TESTUL DIRECT CU ANTIGLOBULIN TDA Efectuat ca parte

TESTUL DIRECT CU ANTIGLOBULINĂ (TDA) Efectuat ca parte a identificării anticorpilor Jean Purcelli, MT(ASCP)SBB Centrele de Sânge ale Pacificului

Detectează coagularea in vivo a eritrocitelor sau componentelor complementului, sau a ambelor, cu Ig. G. Eritrocitele colectate în EDTA sunt cea mai potrivită sursă de celule pentru a fi folosite la TAD. Eritrocitele din mostrele coagulate pot arăta rezultate fals pozitive, la utilizarea AHG polispecific sau monospecificanti-C 3 d AHG.

TDA poate fi solicitat de către medicul de familie pentru a investiga: • Anemia hemolitică autoimună • Hemoliza cauzată de medicamente • Boala hemolitică a fătului sau nounăscutului (BHFN) • Reacții alo-imune în urma transfuziei recente de eritrocite.

• TDA este, de asemenea, inclus în investigarea de bază a anticorpilor: • TDA este similar testului de auto control, însă aceste teste nu pot să se substituie reciproc.

TDA poate fi pozitiv în cazul: • Unei reacții la transfuzie, imediate sau întârziate. Eritrocitele de la donator sunt coagulate de către plasma pacientului. • Bolilor auto-imune : anemii hemolitice autoimune la rece și la cald.

TDA pozitiv • Boala hemolitică a fătului și nou-născutului (BHFN) Celulele din cord și eritrocitele din sânge sunt coagulate de către anticorpii mamei. Eritrocitele fătului pot fi coagulate de către anticorpii din orice sistem semnificativ clinic matern, inclusiv și de cei din sistemul ABO.

TDA pozitiv BHFN Anticorpii ABO sunt de regulă Ig. M și nu traversează placenta. Totuși, persoanele cu grupa O au deseori și o componentă Ig. G de anti-A și –B. BHN cauzată de anticorpii sistemului ABO, de regulă, nu este gravă, și nivele înalte ale bilirubinei sunt controlate de către remedii cu bilirubină.

TDA pozitiv • Boli colagen-vasculare: SLE, RA • Anemii hemolitice induse medicamentos (alpha methyldopa, phenacetin, penicillin, quinine, orice cephalosporin, procainamide). • Hemoliza Paroxistică la Rece (HPR)

TDA pozitiv • Tratament cu IVIG: poate conține anticorpi ABO sau anti-D sau alte specificități. • Transplant de măduvă osoasă sau de organe: limfocitele de la donator pot produce anticorpi ABO, sau de alt tip, la celulele recipientului.

TDA pozitiv • Tratamentul pacienților cu transplant cu globulină anti-limfocite (GAL) sau globulină antitimocite (GAT). • Tratamentul cu RHIG IV. • Adsorbție nespecifică a proteinelor.

În laborator, TDA este inclus ca parte componentă a investigării anticorpilor. Eritrocitele spălate sunt testate direct cu reagenți AHG. Se utilizează reagenți mono-specifici și polispecifici.

AHG poli-specific conține componente anti-Ig. G și anti-complement. Anti-Ig. G mono-specific conține doar anti-Ig. G. Anti-complementul mono-specific conține anti. C 3 d și, de regulă, anti-C 3 b.

AHG poli-specific este folosit la testul de detectare (screening). Dacă testul este negativ, TDA este raportat ca fiind și el negativ. Dacă testul este pozitiv, se repetă testarea cu reagenți mono-specifici.

Toate TDA presupun și o eprubetă cu soluție fiziologică pentru efectuarea controlului. Trebuie să fie inclusă și examinarea microscopică. Aglutinarea “mixtă” poate fi observată la pacienții transfuzați recent.

Etapele după examinarea prin metoda CI (centrifugare imediată): 1. Se înregistrează rezultatele. 2. Dacă eprubeta cu Ig. G este non-reactivă, se adaugă celule de control (Checkcell). 3. Dacă nu este reacție, eprubeta poli-specifică și eprubeta cu complement sunt plasate la temperatura camerei pentru 5 -10 minute, se centrifughează și se examinează microscopic din nou, se înregistrează rezultatul și se adaugă celule de control.

Celulele coagulate anti-Ig. G nu vor reacționa cu eprubetele care conțin anti-complement. Se va folosi o “celulă de control” anticomplement.

ELUȚIA și TESTAREA cu ELUANT • La identificarea anticorpilor, se va face o eluție, DOAR în cazul în care pacientul a fost recent transfuzat. • Fiecare laborator de referință trebuie să-și stabilească definirea proprie a termenului “recent”. În SUA, termenul folosit este de la 2 săptămâni la 3 luni.

Se prepară o eluție și se testează, pentru a detecta anticorpul nou-format, care nu a fost detectat de ser. • Momentele de vârf în producerea anticorpilor au loc la 10 -18 zile după expunerea la antigena străină.

• Eluția este testată cu IAT și, de regulă, se folosește același panel de celule care a fost folosit la testarea serului. De obicei, se folosește și o soluție catalizator. • Celulele A 1 și B trebuie să fie de asemenea testate, dacă există incompatibilitate ABO între mamă și prunc. • La fel și în cazul adulților, dacă persoana a fost transfuzată recent cu trombocite incompatibile ABO sau plasmă.

• Nu se va face eluția în cazul eritrocitelor coagulate doar de complement. • După ultima spălare, de regulă, soluția este păstrată și testată pentru a identifica disociații neobișnuite a anticorpilor de la eritrocite. • După ultima spălare, eritrocitele sunt folosite pentru detectarea anticorpilor cu soluție catalizator și IAT.

• După ultima spălare eritrocitele trebuie să fie negative. În caz contrar acestea vor fi spălate adițional. • O “ultimă spălare” pozitivă va face ca rezultatele testului cu eluție sa fie incorecte. • Se recomandă ca pentru spălarea eritrocitelor să se folosească LISS sau soluție fiziologică, păstrată la 4 C.

Raportul final trebuie să conțină comentarii 1. Anti-Jka a fost identificat în eluant, fapt care poate indica că pacientul are o reacție la transfuzie. 2. Eluția a fost non-reactivă. 3. Eluția a reacționat cu toate eritrocitele fără specificitate aparentă.