TEHNICI ESENTIALE IN LABORATORUL CLINIC Dr Medic Veterinar

TEHNICI ESENTIALE IN LABORATORUL CLINIC Dr. Medic Veterinar Sandu Gabriel Sorin

Intrebare: 1. Este necesar sa avem un laborator in clinica? ☺

Raspunsul este da, din urmatoarele motive: • Rapiditatea efectuarii examenelor cerute de catre medicul clinician • Efectuarea de teste suplimentare in raport cu rezultatele obtinute si conditia pacientului • O mai buna comunicare intre medicul clincian si medicul de laborator • Flexibilitatea si rapiditatea efectuarii probelor • Evitarea degradarii probelor biologice din punct de vedere al depozitarii si transportului • Recoltarea probelor suplimentare in vederea stabilirii unui diagnostic de certitudine • Stabilirea unei bune conduite privind epidemiologia bolii • Satisfactia clientului !!!!!

Rolul tehnicianului veterinar : Rolul tehnicianului veterinar este de a usura si reduce timpul petrecut de catre medicul de laborator in vederea prelucrarii problelor. Tehnicianul trebuie sa genereze rezultatele in timp de medicul veterinar le interpreteaza. Pentru un rezultat mai bun si eficent este importanta o foarte buna comunicare intre personalul din laborator De asemenea rolul tehnicianului este si de a tine evidenta testelor in inventar, de a cunoaste conditiile de depozitare, de a cunoaste toate metodele pentru realizarea dezinfectiei si de mentinere a curateniei in laborator Orice greseala sau suspiciune de manopera gresita trebuie comunicata medicului responsabil cu laboratorul. O buna evidenta a primirii probelor si a emiterii buletinelor de analiza vor usura munca personalului din laborator.

Dotari si materiale necesare in laborator • Microscop : 10 x, 20 x, 40 x , 100 x Lamele 20/20; 20/40 • Lama, lama trasor

• Striclarie : pahar Erlenmeyer, Berzelius, sticla de ceas, crostalizor, bagheta sticla, flacoane antibiotic s P. Berzelius P. Erlenmeyer cristalizor Sticla de ceas Bagheta sticla Flacoane sticla

• Sita ( sita de strecurat ceaiul), placi petri, mojar. Placa Petri mojar Baterie sita

• Foarfeca, pensa, lama de bisturiu, tavita renala, ansa de insamantare, capete pipete, pipeta automata, ulei de parafina, ulei imersie, formol 10%, refractometru si centrifuga. Ansa insamantare Capete pipete refractometru centrifuga Pipeta automata Ulei+suport ulei imersie

Diff-quick, lacto fenol cu albastru de metil, solutie Lugol, hidroxil de sodiu 10%, 4% , albastru de metil diluat 1: 5, apa distilata, kit de colorare gram, albastru de metil Diff-quick Baie de colorare Kit coloratie gram

Recoltarea probelor Probe de sange: vacumtainer EDTA: hematologie automata, citologie (Babesia), examen Dirofilarioza, test Knot, MCI, testare grupa sangvina, PCR Heparina: biochimie, gaze, ioni, diferite teste rapide Citrat de sodiu: manopera de transfuzie, citologie v. heparina V. EDTA V citrat de sodiu

Clot activator: pentru obtinerea serului prin centrifugare (diferite dozari teste, etc. ) SST 2 Advance (cu gel separator): permite obtinerea serului si pastrarea acestuia in conditi optime Bactec : hemocultura Clot activator SST 2 Advanc e Bactec

• Pentru timpul de coagulare : direct pe lama de sticla. • Probe de LCR (lichid cefalorahidian) • Edta : citologie • E-swab : microbiologie

Probe de urina: recoltor urina, uri swab Probe de fecale: recoltor fecale cu si fara gel, swab

Secretii oculte : Recoltor exudat faringian cu sau fara gel Lichide de punctie : E-swab Vacutinere Edta

• Probe de fire de par (examen direct): in plic de hartie - NU seringa, recoltoare plastic. Pentru cruste se pot folosii recoltoare din plastic.

Receptia probelor

Evaluarea si situatii intalnite in examinarea probelor : a) De sange : Prezenta hemolizei Grade diferite de hemoliza Evidentierea unui ser laptos (P)

Ser de culoare galben-portocaliu (ser icteric) (p) Prezenta de coaguli in probele privind hematologia si biochimia. In cazul obtineri de ser nu impune o problema. Prezenta de artefacte, fire de par, vata, etc. Proportia ser/masa eritrocitara

b) LCR: prezenta de sange, fire de par, de vata…, prezenta de coaguli paraziti. c) De urina : Prezenta de sange (hematurie ) Prezenta de pigment biliar , flocoane , aspecte privind culoarea, turbiditatea, mirosul, prezenta de corpi straini d) Lichidele de punctie: Culoare, prezenta de celularitate, turbiditate, prezenta de flocoane. e) Fecale: prezenta de corpuri straine , par, prezenta de mucoasa, culoarea , aspectul. f) Secretii: in functie de anamneza.

EXAMENUL SANGELUI IN STARE PROASPATA � � � Concentratia proteinei in plasma (ETDA, heparina) Hematologie automata (ETDA) Executarea preparatelor cu picatura strivita intre lama si lamela ( evidentierea microfilariilor E+h) Executarea preparatelor citologice (frotiuri) in vederea calcularii formulei leucocitara (citrat de sodiu, EDTA) Fragilitatea osmotica a hematiei Determinarea grupei sangvine (EDTA)

Executarea frotiurilor

Diferite grade de autoaglutinare

EXAMINAREA , RECOLTAREA SI PRELUCRAREA PROBELOR IN VEDEREA EXAMINARII CITOLOGICE Citologia probelor de piele: simpla amprenta pe zonele lezionate si colorarea (Diff-Quick) Amprenta cutanata

Citologia urechilor: recoltarea probelor cu ajutorul betisoarelor de urechi si etalarea acestora pe lama de sticla dupa care se coloreaza. Recoltarea probelor Etalarea materialului pe lama

Citologia diferitelor secretii: se executa frotiuri , amprente daca acestea sunt compacte Citologie lichidelor provenite din diferite punctii: recoltarea acestora pe EDTA , daca lichidul nu prezinta o populatie celulara bogata se centrifugheaza la 3000 Rpm timp de 5 min si se recolteaza sedimentul; acesta se etaleaza pe lama si se executa frotiu sau ‘starfish’.

‘starfish; ’ Strivirea probelor Amprenta

Se va determina si proteina, eventual creatinina, uree, glucoza. Lichidele ce nu prezinta artefacte (fire de par, flocoane, coaguli )pot fi numarate cu ajutorul aparatului de hematologie. Citologia provenita in urma punctiilor: Dupa recoltarea probei se detaseaza acul seringii cu care a fost recoltata si cu o seringa de capacitate mai mare (10 ml) se insufla cu putere materialul pe o lama de sticla urmand etalarea acestuia cu lama trasor si colararea. TOATE PREPARATELE OBTINUTE VOR FI EXAMINATE LA MICROSCOP IN URMATOAREA ORIDINE: 10 X, 20 x, IMERSIE) COLORATIA DIFF-QUICK=10 cufundari in fiecare solutie fara clatire. Spalarea se face la final.

PRELUCAREA PROBELOR DE URINA: Sumarul de urina- se distribuie uniform o cantitate de urina pe stripul de folosit , se introduce in analizor sau se citeste ochiometric cu ajutorului flaconului Sedimentul - se folosesc containere potrivite pentru centrifuga pe care o avem. Proba se introduce la centrifuga timp de 10 min la 3 -4 mii Rpm.

Ex. Citologic: din sedimentul obtinut la centrifugare se poate executa si un examen citologic ( Diffquick) Ex. Bacteriologic : urina recoltata prin cisticenteza

PRELUCRAREA PROBELOR D. P. D. V AL PARAZITOZELOR EXTERNE Testul scoth: o banda de scoth este aplicata pe zona examinata rezultatul fiind analizat microscopic cu obiectivul 10.

Otoscopia: simpla examinare cu videotoscopul/otoscop permite evidentierea acarienilor Se mai poate recurge la recoltarea crustelor cu ajutorul unui betisor de ureche si clarificarea acestora in hidroxid de sodiu 10 %

Examenul cu lampa Wood : permite observarea in peste 50 % din cazuri a unor zone fluorescente (zone populate de dermatofiti)

Examenul firelor de par: recoltarea firelor se face din jurul leziuniilor dupa care se clarifica folosindu-se ulei mineral sau lactofenol. In cazul in care se uzeaza hidroxid de sodiu, firele de par/crustele se lasa la clarificat timp de 20 -30 minute , pana la 40 -50 minute pentru probele provenite de la cabaline. Tricograma: se recolteaza in jur de 100 de fire de par care se examineaza la microscop cu ajutorul uleiului mineral. Firele de par se aseaza in aceeasi directie. Raclatul cutanat se executa superficial sau profund cu ajutorul lamei de bisturiu nr 23 sau cu chiureta. Se plica ulei mineral pe suprafata de examinat si pe lama.

Prelucarea probelor de fecale: � � Examenul coproparazitologic Willis - metoda calitativa pentru nematode oochisturi

� Mcmaster/Stoll –cantitativa pentru oua si oochisturi Nr total ouă numărate x 400 = nr ouă per gram OPG 4 Se recomandă numărarea a 3 recoltări a 15 ml si efectuarea mediei

� Coloratia Lugol

� Sedimentare activa/pasiva

� � � Vajda Berman Dancescu Harada-Mori Euzeby Harada-Mori

M. Dancescu

Va multumesc pentru atentie! Sgs 20_20@yahoo. com