Tema 9 Fundamentos de gentica bacteriana El genoma

Tema 9. - Fundamentos de genética bacteriana -El genoma bacteriano: cromosoma y plásmidos. -Mutación: obtención y aislamiento de mutantes. - Recombinación genética en bacterias: transformación, transducción y conjugación.

Efectos de la sustitución de un par de bases en un gen que codifica una proteína Proteína defectuosa incompleta Proteína normal

Cambio en el marco de lectura del ARNm causado por la inserción y delección de un par de bases en el ADN

Tipos de mutantes Fenotipo Naturaleza del cambio Detección del mutante Auxotrofo Pérdida de un enzima de una ruta biosintética Incapaz de crecer en un medio sin el nutriente Sensible al frío Alteración de una proteína que se inactiva a baja temperatura Incapaz de crecer a baja temperatura Resistente a las drogas Alteración de la permeabilidad a una droga, modificación de la diana, detoxificación del compuesto Capaz de crecer en presencia de una droga No capsulado Pérdida o modificación de la cápsula Colonias pequeñas y rugosas Inmóvil Pérdida de flagelos o flagelos no funcionales Colonias compactas No pigmentado Alteración de un enzima de la ruta de síntesis de un pigmento Color diferente o falta de color Colonia rugosa Pérdida o cambio en el LPS Colonias irregulares Fermentación de azúcares Pérdida de un enzima de una ruta de degradación No hay cambio de color en un medio que contiene el azúcar y un indicador de p. H Sensible a la temperatura Alteración de un enzima que se inactiva a alta temperatura Incapaz de crecer a una temperatura algo elevada (40ºC) Resistente a virus Pérdida del receptor del virus Crece en presencia de grandes cantidades de virus

Crecimiento de mutantes resistentes a un antibiótico en la zona de inhibición del crecimiento.

Método de réplica en placa para detectar mutantes nutricionales Los mutantes no crecen Todas las colonias crecen Placa maestra. Crecimiento en medio completo Terciopelo estéril Presionar la placa en el terciopelo Tela con la huella de las colonias Incubación Medio mínimo Goma Taco de madera Transferencia de las huellas de colonias a medio fresco Medio completo

Método de réplica en placa para detectar mutantes nutricionales Los mutantes no crecen Todas las colonias crecen Placa maestra. Crecimiento en medio completo Terciopelo estéril Presionar la placa en el terciopelo Tela con la huella de las colonias Incubación Medio mínimo Goma Taco de madera Transferencia de las huellas de colonias a medio fresco Medio completo

Mutantes nutricionales (Leu -) detectados por el método de réplica en placa Colonias auxotrofas para la leucina Placa maestra Medio completo (contiene leucina) Réplica Medio mínimo (carece de leucina)

Aparea con G Causa sustitución de AT a GC Aparea con C Causa sustitución de AT a GC

Test de Ames para evaluar la mutagenicidad de un compuesto químico Colonias revertientes His + Inóculo: Salmonella enterica His - Reversión espontánea Reversión inducida por el compuesto mutagénico Medio de cultivo sin histidina

Visión simplificada del mecanismo de recombinación genética. Moléculas homólogas de ADN se aparean e intercambian segmentos. El mecanismo implica la rotura y unión de los segmentos apareados.

Recombinación genética en bacterias Transferencia de ADN de una bacteria dadora a una aceptora Transformación Transdución Conjugación: Transferencia del plásmido Conjugación: Transferencia del cromosoma

Mecanismo de TRANSFORMACIÓN en bacterias Gram + a) Unión del ADNdc a la membrana ayudado por una proteína de unión al ADN b) Entrada de una de las cadenas en la célula. La otra cadena es degradada por una proteasa. c) La cadena que entra en la célula se une a proteínas específicas. Tiene lugar la recombinación con regiones homólogas del ADN bacteriano mediada por la proteína Rec. A Célula transformada. Si no hay recombinación, la cadena de ADN que ha entrado es degradada.

Transducción generalizada

Transducción especializada

Conjugación