Ultramicrotomia Disciplina Microscopia Eletrnica de Transmisso Alunoa Brbara
Ultramicrotomia Disciplina: Microscopia Eletrônica de Transmissão Aluno(a): Bárbara Yasmin e Weskly
Ultramicrotomia � Todos os procedimentos anteriores visam eliminar a incompatibilidade fundamental existente entre as condições ambientais do Microscópio Eletrônico X amostras biológicas; � Construção de micrótomos permitiram a secção de fatias ultrafinas (10 -100 nm) de amostras permitindo a observação, estudo e descrição da ultraestrutura celular; � A espessura do corte é avaliado pela cores: � Cinza (60 nm); � Prateada (60 -90 nm); � Dourada (90 -150 nm); � Avermelhada (150 -190 nm) OBS: Para observação em médio aumento no MET, são convenientes os cortes de coloração prateada ou
Ultramicrotomia � Cortes mais finos (cinza) são necessários quando se quer alta resolução, mas o contraste diminui; � Cortes mais grossos (0, 5 a 1 μm) são usados em microscópios eletrônicos de voltagem elevada (400 ou 1000 k. V); � A ultramicrotomia é uma das etapas mais criticas: dependente dos procedimentos anteriores, da disponibilidade de um bom ultramicrótono, de uma navalha de boa qualidade e da perícia do operador.
Ultramicrótomo � Os primeiros foram desenvolvidos na década de 1950 – tentativa de aperfeiçoar e adaptar os micrótomos; � Só foi possível tirar cortes ultrafinos com aparelhos construídos especialmente com a incorporação de novos sistemas de avanço mecânico baseados no projeto de Poter e Blum e Du Pont-Sorvall, Porter-Blum MT 2 -B
Ultramicrótomo � Atualmente a Leica (Reichert-Jung) e a Baltec-RMC fabricam instrumentos de avanço mecânico. Leica EM UC 7 RMC Products, Power Tome-X
Ultramicrótomo �Ultramicrótomos com avanço térmico, como o LKB, ainda se encontram em operação, mas vêm sendo preteridos pelos de avanço mecânico. LKB Nova Ultramicrotome
Partes principais do ultramicrótomo Microscópio estereoscópico Aparato de iluminação Central de comando Braço (suporte dos bloco) Suporte de navalha Comando manual do braço
Navalha de vidro �Vantagens: �Superioridade sobre as de aço; �Preço; �Facilidade. �Desvantagens: �Frágeis; �Necessidade de constante trocas.
Navalha de vidro Barra de vidro 25 mm de largura por 6 mm de espessura. Fonte: http: //www. interjet. com. br Glass Knifemaker Leica EM KMR 3. Fonte: www. leica-microsystems. com Navalha de vidro.
Navalha de diamante �Vantagens: �Resistentes; �Duráveis �Desvantagens: �Alto preço; �Cuidados específicos Navalha de diamante Di. Atome. Fonte: http: //www. kochinst. com. br/ Navalha de diamante Pelco. Fonte: www. tedpella. com
Tipos de corte - Semifino �Cortes com espessura de 5µm; �Fotos para microscopia de luz; �Avaliar o material; �Selecionar a área desejada para análise; Orquídea. Fonte: http: //noticias. uol. com. br/
Cortes Semifinos Bloco de amostra posicionado para cortes semifinos com navalha de vidro. Lâmina com presença de cortes corados Microscópio de luz
Piramidação �Preparo do bloco para o corte ultrafino; �Evidenciar a área selecionada para análise; �Menor área de corte = ↓ desgaste da navalha Efeito Ruffles? ? Área de corte (1 mm x 1 mm) 2 X Batata Ruffles. Base da ‘pirâmide’
Piramidação Bloco de amostra pronto para a piramidar.
Tipos de corte - Ultrafino �Cortes com espessura de entre 50 nm – 70 nm; �Cortes flutuam sobre o espelho de água; �Cores variadas dependendo da espessura do corte: �Colorido (furta-cor) �Dourado �Prateado �Cinza Navalha de vidro adaptada com uma barquinha. Navalha de diamante PELCO. Fonte: https: //www. tedpella. com/diamond_h tml/diamondk. htm
Grade �Vários tipos de materiais: �Cobre �Ouro �Níquel �Quantidade de mash (150, 200, 300. . . ) �Suporte das amostras Grade de cobre de 200 mash ampliada Caixa de grades de cobre de 200 mash.
• Limpeza das grades: Grade
Crioultramicrotomia �Cortes ultrafinos de materiais congelados; �Vantagens: �Preservação de aspectos biológicos sem alterações químicas; �Acessibilidade de sondas macromoleculares �Anticorpos, lectinas, oligonucleotídeos, etc �Desvatagens: �Técnica trabalhosa �Equipamentos especificos �Experiência do operador Crioultramicrotomo. Fonte: https: //upload. wikimedia. org
Referências Bibliográficas �Técnicas de Microscopia Eletrônica Aplicada às Ciências Biológicas
Obrigada!
- Slides: 22