alrededor de las mismas

El microscopio de contraste de fases requiere de un condensador especial que contiene en su interior el diafragma con el anillo de fases adecuado para cada tipo de objetivos y éstos que alberguen placas de fases localizadas en el plano focal de los mismos

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES. Es el microscopio fotónico más utilizado para observar objetos o estructuras transparentes sin teñir. facilita la observación de células vivas para distinguir y analizar sus componentes morfológicos y ciertas funciones que ellas puedan desarrollar permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas. Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas muestra de tejidos de una célula Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espécimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas.

Una modificación del microscopio de contraste de fases es el microscopio de contraste diferencial o de interferencia (que utiliza el sistema óptico de Nomarski) en el cual un único rayo de luz atraviesa la muestra y el objetivo, pero luego se divide en dos rayos que interfieren entre sí por medio de un prisma. Mediante accesorios ópticos especiales se obtiene una imagen con un efecto de relieve característico. Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imágenes combinadas aparecen como si la célula estuviera proyectando sombras hacia un lado. , es muy utilizado en los tratamientos de fertilización in-vitro actuales.

La microscopía de fluorescencia. Aporta otra solución mucho más directa. Mediante el empleo de fuentes de iluminación de gran intensidad y sincrónicas, de un juego de diafragmas y de un sistema de captación de imagen electrónico, permite la obtención de imágenes de finas secciones ópticas. A partir de series de secciones ópticas de estos tipos obtenidos a diferentes profundidades, archivados en un ordenador, resulta posible reconstruir una imagen tridimensional En este tipo de microscopia una sustancia natural en las células o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante

El microscopio de fluorescencia: es una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Siendo escasas las moléculas autofluorecentes, su aplicación más difundida es para revelar una fluorescencia agregada, como en la detección de antígenos o anticuerpos. Con sustancias llamadas como fluorocromos.

La microscopia de fluorescencia , ha permitido avanzar en los procesos de investigación de procesos fisiológicos celulares

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