Thme CORPS HUMAIN ET SANT TEST ELISA DOSAGE

Thème CORPS HUMAIN ET SANTÉ TEST ELISA DOSAGE DU CORTISOL SALIVAIRE

Puits vide

Anticorps anti-cortisol

Dépôt d’une solution contenant du cortisol lié à de la β-galactosidase

Fixation

Rinçage

Dépôt d’une solution d’ONPG (ortho nitro phényl β galactopyranoside)

La β-galactosidase catalyse la transformation de l’ONPG en une molécule colorée

Anticorps anti-cortisol

Dépôt de salive contenant un peu de cortisol ET du cortisol lié à de la β-galactosidase

Compétition entre les deux sortes de cortisol

Rinçage

Dépôt d’ONPG

La β-galactosidase catalyse la transformation de l’ONPG en une molécule colorée, mais il y en a moins = coloration moins intense

Anticorps anti-cortisol

Dépôt de salive contenant beaucoup de cortisol ET du cortisol lié à de la β-galactosidase

Compétition entre les deux sortes de cortisol

Rinçage

Dépôt d’ONPG

En l’absence de β-galactosidase aucune coloration

Pas de cortisol salivaire = coloration intense Un peu de cortisol salivaire = coloration moins intense Beaucoup de cortisol salivaire = pas de coloration

Test ELISA avec produits de substitution

On coule au fond des puits un gel d’AGAR (0, 5 g / 50 m. L eau) Représente les anticorps anti-cortisol

On prépare des solutions de soude à différentes concentrations Représentent les salives à tester

On verse dans chaque puits de l’eau et l’une des solutions de soude L’eau représente le cortisol lié à de la β-galactosidase

On vide les puits : il ne reste que le gel d’agar imprégné de la solution de soude

On prépare du jus de choux rouge : • 1/4 de choux coupé en lamelles • recouvrir d’eau • 30 minutes à ébullition • filtration à la passoire • conservation 1 semaine au frais • dans un flacon teinté

C’est violet…

On verse le jus de choux rouge dans les puits Représente l’ONPG

Changement de couleur déterminé par la valeur du p. H Soude très concentrée Soude peu concentrée

Témoin sans soude vs soude concentrée

ATTENTION : Dans cette version ONPG coloré Le changement de coloration indique la présence de cortisol lié à de la β-galactosidase plus le changement de coloration est intense moins il y a de cortisol salivaire

Beaucoup de cortisol salivaire = pas de changement de coloration Un peu de cortisol salivaire = changement de coloration modéré Pas de cortisol salivaire = changement de coloration intense

Pourquoi recher le taux de cortisol dans la salive de quelqu’un ? Hum…

1. Parce qu’on pense qu’il est stressé DÉMARCHE

Témoin : pas stressé Patiente : peut-être stressée

[cortisol] < [cortisol]

COINCIDENCE ? [cortisol] < [cortisol]

Démarche STATISTIQUE

Pourquoi recher le taux de cortisol dans la salive de quelqu’un ? Hum bis…

2. Parce qu’on pense que le patient manque de cortisol

Mais pourquoi penser ça ?

Parce que le patient souffre d’hypoglycémie Sérieux ?

SYSTÈME LIMBIQUE Rétrocontrôle = RÉSILIENCE HYPOTHALAMUS libération de CRH HYPOPHYSE ACTH CORTEX-SURRÉNALES Néoglucogenèse Vasoconstriction libération de CORTISOL Inflammation

cortisol hyperglycémiant DONC si hyposécrétion (maladie d’Addison) hypoglycémie Ce qui est rare…

UN PEU DE SUSPENS = hypothèses concurrentes • insulinome • hypoglycémie iatrogène • consommation d’alcool à jeun • maladie auto-immune (ex. polyarthrite rhumatoïde)