TESTE DE LABORATOR N PATOLOGIA NEUROLOGIC Dr Antoanela

TESTE DE LABORATOR ÎN PATOLOGIA NEUROLOGICĂ Dr. Antoanela Curici Dr. Cristina Mambet

CINE SUNTEM ? • 16 laboratoare (6 în spitale) • 3 000 pacienţi / 22 000 teste zilnic • 3 programe internaţionale de control de calitate: RIQAS – Marea Britanie INSTAND - Germania LABQUALITY – Finlanda peste 2000 de teste de laborator: ü ü ü ü alergologie biochimie biologie moleculară (PCR) hematologie imunochimie microbiologie toxicologie

PROFILE PATOLOGICE • TESTE PENTRU BOLI INFLAMATORII DEMIELINIZANTE ALE SNC • TESTE PENTRU TULBURĂRI EREDITARE DE METABOLISM ÎNSOŢITE DE MANIFESTĂRI NEUROLOGICE • TESTE PENTRU AFECŢIUNI NEURO-MUSCULARE • TESTE PENTRU ENCEFALITE AUTOIMUNE ȘI AFECŢIUNI NEUROLOGICE PARANEOPLAZICE • TESTE PENTRU TROMBOFILIE

BENZI OLIGOCLONALE ÎN LCR • Două sau mai multe benzi discrete în regiunea gamma, corespunzând unor gamaglobuline anormale • Diagnosticul unui proces inflamator cronic (SM, neurosifilis, meningită acută, PESS, SIDA, tumori) • Metodă – electroforeză cu voltaj crescut sau focalizare izoelectrică • Testarea include obligatoriu probe pereche din ser şi LCR pentru compararea pattern-ului electroforetic

INDEXUL IMUNOGLOBULINIC • Detectarea sintezei intratecale de Ig. G, cu utilitate în diagnosticul SM (împreună cu determinarea benzilor oligoclonale în LCR) • Determinare simultană în LCR şi ser a albuminei, Ig. G, Ig. A, Ig. M • Pot fi detectate şi eventualele perturbări ale barierei hematoencefalice • Pentru interpretarea rezultatelor este utilizată diagrama Reiber

ANTICORPI ANTI-AQUAPORINA 4 (AQP 4) • Antigen ţintă – proteina canalului de apă aquaporina 4 (AQP 4) exprimată la nivelul astrocitelor • Determinarea anticorpilor – indispensabilă pentru diagnosticul şi tratamentul neuromielitei optice (sindrom Devic) • Corelaţie pozitivă între titrurile de anticorpi şi extinderea leziunilor medulare • Metodă – ELISA (sensibilitate 91%, specificitate 100%)

ANTICORPI ANTI-GANGLIOZIDE – – – Sunt anticorpi îndreptaţi împotriva componentelor glicolipidice (gangliozide) din structura mielinei şi a fibrei nervoase inducând procese inflamatorii cu demielinizări consecutive Permit evaluarea pacienţilor cu neuropatii motorii și senzoriale Metoda – imunodot (determinarea calitativă a anticorpilor Ig. G/Ig. M faţă de 12 tipuri de gangliozide înalt purificate – GM 1, GM 2, GM 3, GM 4, GD 1 a, GD 1 b, GD 2, GD 3, GT 1 a, GT 1 b, GQ 1 b)

RAPORT PIRUVAT/LACTAT ÎN LCR • evaluarea pacienţilor cu disfuncţii neurologice: întârziere în dezvoltare, hipotonie, convulsii, ataxie • L/P ↑ > 20: defecte ale lanţului respirator mitocondrial • L/P ↓ <10: tulburări ereditare în metabolismul piruvatului (defecte ale complexului piruvat dehidrogenazei)

TULBURĂRI ÎN METABOLISMUL AMINOACIZILOR Dozarea fracţionată în plasmă EDTA/urina din 24 h prin LC/MS de alanină, acid alfa-aminobutiric, arginină, asparagină, aspartat, carnozină, citrulină, cistină, glutamat, glicină, histidină, hidroxiprolină, izoleucină, lizină, metionină, ornitină, fenilalanină, fosfoetanolamină, prolină, sarcozină, serină, taurină, treonină, triptofan, tirozină, valină INDICAŢII CLINICE: - Vărsături recurente - Deteriorare neurologică inexplicabilă - Hiperamoniemie - Acidoză metabolică

DOZAREA ACIZILOR ORGANICI ÎN URINĂ Acizii organici – metaboliţi intermediari ai tuturor componentelor celulare majore Acidemiile (Aciduriile organice) – tulburări de metabolism ereditare heterozigote caracterizate prin acumularea fie de produşi anormali, fie de produşi normali sintetizaţi în exces. 4 tipuri majore: acidemia metilmalonică, acidemia propionică, acidemia izovalerică şi alcaptonuria INDICAŢII CLINICE: - Acidoză metabolică persistentă - Manifestări neurologice severe - Hiperamoniemie - Hipoglicemie inexplicabilă - Acidemie lactică

ALTE TESTE PENTRU TULBURĂRI METABOLICE • BIOTINIDAZA – determinarea activităţii în plasmă - dg. deficitului de biotinidază asociat cu disfuncţii neurologice • ACID PIPECOLIC - determinat în plasmă sau urină - dg. diferential între boli ale biogenezei peroxizomilor (ex. sindromul Zellweger, acid pipecolic ↑) şi tulburări asociate cu pierderea unei singure funcţii a peroxizomilor (ex. deficienţa proteinei bifuncţionale, acid pipecolic N) - acid pipecolic ↑ în epilepsia dependentă de piridoxină • DOZARE VITAMINA B 12, FOLAŢI, VITAMINA B 1, VITAMINA B 6, VITAMINA E • CERULOPLASMINA, CUPRU ÎN PLASMĂ ȘI URINĂ – dg. bolii Wilson

ALDOLAZA SERICĂ - Enzimă implicată în glicoliza anaerobă - 4 izoenzime; AAAA se găseşte predominant la nivelul muşchilor scheletici - Testul poate evalua distrugerea musculară şi poate diferenţia slăbiciunea musculară de cauză neurologică (cu valori normale aldolazei) de cea de etiologie musculară propriu-zisă - În distrofiile musculare progresive activitatea enzimatică de 10 -15 ori.

PROFIL MIOZITĂ Profil de autoanticorpi detectaţi prin tehnica Western-blot pentru dg. miopatiilor inflamatorii idiopatice • • Anti-Mi Anti-Ku Anti-PMScl Anti-Jo-1 Anti-PL-7 Anti-PL-12 Ro-52

PROFIL ANTICORPI MIASTENIA GRAVIS ● ANTICORPI ANTI-RECEPTORI PENTRU ACETILCOLINĂ - sunt întâlniţi în miastenia gravis având o sensibilitate de până la 95% şi o specificitate ce se apropie de 100%; - titrul de anticorpi se corelează cu gradul de activitate a bolii fiind util în monitorizarea pacienţilor cu această afecţiune. ● ANTICORPI ANTI-Mu. SK - diagnosticul, prognosticul şi monitorizarea miasteniei gravis generalizate sero-negative ● ANTICORPI ANTI-MUŞCHI STRIAT - se detectează la aproximativ 30% dintre pacienţii cu miastenia gravis şi la 74% din pacienţii cu timom asociat miasteniei gravis.

ANTICORPI ANTI-RECEPTOR PENTRU ACETILCOLINĂ - prezenţi în miastenia gravis juvenilă (50 -71% prepubertate, 68 -92% pubertate) - absenţi în miastenia congenitală sau infantilă - titrul de anticorpi se corelează cu gradul de activitate a bolii fiind util în monitorizarea pacienţilor cu această afecţiune. Anti-MUSK rar prezenţi la copii, se asociază cu o formă mai severă de boală

ATROFIA MUSCULARĂ SPINALĂ (SMA) – detectarea deleţiilor exonilor 7 şi 8 ale genei SMN 1 prin tehnica MLPA (>95% dincazuri) + secvenţiere completă SMN 1 pentru identificarea mutaţiilor intragenice → confirmarea dg la persoanele afectate; depistarea stării de purtător

DISTROFIA MUSCULARĂ DUCHENNE/BECKER – analiza deleţiilor/duplicaţiilor în gena DMD responsabile de aproximativ 59% din cazurile de boală Duchenne şi 65% din cele de distrofie Becker (tehnica MLPA)

ANTICORPII ANTI-NMDA RECEPTOR • Ţinta antigenică: subunitatea NR 1 a receptorului ionotropic pentru glutamat • Testaţi în ser sau LCR prin tehnica imunofluorescenţei • Utilitate în: - evaluarea pacienţilor cu debut recent de encefalită la care s-au exclus cauzele infecţioase şi metabolice - evaluarea encefalitei limbice - orientarea către un eventual proces malign ♀: asociere în 50% din cazuri cu teratoame ovariene; mai rar: adenocarcinoame mamare, boală Hodgkin, tumori neuroendocrine ♂: asociere în 5% din cazuri cu tumori testiculare cu celule germinale, cancer pulmonar

ANTICORPII ANTI-AMPA RECEPTOR • Ţinta antigenică: subunitatăţile Glu. R 1 şi Glu. R 2 ale receptorului alpha-amino-3 -hydroxy-5 methyl-4 -isoxazolepropionic acid receptor (AMPAR) • Alterează localizarea sinaptică şi nr. receptorilor AMPA • Testaţi în ser sau LCR prin tehnica imunofluorescenţei • Apar în sindroame paraneoplazice şi encefalita limbică • Tumori asociate: cancer mamar, pulmonar, timom

ANTICORPI ANTI-CANALE DE POTASIU VOLTAJ-DEPENDENTE (VGKC) • Au fost raportaţi într-o serie de afecţiuni neurologice: neuromiotonie, encefalita limbică, sindrom Morvan • Anticorpii interferă cu funcţia normală a canalelor de potasiu → sindroame de hiperexcitabilitate a SNC şi sistemului nervos periferic • Utilitate: diferenţiere sindroamelor paraneoplazice de cele mediate imun potenţial tratabile • Nivelul anticorpilor este util şi pentru monitorizarea terapeutică

ANTICORPI ANTI-CANALE DE CALCIU VOLTAJ-DEPENDENTE (VGCC) • Utilitate – confirmarea diagnosticului de sindrom miastenic Lambert-Eaton • Mecanism – anticorpii interferă cu fluxul normal de calciu necesar eliberării de acetilcolină prin reducerea numărului de canale de calciu funcţionale la nivelul joncţiunii neuromusculare • Sunt depistaţi la 75 – 100 % dintre pacienţii cu sindrom L-E care asociază o tumoră (neoplasm pulmonar cu celule mici /limfom) • Prevalenţă 55 – 95 % la pacienţi cu sindrom L-E care nu prezintă tumori subiacente

ANTICORPI ANTI-GAD • Ţinta antigenică: decarboxilaza acidului glutamic – enzimă ce catalizează conversia glutamatului în GABA • Detectaţi la pacienţii cu diabet zaharat tip I • Asociaţi cu “stiff-person syndrome” (în până la 80% din cazuri) şi ataxia cerebeloasă cu debut tardiv • A fost sugerată o legătură între afecţiunile cu anti-GAD şi intoleranţa la gluten

DETECŢIA ANTICORPILOR ONCONEURONALI Tehnica imunofluorescenţei indirecte Autoanticorpi: anti-Hu, anti-Ri, anti-Yo Tehnica Imunoblot Autoanticorpi faţă de antigenele: amfifizină, CV 2, Ma 2/Ta, Ri, Yo, Hu, Recoverin, SOX 1, Titin

TROMBOFILIA - condiţie individuală asociată cu predispoziţie crescută de apariţie a evenimentelor trombotice IMPLICAREA DEFECTELOR TROMBOFILICE ÎN TROMBOZELE VASELOR CEREBRALE: • riscul creşte proporţional la persoanele care asociază şi alţi factori de risc trombotic: sarcina, consumul de anticoncepţionale orale (ACO), neoplasme mieloproliferative • tromboza sinusurilor cerebrale apare mai frecvent la pacientele sub ACO, gravide sau în perioada post-partum • 1 -4% din cazurile de AVC ischemic

TROMBOFILIA ÎN PEDIATRIE - manifestările clinice apar în special la copiii cu deficienţe severe sau la cei care asociază mai multe defecte trombofilice; - trombozele recurente neexplicabile sunt foarte probabil asociate cu un defect ereditar grav; - chiar în prezenţa a 2 sau mai multe defecte trombofilice - evenimentele trombotice apar rar spontan, fiind adesea precipitate de afecţiuni traumatice sau inflamatorii

TROMBOFILIA EREDITARĂ • Mutaţia factorului V (Leiden) • Mutaţia factorului II (protrombinei) • • • Deficienţa proteinei C Deficienţa proteinei S Deficienţa de antitrombină III DOB NDITĂ Sindromul Antifosfolipidic (cel mai frecvent); teste disponibile: • • • Anticoagulant lupic (LA) Anticorpi anti-cardiolipinici (ACA) Ig. G, Ig. M Anticorpi anti-beta 2 glicoproteina 1 Ig. G, Ig. M MAI MULT DE 50% CAZURI MULT MAI RAR

TROMBOFILIA EREDITARĂ I. Factorul V Leiden şi mutaţia G 20210 A a protrombinei - rol demonstrat în trombozele venoase - asocierea cu trombozele arteriale este controversată - Rezistenţa la proteina C activată – test screening de coagulare pentru FV Leiden cu VPN de 100%; poate fi utilizat în sarcină şi la pacienţii sub anticoagulante orale II. Deficitul de anticoagulanţi naturali - Deşi deficitele ereditare de AT, PC şi PS au frecvenţă redusă în populaţie comparativ cu mutaţiile genetice, testele pot fi utile în evaluarea pacienţilor tineri cu AVC ischemice

SINDROMUL ANTIFOSFOLIPIDIC (SAFL) - SAFL poate fi primar sau asociat unor boli de sistem (colagenoze) - Boala cerebrovasculară (de obicei sub forma atacului ischemic) constituie una din manifestările cel mai frecvente asociate cu ACA şi LA - Sindromul antifosfolipidic primar poate fi o cauză de infarcte lacunare la pacienţi tineri - Amnezia globală tranzitorie a fost asociată în unele cazuri cu nivele persistente de ACA şi LA - Anticorpii antifosfolipidici apar frecvent la copii in cadrul unor infecţii virale (ex. varicela) – caracter tranzitor

HIPERHOMOCISTEINEMIA - Asociată cu risc ↑ de afecţiuni cardiovasculare, tromboze venoase, AVC ischemic, complicaţii ale sarcinii - Utilitate la pacienţii tineri cu AVC ischemic, la cei cu istoric familial pozitiv de ateroscleroză prematură, AVC fără semne boală vasculară şi tromboză - Pacienţii cu AVC acut şi niveluri crescute de homocisteină prezintă un risc ↑ de deteriorare neurologică precoce (Kwon HM et al, Stroke 2014).

TESTE DE TOXICOLOGIE MONITORIZARE TERAPEUTICĂ (determinarea se efectuează numai în “steady state”) Medicamente antiepileptice: Carbamazepin Topiramat Primidonă Acid valproic Clonazepam Levetiracetam Lamotrigin Fenitoin Ethosuximid

VA MULTUMIM PENTRU TIMPUL ACORDAT ! www. synevo. ro