Transformation Transformation Infection Transfection Host Cell DNA Term

세 가지 용어의 차이점 | Transformation, Infection, Transfection의 차이점. Host Cell DNA Term Procaryote

Transfection 방법 1. Chemical Method. 1. Calcium phosphate 이용법. 2. Liposome 이용법. 2. Physical

형질전환 발전 단계 1. 1970. Mandel and Higa. 형질전활 율 증가. Ice-cold Ca. Cl

Competent cell 이란? | 정상적인 세균세포(Bacterial cell)에 화학적 처리를 하여 외래 DNA가 세균세포(숙주세포)에 잘

Transformation 과정 | Ca. Cl 2로 세균 세포 처리. | Competent cell 제조. |

형질전환 결과 Competent cell (Amps , Tets ) p. BR 322 add. Transformation. Transforment

형질전환 과정. Ligation mixture(재조합 DNA). Competent cell에 add. Heat shock(42℃) LB(Luria Bertani) 배지에 접종

Lac z’ gene의 기능 | Β-galactosidase를 생산. | Lactose를 glucose와 galactose로 분해. | IPTG

Transfection(형질감염) | 시험관 내 봉합(in vitro packaging) 방법보다 비효율적임 . | 빠르고 간단함(장점). ⋋phage

In vitro packaging(⋋ phage ) | ⋋ genome에 암호화 되어있는 protein이 필요함. Coat protein,

In vitro packaging(⋋ phage ) | Bacteria에 감염시킴. | Lytic cycle 에 의해 plaque

세균 이외의 형질전환 | 효모(Yeast): Saccharomyces cerevisiae. Lithidium chloride. Lithidium acetate. | 식물세포 Cell

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Transformation

세 가지 용어의 차이점 | Transformation, Infection, Transfection의 차이점. Host Cell DNA Term Procaryote plasmid Transformation Bacteriophage(virus) Infection Eukayote plasmid Virus vector Transfection

Transfection 방법 1. Chemical Method. 1. Calcium phosphate 이용법. 2. Liposome 이용법. 2. Physical Method. 1. Electroporation. 2. Microinjection. 3. Virus 이용법. 1. Retro virus 이용 2. Adeno virus 이용. 3. Adeno associate virus 이용.

형질전환 발전 단계 1. 1970. Mandel and Higa. 형질전활 율 증가. Ice-cold Ca. Cl 2 solution(⋋ phage). 2. 1972. Cohen et al. plasmid DNA transformation 성공. 3. 1978. Kushner. 2가 양이온(+ 2)과 DMSO 이용. 4. 1983. Hanahan. Hexamine cobalt chloride.

Competent cell 이란? | 정상적인 세균세포(Bacterial cell)에 화학적 처리를 하여 외래 DNA가 세균세포(숙주세포)에 잘 들어가게 제조된 세포(형질전환 허용 세포 또는 수용성 세포). | 화학적 처리에 사용하는 시약. Calcium chloride, Hexamine cobalt chloride, Manganase chloride, Di methyl sulfoxide(DMSO). | Calcium chloride가 가장 많이 이용된다. | Amp sensitive(Amp-), Tet sensitive(Tet-).

Transformation 과정 | Ca. Cl 2로 세균 세포 처리. | Competent cell 제조. | plasmid DNA add. | Heat shock.

Transformation 과정

형질전환 결과 Competent cell (Amps , Tets ) p. BR 322 add. Transformation. Transforment (Ampr, Tetr) *PBR 322 1 ng으로 1000 ~ 10, 000개의 형질전환 체를 형성시킬 수 있음(형질전환 률 0. 01%).

형질전환 과정. Ligation mixture(재조합 DNA). Competent cell에 add. Heat shock(42℃) LB(Luria Bertani) 배지에 접종 후 배양. 37℃ 1~2 hrs(재조합 DNA 유전자 발현). Selective media(항생제 배지)에 접종 후 배양. 37℃ 16~18시간 배양. Transforment 분리.

Lac z’ gene의 기능 | Β-galactosidase를 생산. | Lactose를 glucose와 galactose로 분해. | IPTG 존재 하에 X-gall을 분해하여 Blue colony 형성함 . | X-gall: Lactose와 유사한 물질. 5 -bromo-4 chloro-3 -indolyl-β-galactopyranoside. | IPTG: Isopropyl Thiogalactosidase 효소유도체로 X –gall 반응을 촉매 시킨다. | lac gene에 목적의 유전자 삽입(재조합 DNA)으로 White colony(B - galactosidase 생성 못함) 생성.

Transfection(형질감염) | 시험관 내 봉합(in vitro packaging) 방법보다 비효율적임 . | 빠르고 간단함(장점). ⋋phage DNA + Object DNA. ↓ 재조합 ⋋phage. Competent Cell 에 add. ↓ 42℃ heat shock. Transforment isolation.

In vitro packaging(시험관 내 봉합)

In vitro packaging(⋋ phage ) | ⋋ genome에 암호화 되어있는 protein이 필요함. Coat protein, Tail protein, Head protein. | Tail protein gene 손상된 ⋋phage. Head protein gene 손상된 ⋋phage. | 완전한 ⋋ DNA(재조합 DNA) 분자 형성.

In vitro packaging(⋋ phage ) | Bacteria에 감염시킴. | Lytic cycle 에 의해 plaque 형성. | 손상된 ⋋phage는 plaque 형성 못함. | Plaque assay를 이용하여 재조합 ⋋phage 를 선별할 수 있음(M 13 phage: 불투명 plaque).

파지 Plaque

세균 이외의 형질전환 | 효모(Yeast): Saccharomyces cerevisiae. Lithidium chloride. Lithidium acetate. | 식물세포 Cell wall 분해(Cellulase, Chitinase). Electroporation 이용. | 동물세포 Manipurator(Microinjection) 이용. Calcium chloride 이용.