Tellen en differentieren van WBC in liquor met

Tellen en differentieren van WBC in liquor met de LH 750 • Dr G. J. J. Beukeveld

Leukocytendiff in Liquor met de LH 750 • • • Klinische relevantie Differentiatie LH-750 instellingen Metingen Resultaten Conclusie

Klinische relevantie • Meningitis is de ontsteking van de meninges • Meninges zijn de membranen rond de hersenen en ruggenmerg • Ontsteking door virus of bacterie • Virale ontsteking geneest vanzelf zonder restschade • Bacteriële infectie leidt tot hersenschade, leerproblemen, gehoorverlies of de dood.

Meningitis • 12. 500 gevallen virale meningitis in US/jaar • 25. 000 gevallen van bacteriële meningitis • 2. 200 mensen per jaar overlijden hieraan. • 100 personen per jaar in Nederland

Schimmels, tuberculose en chemicaliën

Typen WBC bij meningitis • • Abces mixed Bacterieel neutrofielen Viraal lymfocyten Schimmel lymfocyten Tuberculose lymfocyten Neurosyphilis lymfocyten Parasieten lymfocyten glucose glucose n of

Meningitis • Snel onderscheid maken tussen: – bacteriële – en – de anderen (neutrofielen (lymfocyten in liquor) – Pas op: bij een beginnende bacteriële meningitis kunnen eerst de lymfocyten verhoogd zijn!

Uitdaging Klinisch Chemisch Laboratorium • In liquor: • snel én betrouwbaar leukocyten tellen en differentiëren. • 24 uur per dag • 7 dagen in de week • door alle dienstdoende analisten Kan dat in het CITO pakket én met routine apparatuur? JA

LH-750 hematologie analyzer • CBC mode • WBC mode • Retic mode (counting blood cells) (white bloodcell counting) WBC via volume, vorm en inhoud (drie dimensioneel) Body Fluid mode is de CBC mode met software om extra gevoelig te tellen. Body Fluid mode en WBC mode gaan nog niet samen Body Fluid mode geen differentiatie mogelijk (twee metingen? )

CBC instellingen op de LH 750 en het LIS LH-750 in de normale CBC mode • 0, 1 oo o • 0, 01 o o 10^9/l LIS 0, 1 10, 0 /ul LIS 10, 0 Bij liquor-differentiatie geen instellingen veranderen De gevoeligheid blijft een probleem

Liquordiff op de LH 750 De LH 750 heeft problemen met de allocatie van de WBC!

Liquordiff op de LH 750 Met plasma 50% v/v

WBC in liquor met en zonder plasma Zonder plasma Met plasma (50% v/v)

Robustheid Plasma 50% v/v

Afkapwaarde

Afkapwaarde Verdunning WBC telling LH 750 is 251 keer Nodig 28 ul voor de differentiatie. Bij 30 cellen/ul worden meer dan 500 cellen gedifferentieerd. (30 * 28 is 840) De telkamer telt dan totaal 90 cellen.

Interne variatie Leuko Neutro Lymfo % Neut Gemid. 314 233 56 74, 5 S. D. 7, 0 4, 8 9, 7 2, 5 V. C. 2, 2 2, 1 17, 2 3, 3

Carry over • Na blanco is de absolute carry over < 0, 9% (9000 cellen/ul)

Resultaten patienten • 50 liquoren onderzocht: – 45 negatief • in de telkamer < 5 cellen/ul • LH 750 uitslag < 0, 03 10^9/l • PA Lab. : alles bloedcellenarm – 5 positief (allen neutrofielen als hoofdcomponent)

Positieve patiënt 50% plasma v/v Telkamer 9600 cellen/µl

Patiënt 1

Praktijk • Minimaal 1 ml liquor – 500 ul voor de telkamer, uitslag naar LIS – 500 ul centrifugeren (5 min bij 950 g) • • • 400 ul afpitteren (naar de Chemie) 400 ul AB plasma erbij en mengen Blanco meting op de handmethode Een of twee maal meten op de LH 750 Bij uitslag leukocyten > 0, 03 diff naar LIS Liquor hoeft niet meer CITO naar PA laboratorium

Conclusie • Liquoren met verhoogde bloedcellen zijn routinematig in de WBC mode op de LH 750 te meten. • Daarvoor de bloedcellen in plasma oplossen • Vooraf een blanco run. • Vanaf 30 cellen/ul is betrouwbare differentiatie mogelijk. • Een Cytospin voor de WBC diff is dan niet nodig • Body Fluid mode gekoppeld met de WBC mode kan de detectielimiet verlagen. • Dit dient nader te worden onderzocht

Met dank aan • • • Danny de Busser Henny Heijnen Martin Kan Barbara Leen Jan van Rijn Jolanda Werkhoven-Crezee