Unidad de Investigacin Servicio de Nefrologa CRDOBA MECANISMOS

Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. CÓRDOBA MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS “IN VITRO”. Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M.

INTRODUCCIÓN Ca 2+ PLA 2 Cai G Ca. R ERK 1/2 MAPK AA Núcleo ARNm. VDR PTH PTH PTH CÉLULA PARATIROIDEA

HIPÓTESIS Ca 2+ G Cai PLA 2 ? AA PTH PTH PTH Ca. R ERK 1/2 MAPK Núcleo ARNm. VDR

OBJETIVO Evaluar si el efecto del AA sobre la secreción de PTH y sobre la expresión génica de VDR es dependiente de la actividad de ERK 1/2 -MAPK. PLA 2 AA Cai ? ERK 1/2 MAPK PTH PTH PTH Ca. R G Núcleo ARNm. VDR

DISEÑO EXPERIMENTAL [Ca 2+] = 0. 6 m. M +AA (20μM) Ca 2+ PLA 2 AA exógeno AA Cai ? ERK 1/2 MAPK PTH PTH PTH Ca. R G Núcleo ARNm. VDR Inhibidor de ERK 1/2 (PD 98059)

DISEÑO EXPERIMENTAL PTH secretada IRMA Expresión ARNm. VDR RT-PCR GENESCAN

1. Participacion de la actividad ERK 1/2 -MAPK en la inhibicion de la secrecion de PTH por AA. 1 hora Ca=0. 6 m. M Ca=1. 5 m. M Ca=0. 6 m. M+AA (20µM) % PTH vs máxima (0. 6 m. M) Ca=0. 6 m. M+AA + PD (50μM) Sin ERK 120 bc 100 b p<0. 01 vs 0. 6 m. M+AA 80 60 a a c p<0. 01 vs 1. 5 m. M 40 20 0 [Ca] 0. 6 m. M [Ca] 1. 5 m. M [Ca] 0. 6 m. M +AA a p<0. 01 vs 0. 6 m. M [Ca] 0. 6 m. M +AA +PD

2. Participacion de la actividad ERK 1/2 -MAPK en la regulación de la expresión de ARNm. VDR por AA. 6 horas Ca=0. 6 m. M+AA (20µM) Ca=1. 5 m. M Ca=0. 6 m. M+AA + PD (10µM) %ARNmvdr / β-actina vs Ca=0. 6 m. M 240 a 200 a 160 Sin ERK a p<0. 01 vs 0. 6 m. M bc b p<0. 01 vs 0. 6 m. M+AA 120 c p<0. 01 vs 1. 5 m. M 80 40 0 [Ca] 0. 6 m. M [Ca] 1. 5 m. M [Ca] 0. 6 m. M +AA +PD

Ca 2+ PLA 2 G AA Cai ERK 1/2 MAPK PD PD PTH Núcleo ARNm. VDR PTH PTH PTHPTH PTH PTH

3. Efecto del AA sobre la activación (fosforilación) de ERK 1/2 -MAPK Ca 2+ Ca. R ? PLA 2 - AA Ca=0. 6 m. M ERK 1/2 P MAPK Ca=1. 5 m. M PTH ARNmvdr Ca=0. 6 m. M +AA Inmunohistoquímica. Ac. Anti-Fosfo-ERK 1/2

Ca = 1. 5 m. M Ca = 0. 6 m. M Células positivas ERK 1/2 -MAPK activa Ca = 0. 6 m. M + AA

CONCLUSIÓN En glándulas paratiroides de rata, el efecto del AA sobre: 1) Secreción de PTH 2) Síntesis de ARNm. VDR es dependiente de la actividad ERK 1/2 - MAPK.

Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. CÓRDOBA MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS “IN VITRO”. Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M.