TCNICAS DE CUANTIFICACIN DE MICROORGANISMOS z VIABLES Microbiologa
TÉCNICAS DE CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS z VIABLES Microbiología experimental 2020 -1 Elaboró: Micro Exp. https: //www. facebook. com/profile. php? id=100010129183459 Dudas y sugerencias en Inbox Micro Exp. Versión 2. 0
CLASIFICACIÓN DE MÉTODOS DE CUANTIFICACIÓN § z Métodos directos § § Métodos indirectos § § Determinan microorganismos vivos y muertos en una muestra Métodos para microorganismos viables § § Determinación de la actividad metabólica, biomasa y proteínas asociada al crecimiento microbiano Métodos para microorganismos totales § § Determinación del número de microorganismos en una muestra de manera directa (microscopía). Determina microorganismos vivos, capaces de replicarse Métodos para microorganismos viables pero no cultivables § Determina los microorganismos presentes en la muestra que son imposibles de cultivar en condiciones de laboratorio
z CUENTA EN PLACA • Es un método muy versátil: Permite utilizar diversos indicadores de calidad microbiológica: Hongos y levaduras, coliformes y mesófilos aerobios. • Se usan diluciones decimales para disminuir la carga microbiana=congruencia • Diluyente: Preserva viabilidad : Solución salina isotónica, agua peptonada. –Homogeneización NOM -110 -SSA 1 -1994
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z MÉTODOS DE INOCULACIÓN PARA CUENTA EN PLACA
Otros métodos de inoculación 10 -2 z 10 -1 10 -3 10 -4 Protocolo de Miles y Misra 1. Dividir caja de medio de cultivo en sectores 2. Sembrar con micropipeta 20µL de cada dilución en diferentes (Existen variantes en donde se puede inocular hasta 100 µL, distribuidos en 5 gotas de 20µL) 3. Incubar invertida en condiciones óptimas dependiendo del grupo bacteriano. 4. Contar colonias en las diluciones en las que la UFC son contables. 5. Multiplicar el conteo por el inverso de la dilución y promediar 6. Reportar UFC/m. L, 2 cifras significativas en notación científica. Asa calibrada (Urocultivo) 1. Tomar muestra con asa calibrada 10µL 2. Realizar una estría recta en el medio de cultivo 3. Sin esterilizar, realizar una estría ondulada amplia sobre la estría recta 4. Incubar invertida en condiciones óptimas dependiendo del grupo 5. Contar colonias presentes en la placa de agar 6. Dividir el conteo entre el volumen (en m. L) 7. Reportar UFC/m. L mesófilos aerobios en agar sangre de urocultivo incubado a 37°C/24 h, 2 cifras significativas en notación científica.
EJERCICIO Miles and Misra z 10 -2 Asa calibrada 10 -3 72 UFC 8 UFC Una muestra de orina se sembró con asa calibrada de 10 µL en agar sangre y se incubó 35°C/48 h en atmósfera 5% CO 2. Se obtuvieron los resultados que se muestran en la imagen 135 UFC 10 -4 10 -1 1 UFC Incontables 135 UFC Para el análisis microbiológico de mesófilos aerobios en una muestra de agua se inoculó por el método de Miles y Misra modificado, 5 gotas de 20µL con micropipeta de las diluciones 10 -1, 10 -2, 10 -3, 10 -4 , en cada cuadrante de una caja con agar cuenta estándar después de incubación (35°C/24 h, para caso de agua), se encontraron los resultados de la figura. ¿Cuál es la concentración de mesófilos aerobios en la muestra? Factor de conversión de µL a m. L Conteo realizado en volumen inoculado Factor de dilución hay 1 µL de muestra en 100 µL de la dilución Factor de conversión de µL a m. L Conteo realizado en volumen inoculado
CUENTA EN PLACA DE z BACTERIAS AEROBIAS CONDICIONES DE INCUBACIÓN DE BACTERIAS AEROBIAS NOM-092 -SSA 1 -1994 z Se basa en CONTEO DE COLONIAS (CUENTA COLONIAS) desarrolladas después de incubar en los medios adecuados y condiciones adecuadas § • • § Medio: Agar cuenta estándar/Agar Triptona-soya. Extracto de levadura § Criterios de cuantificación (10. 1. 1): § Seleccionar cajas en el intervalo confiables de 25 -250 colonias (al menos 3 diluciones consecutivas) Límite de detección (sensibilidad)=25 UFC/ m. L –líquidos, UFC/gsólidos Mesófilos aerobios. § Fuera del intervalo añadir a resultados la leyenda “valor estimado” Las UFC= unidades formadoras de colonias= una célula o un agregado de células que originan una colonia (Gamazo C. et al, 2005) NOM-214 -SSA 1 -2014 *Para el caso de agua 35± 2°C/24 h
USO DEL CUENTA COLONIAS PARA z CONTEOS ALTOS § El cuenta colonias posee una cuadrícula de 1 cm 2 Pasos para el uso de cuenta colonias: Coloca la caja sobre la cuadrícula del cuenta colonias § Enciende la luz del cuenta colonias § Cuenta las colonias existentes dentro de 5 -7 de los cuadros de 1 cm 2 distribuyendo homogéneamente los puntos de muestreo (CA, CM, CB) § Obtener el promedio de colonias. § Multiplica el numero de colonias promedio contadas en 1 cm 2 por el área total de la caja de Petri (90 X 15 mm, usualmente). Para el caso de un diámetro de 90 mm, el área total será de 65 cm 2 , por tanto, se multiplicará por 65
LÍMITE DE DETECCIÓN CUENTA EN PLACA (Sensibilidad sólo para el área microbiológica) § El límite de detección del método de cuenta en placa es la concentración mínima bacteriana que puede ser detectada por el método y será dependiente de las diluciones utilizadas y el volumen de inoculación del método. Para calcularlo debes considerar 1. La menor dilución que se utilizó en el método, si usaste 10 -3, 10 -4 y 10 -5, utilizarás 10 -3 2. Considera el mínimo de UFC observables en esa dilución, la cual será siempre 1 UFC (no es físicamente posible distinguir fracciones de UFC) 3. Considera el volumen de inoculación utilizado, en la técnica de vertido en placa es 1 m. L, ¡pero cuidado!, para extensión superficial puede ser <100µL 3. Divide el valor mínimo de UFC observable (1 UFC) entre el volumen de inoculación (1 m. L para vertido en placa), esto será la concentración mínima observable con el volumen de inoculación. 4. Multiplícalo por el inverso de la menor dilución utilizada, para este caso 1 X 103 UFC/m. L, este será tu límite de detección. Esto indica que utilizando las diluciones propuestas 10 -3, 10 -4 y 10 -5 no podrás cuantificar muestras con menos de 1 X 10 3 UFC/m. L. En caso de no tener UFC en ninguna de la diluciones utilizadas en el método, se reporta <LD, para este casos <1 X 10 3 UFC/m. L. El “cero” analítico no existe, depende del límite de detección del método, es inválido reportar 0 UFC/m. L
EJEMPLOS PARA EL CÁLCULO DE RESULTADOS DE CUENTA EN PLACA BACTERIAS AEROBIAS PARA DUPLICADOS DE MUESTRA
EJERCICIO DE CUENTA EN PLACA DE MESÓFILOS z AEROBIOS Se determino la concentración de mesófilos aerobios presentes en una muestra de hielo marca “El hielito feliz”, para lo cual, a partir de la muestra fundida, se prepararon 3 diluciones seriadas: 10 -1, 10 -2, 10 -3 , . Las cuales se sembraron por triplicado en agar cuenta estándar y se incubaron a 37°C/ 24 h. (La muestra original no fue sembrada, pues se presumía una alta concentración de bacterias). A continuación se presentan los resultados obtenidos del conteo de colonias después de incubación Replicas Caja 1 (N° de colonias) Caja 2 (N° de colonias) Caja 3 (N° de colonias) Dilución 10 -3 5 4 6 10 -2 56 59 62 10 -1 450 510 478
z 1 Selecciona las cajas con el numero de colonias que PASO se encuentran en el intervalo de confianza: Para mesófilos 25250 colonias Dilución 10 -3 10 -2 Caja 1 (N° de colonias-UFC) 5 56 Caja 2 (N° de colonias-UFC) 4 59 Nota: La relación del conteo entre las diluciones 450 debe ser congruente al 510 igual que entre las replicas Caja 3 (N° de colonias-UFC) 6 62 478 Replicas 10 -1 PASO 2 CALCULAR EL PROMEDIO DE LAS COLONIAS OBTENIDAS PARA LAS REPLICAS DE LAS CAJAS CONFIABLES Replicas Dilución 10 -2 Caja 1 56 Caja 2 59 Caja 3 62 Promedio 59 Nota 1: En caso de tener decimales en el cálculo del promedio, redondear a números enteros Nota: En caso de tener una concentración menor a 25 o mayor a 250 UFC de mesófilos aerobio, se debe colocar la “leyenda valor estimado”, ya que la concentración de microrganismos se encuentra fuera del intervalo de confianza
CUENTA EN PLACA DE z COLIFORMES TOTALES • Condiciones de incubación: 35°C/ 24± 2 h NOM-113 -SSA 11994 • Medio: Agar bilis rojo violeta (RVBA) • Criterios de cuantificación (10. 1. 1): • Seleccionar cajas en el intervalo confiable de 15150 colonias típicas= ROJO OSCURO ( fermentadoras de lactosa). Límite de detección (sensibilidad)=15 UFC/ m. L –líquidos, UFC/gsólidos. • Contar colonias en intervalo confiable y multiplicar por el inverso de la dilución. Se reporta como UFC/ m. L (líquidos) o g (sólidos) en placa de agar bilis rojo violeta, incubados a 35°C durante 24 24± 2 h • ¡RECUERDA! En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar UTILIZANDO COMO REFERENCIA LA DILUCIÓN MAS BAJA
z PROBLEMA CUENTA EN PLACA COLIFORMES TOTALES Se realizó la cuenta en placa de coliformes totales en agar bilis rojo violeta y se obtuvieron los resultados que se presentan en la tabla: Replicas 10 -1 10 -2 10 -3 Caja 1 250 28 1 Caja 2 230 25 3 ¿Cuál sería el informe de este resultado? 26 X 102 UFC/m. L de coliformes totales en agar BRV, incubado a 35°C por 24 h
CUENTA EN PLACA DE z HONGOS Y LEVADURAS • • Condiciones de incubación: 25°C/ 5 días NOM-111 -SSA 1 -1994 • Medio: Agar papa dextrosa acidificado • Criterios de cuantificación (10. 1. 1): • Seleccionar cajas en el intervalo confiable de 10 -150 colonias típicas para hongos filamentosos y hongos levaduriformes • Contar colonias en intervalo confiable y multiplicar por el inverso de la dilución. • Se reporta tanto hongos filamentosos como levaduriformes: a) UFC/ m. L (líquidos) o g (sólidos) de mohos (hongos filamentosos) en placa de agar papa dextrosa acidificado, incubadas a 25± 1°C/ 5 días b) a) UFC/ m. L (líquidos) o g (sólidos) de levaduras en placa de agar papa dextrosa acidificado, incubadas a 25± 1°C/ 5 dias ¡RECUERDA! En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar UTILIZANDO COMO REFERENCIA LA DILUCIÓN MAS BAJA
F F 1. Cuenta de hongos levaduriformes (L), colonias suaves, convexas =11 UFC F F L L L F F F L Se sembró una muestra de agua con una dilución 10 -2. Determina la concentración de hongos levaduriformes y mohos (filamentosos) Informe: 11 X 102 UFC/ m. L de levaduras en placa de agar papa dextrosa acidificado, incubado a 25± 1°C/ 5 días. 2. Cuenta de hongos filamentosos (F), colonias duras, secas y filamentosas =17 UFC Informe: 17 X 102 UFC/ m. L de mohos en placa de agar papa dextrosa acidificado, incubado a 25± 1°C/ 5 días
CUANTIFICACIÓN POR FILTRACIÓN POR MEMBRANA z Enjuagar 3 veces c/10 m. L de diluyente estéril Al colocar sobre el medio evitar burbujas • • SE USA PARA MUESTRAS CON BAJA CARGA MICROBIANA- MUESTRAS LÍQUIDAS SIN SOLIDOS EN SUSPENSIÓN. Para Enterococos NOM-210 -SSA 1 -2014 considera confiable Para coliformes por filtración NOM-181 -SSA 1 -1998 apéndice B considera confiable conteo de 20 -80 colonias SE REPORTA EN UFC/100 m. L , si hay mas de 200 colonias , se reporta DNPC “Demasiado numerosas para contar”
MÉTODOS DE CUANTIFICACIÓN z MODERNOS COMPACT DRY: ALTERNATIVA A CUENTA EN PLACA • Diseño de alemán-japones • Método cuantitativo para numerosos microorganismos indicadores • Genera pocos residuos, autodifundible, no necesita fundir agar. • Para cada indicador microbiano utiliza un agente cromogénico específico • Para microorganismos aerobios= cloruro de 2, 3, 5 -trifeniltetrazolioindicador redox • Se reduce a FORMAZÁN de color rojo por metabolismo microbiano
z PETRIFILM : ALTERNATIVA A CUENTA EN PLACA • Diseño de USA • Método cuantitativo para numerosos microorganismos indicadores • Genera pocos residuos • Para cada indicador microbiano utiliza un agente cromogénico específico • Para microorganismos aerobios= cloruro de 2, 3, 5 trifeniltetrazolio-indicador redox • Requiere conteo
z MÉTODOS DE MUESTREO NMX-AA-042 -SFI-2015 NOM-093 -SSA 1 -1994 NOM-109 -SSA 1 -1994 *Muestreo de agua potable Frascos o bolsas estériles mín. 100 m. L Deben tener 100µL de tiosulfato de sodio 10% Muestreo de superficies Materiales limpios y estériles Traslado a temperatura de refrigeración 4°C Realizar análisis en menos de 24 h
z Muestreo de aire Uso de un sistema de muestreo de aire Donde W= flujo de muestreo y t= tiempo de muestreo, UFC= conteo de unidades formadoras de colonias INSHT, NTP 299: Método para el recuento de bacterias y hongos en aire Método de sedimentación de Omeliansky
MESÓFILOS AEROBIOS – CUENTA EN PLACA z CONTEO 21 UFC, fuera del intervalo confiable 25 -250 UFC, se debe agregar Análisis de aire, se filtró con unidad Biostage a un flujo de 18 L/min durante 10 min en agar cuenta estándar incubado a 37°C/24 h y se obtuvo el resultado de la imagen “valor estimado” Conteo en tiempo de muestreo Conversión de L a m 3 Inverso del flujo de muestreo Informe: 12 X 10 UFC/m 3 “valor estimado” de bacterias mesófilas aerobias en agar cuenta estándar, incubado a 37°C/24 h
z Si fuera por sedimentación a 10 min 17 X 10 UFC/m 3 “valor estimado” de bacterias mesófilas aerobias en agar cuenta estándar incubado a 37°C/24 h, por sedimentación
CUENTA EN PLACA DE AGAR PAPA DEXTROSA 25°C/5 DÍAS EN AIRE z § Análisis de aire, se filtro con unidad Biostage a un flujo de 18 L/min durante 5 min en agar papa dextrosa incubado 25°C/5 días y se obtuvo el resultado de la imagen Informe: CONTEO 15 UFC, dentro del intervalo confiable 10150 UFC 17 X 10 UFC/m 3 de mohos en agar papa dextrosa, incubado a 25°C/5 días
z Si fuera por sedimentación a 10 min 12 X 10 UFC/m 3 de mohos en agar papa dextrosa, incubado a 25°C/5 días, por sedimentación
z CUENTA EN PLACA TOTALES EN SUPERFICIE § Se analizó la superficie de una mesa para envasado de producto, para lo que se muestreo con esponja un área de 10 cm 2, que se colocó en 5 m. L de diluyente, posteriormente se inoculó 1 m. L del diluyente en agar Baird Parker 37°C/24 h y se obtuvo el resultado de la imagen. Volumen del diluyente usado Informa el resultado Conteo en volumen inoculado Área de muestreo Informe: 30 UFC/cm 2 de Staphylococcus aureus en agar Baird Parker, incubado a 37°C/24 h
z EJERCICIOS GRUPALES CUENTA EN PLACA
AGAR BILIS ROJO VIOLETA z § Muestra de hielo, siembra con dilución 10 -2. Agar bilis rojo violeta 35°C/24 horas El conteo supera el intervalo confiable, se debe colocar “valor estimado” Inverso de la dilución (relación de muestra en la dilución) Informe: 158 UFC rojo cereza, lac (+) Coliformes totales: lac (+) incubadas a 35 -37°C, colonias rojo cereza con o sin precipitado de sales biliares. Intervalo de conteo confiable de 15 -150 UFC 16 X 103 UFC/m. L “valor estimado” de coliformes totales en ABRV, incubado a 35°C/24 h
FILTRACIÓN POR MEMBRANA z § Agua potable de fabrica, 250 m. L filtrados por membrana de 0. 22 micrómetros y sembrados en ENDO incubado 35°C/24 h Conteo en volumen muestreado Factor para expresar en base de 100 m. L 7 UFC rojo intenso oscuro, lac(+) Medio ENDO= coliformes, incubado a 35°C= coliformes totales. Coliformes colonias lac(+), color rojo intenso, oscuras. Informe: 3 UFC/100 m. L de coliformes totales en Agar ENDO, incubado a 35°C/24 h
z ENTEROCOCOS EN CROMOAGAR Agua potable, siembra de la dilución 10 -3 en CHROMagar enterococcus /35°C/24 horas, El conteo supera el intervalo confiable, se debe colocar “valor estimado” 68 UFC azul turquesa CHROMAgar enterococcus, colonias de enterococos= azul turquesa. Inverso de la dilución (relación de muestra en la dilución)
z Pseudomonas § Agua de piscina, filtrado de 300 m. L y siembra en CHROMAgar Pseudomonas 37°C/24 h Conteo en volumen muestreado Factor para expresar en base de 100 m. L Informe: 4 UFC/100 m. L de Pseudomonas sp. en CHROMAgar, incubado a 35°C/24 h
Número mas probable (NMP) z § Concentración de microorganismos pequeña - capaces de replicarse § Estimación estadística de la densidad de bacterias en agua potable o alimentos. § Se utiliza asociado a grupos microbianos específicos como indicadores de contaminación § Indicadores de contaminación fecal § NOM 210 -SSA 1 -2014 Apendice H Normativo § Coliformes totales son bacterias Gram(-) fermentan la lactosa a 37ºC, 4 géneros: Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella (tubos positivos=turbidez+gas) § Coliformes fecales son bacterias Gram (-), fermentan la lactosa a 44. 5ºC, principalmente E. coli- indicador de contaminación por heces fecales (tubos positivos=turbidez+gas) § Consta de 3 fases: presuntiva, confirmativa y complementaria. § Se estima la concentración de microorganismos mediante tablas estadísticas basadas en el número de ensayos positivos § Se reporta como NMP/(100 m. L de muestra-líquido, 100 g de muestra-solidos)
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z RESULTADOS
FASE PRESUNTIVA z • Enriquecimiento selectivo que favorece la recuperación del grupo coliformesupresión de microbiota acompañante • Se logra en caldo lauril sulfato de sodio –inhibe Gram (+) sensibles a tensoactivos • Resultados • Positivo: turbidez + gas (en campana de Durham)= resistencia a tensoactivos y fermentación de lactosa • Negativo: • No hay turbidez= no desarrollo, sensibles a tensoactivos, inocuo • Solo turbidez= resistencia a tensoactivos pero no fermenta lactosa
FASE CONFIRMATIVA z COLIFORMES TOTALES - 35°C/24 -48 h • Enriquecimiento selectivo de • Se logra en caldo bilis verde brillante • Verde brillante -inhibe Gram (+) y algunos Gram (-) • Lactosa es fermentada por coliformes totales a 37°C=gas • Enriquecimiento selectivo de 44. 5°C/24 -48 h COLIFORMES FECALES –(termotolerantes) • Se logra en caldo EC • La temperatura de 44. 5°C se utiliza como indicador de este grupo • Lactosa es fermentada por coliformes fecales a 44. 5°C=gas • Género predominante Escherichia-Posible presencia de E. coli = 99% certeza de contaminación fecal
Caldo EC 44. 5°C/48 h Para coliformes, tubo (+)= turbidez y gas Caldo LBVB 35°C/48 h ¡Cuidado tubos con turbidez sin gas, son negativos! Muestra 2 Muestra 1 Muestra de agua purificada ¿CUANTOS TUBOS POSITIVOS HAY PARA CADA PRUEBA? ¡Cuidado algunas veces una campana repleta de gas pareciera esta vacía!
TABLAS PARA DETERMINAR NMP z Depende de las serie de de tubos inoculados ( 5, 10, 40, 51) Se debe leer en la tabla utilizada para cada caso. En caso de diluciones, deben tomarse 3 diluciones consecutiva. Para esta técnica los decimales están permitidos debido a que expresan una probabilidad estadística de que un evento suceda.
USO DE TABLA PARA 5 TUBOS C/20 m. L § 1. 2. Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de hielo de los raspados “El compa” para lo que se inoculo una serie de 5 tubos con CLSS 3 x, con 20 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 5 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 2 tubos positivos y en EC ninguno fue positivo. Los tubos que sirven para cuantificar son los de la prueba confirmativa En CLBVB se obtuvieron 2 tubos positivos y en EC ninguno fue positivo (0 tubos también es un resultado). De acuerdo a las temperaturas de incubación CLBVB 35°C/24 -48 h se asociará a un resultado de coliformes totales y CEC 44. 5°C/24 -48 h, se asociará a coliformes fecales. Para un resultado en CLBVB 35°C/24 -48 h (coliformes totales), tenemos 2 positivos, leemos en la columna “No de tubos positivos” y asociamos el NMP/100 m. L, es decir, 2. 6 NMP/100 m. L. Para CEC 44. 5°C/24 -48 h (coliformes fecales), tenemos 0 tubos positivos, leemos en la tabla <1. 1 NMP/100 m. L (este es el valor del límite de detección). PROCEDIMIENTO: 1. Selecciona los tubos que pueden ser utilizados para cuantificar (fase confirmativa). 2. Lee en la tabla el valor de NMP/100 m. L considerando los tubos positivos para cada prueba. 3. Informa los resultados. El informe será: En la muestra de raspados “El compa” se encontró una concentración de 2. 6 NMP/100 m. L de coliformes totales. Y una concentración de <1. 1 NMP/100 m. L de coliformes fecales.
INFORME DEL NMP SI SE INOCULARON Caldo LBVB 35°C/48 h = 2(+) Caldo EC 44. 5°C/48 h =2 (+) 2. 6 NMP/100 m. L de coliformes fecales Muestra 1 2. 6 NMP/100 m. L de coliformes totales Caldo LBVB 35°C/48 h = 3(+) Caldo EC 44. 5°C/48 h =2 (+) Muestra 2 5 TUBOS C/20 m. L 2. 6 NMP/100 m. L de coliformes fecales 4. 6 NMP/100 m. L de coliformes totales
USO DE TABLA PARA 10 TUBOS C/10 m. L § 1. 2. Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de hielo de granizados “El esquimal” para lo que se inoculo una serie de 10 tubos con CLSS 2 x, con 10 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 10 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 5 tubos positivos y en EC solo 1 fue positivo. Los tubos que sirven para cuantificar son los de la prueba confirmativa En CLBVB se obtuvieron 5 tubos positivos y en EC solo 1 tubo. De acuerdo a las temperaturas de incubación CLBVB 35°C/24 -48 h se asociará a un resultado de coliformes totales y CEC 44. 5°C/24 -48 h, se asociará a coliformes fecales. Para un resultado en CLBVB 35°C/24 -48 h (coliformes totales), tenemos 5 positivos, leemos en la columna “No de tubos positivos” y asociamos el NMP/100 m. L, es decir, 6. 9 NMP/100 m. L. Para CEC 44. 5°C/24 -48 h (coliformes fecales), tenemos 2 tubos positivos, leemos en la tabla 2. 2 NMP/100 m. L. PROCEDIMIENTO: 1. Selecciona los tubos que pueden ser utilizados para cuantificar (fase confirmativa). 2. Lee en la tabla el valor de NMP/100 m. L considerando los tubos positivos para cada prueba. 3. Informa los resultados. El informe será: En la muestra de granizados “El esquimal” se encontró una concentración de 2. 6 NMP/100 m. L de coliformes totales. Y una concentración de 2. 2 NMP/100 m. L de coliformes fecales.
INFORME DEL NMP SI SE INOCULARON Caldo EC 44. 5°C/48 h Muestra 1 2. 2 NMP/100 m. L de coliformes fecales 10 TUBOS C/10 m. L Caldo LBVB 35°C/48 h 2. 2 NMP/100 m. L de coliformes totales 3. 6 NMP/100 m. L de coliformes totales Muestra 2 2. 2 NMP/100 m. L de coliformes fecales ¡Cuidado con la tabla que usas! La probabilidad cambia dependiendo del numero de pruebas (5 o 10)
TABLA PARA USO DE DILUCIONES CONSECUTIVAS PARA NMP § Para el análisis de un agua residual del Valle del mezquital se realizó el análisis del NMP de coliformes totales y fecales que llegan al agua de riego de una parcela, para lo cual se sembraron 3 diluciones 10 -8, 10 -9, 1010, por quintuplicado en CLSS, para cada dilución se obtuvieron 5 tubos positivos (15 total), cada tubo fue resembrado en CLBVB e incubado 35°C/24 -48 h (15 en total) y en caldo EC 44. 5°C/24 -48 h (15 en total). § Para las tres diluciones 10 -8 (p 1), 10 -9 (p 2), 10 -10 (p 3) , en CLBVB se obtuvieron 5, 3, 1 tubos positivos respectivamente. § Para las tres diluciones 10 -8 (p 1), 10 -9 (p 2), 10 -10 (p 3), en EC se obtuvieron 2, 1, 0 tubos positivos respectivamente. § Informe al NMP/m. L de coliformes totales y fecales (p 1) PROCEDIMIENTO: 1. Selecciona los tubos que pueden ser utilizados para cuantificar (fase confirmativa). 2. Coloca los valores de tubos positivos en orden descendiente de concentración: p 1 (mas concentrado/menos diluido)>p 2>p 3 (menos concentrado/mayor dilución) 3. Busca en la tabla la combinación p 1, p 2, p 3 y lee la probabilidad asociada a esa dilución. 4. Multiplica el valor de la probabilidad por el inverso de la mediana de las diluciones utilizadas (ordenadas de mayor a menor, será la de en medio, que siempre será 1/p 2), ese será tu valor expresado en NMP/m. L (g), no olvides expresarlo con 2 cifras significativas y en notación científica 3. Informa los resultados.
TABLA PARA USO DE DILUCIONES CONSECUTIVAS PARA NMP § Para las tres diluciones 10 -8 (p 1), 10 -9 (p 2), 10 -10 (p 3) , en CLBVB a 35°C/2448 h se obtuvieron 5, 3, 1 tubos positivos respectivamente. § Para las tres diluciones 10 -8 (p 1), 10 -9 (p 2), 10 -10 (p 3), en EC 44. 5°C/24 -48 h se obtuvieron 2, 1, 0 tubos positivos respectivamente. § Informe al NMP/m. L de coliformes totales y fecales (p 1) PROCEDIMIENTO: 1. Los tubos que sirven para cuantificar son los de la prueba confirmativa En CLBVB se obtuvieron para las diluciones 10 -8 (p 1), 10 -9 (p 2), 10 -10 (p 3), 5, 3, 1 tubos positivos y en EC 2, 1, 0. De acuerdo a las temperaturas de incubación CLBVB 35°C/24 -48 h se asociará a un resultado de coliformes totales y CEC 44. 5°C/24 -48 h, se asociará a coliformes fecales. 2. Los valores ya se encuentran ordenados de más concentrado a mas diluido 10 -8 (p 1)>10 -9 (p 2)>10 -10 (p 3), por tanto para CLBVB 5, 3, 1 y para EC 2, 1, 0 3. Busca en la tabla la combinación para el CLBVB será 1. 1 (marcado con verde) y para EC será 0. 068(marcado con rojo) 4. Ahora multiplicaremos el valor inverso por la dilución mediana utilizada (1/p 2), por tanto para CLBVB= 1. 1*(1/10 -9)=11 X 108 NMP/m. L y para EC=0. 082 *(1/10 -9)=82 X 106 NMP/m. L El informe será: En la muestra de agua de riego se encontró una concentración de 11 X 108 NMP/m. L de coliformes totales. Y una concentración de 82 X 106 NMP/m. L de coliformes fecales.
z FASE COMPLEMENTARIA: IMVIC Tiene como finalidad comprobar el 10 % de los tubos positivos Pruebas bioquímicas para identificación de bacterias Aislar en EMB- colonias características de E. coli Tinción de Gram –Buscar Bacillos Gram (-) Tomar una colonia y sembrar en medio nutritivo- quitar estrés de medio selectivo – 37°C/18 -24 h Sembrar pruebas bioquímicas de Indol- Vogues-Proskauer. Citrato NOM 210 SSA 1 -2014 Apartado H. 7. 1. 5
z I ndo. L § Objetivo: Presencia de la enzima triptofanasa (desaminasa) - producción de indol § Medio: Rico en péptidos y aminoácidos (tripteína , peptona)= Medio SIM/MIO § Incubación 35 +/- 0. 5 °C por 24 +/- 2 h § Revelador: REACTIVO DE KOVAC O DE ERLICH- adicionar 0. 2 -0. 3 m. L ( 2 -3 gotas)
z DETECCIÓN DE INDOL: CONDENSACIÓN ALDOLICA EN MEDIO ÁCIDO CON p-Dimetilamino-benzaldehído (REACTIVO DE KOVAC-ALCOHOL ISOAMILICO, REACTIVO DE ERLICH –ETANOL)
z MEDIO SIM: TRIPLE RESULTADO • Medio semisólido= Inoculación por punción (picadura) § Producción de Sulfhídrico (H 2 S) § Fe. SO 4+H 2 S => Fe. S(precipitado negro) +H 2 SO 4 § Medio reductor= tiosulfato de sodio § Medio neutro-alcalino= presencia de amonio • Evaluación de la movilidad • Producción de indol • • Móvil: crecimiento disperso fuera de la picadura • Inmóvil: crecimiento sólo en la picadura Adicionar reactivo de Ehrlich • Positivo- anillo color rosa • Negativo –color amarillo
z TRIPLE RESULTADO EN SIM 1) Sulfihidrico(-), Indol (-), Movilidad (-) 2) Sulfihidrico(-), Indol (-), Movilidad (+) 3) Sulfihidrico(-), Indol (+), Movilidad (+) 4) Sulfihidrico(+), Indol (-), Movilidad (+)
z ROJO DE M V ETILOOGUES PROSKAUER • Objetivo: Determinar si el microorganismo lleva a cabo una fermentación ácido mixta o bien produce acetil metil carbinol • Medio: Rico en glucosa (Caldo RM-VP) • Incubación 35 +/- 0. 5 °C por 48 +/- 2 h • Revelador: Vogues-Proskauer detección de acetil metil carbinol -Naftol en medio básico con potasa (KOH 40%), Rojo de Metilo- metabolitos ácidos Glucosa Ác. pirúvico Ác. mixtos Acetil metil carbinol 1. 0. 6 m. L de a naftol 2. 0. 1 m. L de KOH 40% 3. Agitar/dejar reposar Diacetilo (complejo rojo) Láctico, fórmico, acético
z Se inoculan 2 tubos del mismo medio por cada cepa Incubación 48 h Adicionar al tubo 1 rojo de metilo Adicionar al tubo 2 a -naftol + KOH Agitar el tubo, oxígeno Ácidos mixtos Prueba +: Color rojo Prueba -: amarillo Formación de diacetilo Prueba +: Color rojo Prueba -: amarillo
C z i. TRATO § Objetivo: Determinar si el microorganismo es capaz de emplear el citrato (citrato permeasa) como única fuente de carbono. § Medio: Únicas fuentes de carbono= citrato (citrato permeasa) y CO 2 y Únicas fuentes de nitrógeno: N 2 y NH 4+ (Kosher o Simmons) § Incubación 35 +/- 0. 5 °C por 48 +/- 2 h § Revelador: § Azul de bromotimol- indicador p. H§ Verde= neutro, § Azul= alcalino= metabolismo de citrato= producción de carbonatos y bicarbonatos alcalinos = prueba positiva Prueba (+) Prueba (-)
EJERCICIO DE NMP PARA 5 TUBOS/ 100 m. L § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de hielo de la marca “Hielito Feliz” para lo que se inoculo una serie de 5 tubos con CLSS 3 x, con 20 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 5 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 3 tubos positivos y en EC 1 tubo positivo El informe será: § En la muestra de hielo “El hielito feliz” se encontró una concentración de 4. 6 NMP/100 m. L de coliformes totales § Y se obtuvo una concentración de 1. 1 NMP/100 m. L de coliformes fecales Nota 1: *El NMP es un numero probabilístico, por tanto la legislación permite el uso de decimales en el informe NOM-210 -SSA 1 -2014 apartado H. 1
EJERCICIO DE NMP PARA 10 TUBOS/ 100 m. L § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de agua de la marca “Charco Real” para lo que se inoculo una serie de 10 tubos con CLSS 2 x, con 10 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 8 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 7 tubos positivos y en EC 2 tubos positivos El informe será: § En la muestra de hielo “Charco Real” se encontró una concentración de 12 NMP/100 m. L de coliformes totales § Y se obtuvo una concentración de 2. 2 NMP/100 m. L de coliformes fecales Nota 1: *El NMP es un numero probabilístico, por tanto la legislación permite el uso de decimales en el informe NOM-210 -SSA 1 -2014 apartado H. 1
PRUEBAS IMVi. C Medio SIM Caldo RM-VP +Ehrlich +RM Agar EMB A partir de uno de los tubos (+) de la prueba confirmativa en EC se sembró en Mc. Conkey y después se realizaron las pruebas IMVi. C. +KOH/αnaftol Agar citrato de Simmons
COLILERT: CUATIFICACIÓN DE COLIFORMES TOTALES Y z E. COLI ALTERNATIVA A NMP • Requiere 24 h o menos para su lectura • No necesita limpieza de material de vidrio no conteo de colonias. • Resultados: • Incoloro= negativo • Amarillo coliformes totales • Amarillo/fluorescente: E. coli • Usa sustratos cromogénicos: • O-nitrofenil—β-D-galactopiranósido (ONPG) para coliformes totalespresencia de β-galactosidasa • 4 -metilumbeliferil—β-D-glucurónido (MUG) para E. coli -glucuronidasa
z
E. colite: Detección de grupo coliforme (NMP) z • Requiere 24 h o menos para su lectura • Es cualitativo-presencia/ausencia • No necesita limpieza de material de vidrio no conteo de colonias-tiosulfito y desinfectante integrado. • Resultados: • Incoloro= negativo • Amarillo coliformes • Amarillo/fluorescente: E. coli • Usa sustratos cromogénicos: • 4 -metilumbeliferil—β-Dglucurónido (MUG) para E. coli – glucuronidasa • 5 -bromo-4 -cloro-3 -indolil- β-Dpiranósido (X-gal) para colifomes totales- presencia de βgalactosidasa
Métodos z moleculares de cuantificación PCR cuantitativa o en tiempo real PCR= Reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction) • Proceso de amplificación exponencial de secuencias específicas de ADN/ADNc • Aplicaciones: • • Detección y cuantificación de microorganismos en alimentos • Titulación vírica Reactivos: • • ADNc/Primers (Cebadores), ADN polimerasa termo estable (Taq polimerasa), Buffer con Mg 2+, nucleótidos, FLUOROFORO DE DETECCIÓN SYBR (intercala a DNA) o SONDAS Taqman. Equipo: • Termociclador
PASOS GENERALES z Diseño de sondas/ Primers(cebadores) Validación de método de Extracción en matriz Comprobación de eficiencia de proceso: Electroforesis Validación de q. PCR
Validación de método: Repetibilidad Reproducibilidad Límite de detección Intervalo de trabajo (Rango dinámico) Trazado de curva de calibración sin efecto de matriz Identificar el intervalo de trabajo del método con la sonda utilizada Fuente: Pérez de Ciriza-López, Alma (2017) Desarrollo de un método rápido basado en la PCR en tiempo real para recuento de E. coli en leche cruda Trazado de curva de calibración con efecto de matriz
EJERCICIOS DE CUANTIFICACIÓN § En tu trabajo como consultor ambiental, la empresa “Aguas del charco S. A. ” te pide que realices una evaluación microbiológica de la calidad del agua colectada del pozo 1 que se presume que tiene una aportación del rio de aguas residuales cercano a la empresa, para lo cual te dan los datos obtenidos de la cuantificación de microorganismos por número más probable de coliformes para una serie de 5 tubos inoculados con 20 m. L de muestra. § Emite tu reporte del número más probable de coliformes totales y fecales presentes en la muestra y menciona si existe o no contaminación Medio y condiciones utilizadas Caldo lauril sulfato de sodio (35°C/48 h) No de tubos positivos 4 Caldo lactosado bilis verde brillante (35°C/48 h) 2 Caldo EC (44. 5°C /48 h) 1
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § En tu trabajo como analista en un laboratorio de análisis microbiológicos se te pide que determines la concentración de mesófilos aerobios de una muestra de agua potable por cuenta en placa. Emite tu reporte de la concentración presente en la muestra. Replicas Conteo de colonias por dilución Caja 1 10 -5 15 10 -4 153 10 -3 1200 Caja 2 18 164 950 Caja 3 22 179 1100
z EJERCICIOS PARA PROYECTO -INFORME
z CURVA DE MC FARLAND DE REFERENCIA PARA TODOS LOS CASOS No de tubo Turbidez (UK) 1 70 2 115 3 205 4 310 5 420 6 550 7 685 8 810 9 910 • Obtén la función que te permita relacionar la turbidez en función de la concentración microbiana (microorganismos/m. L). • Calcula el valor del límite de detección si el valor de los blancos independientes fue de B 1=0, B 2=1, B 3=7, B 4=0, B 5=2 UK
z EQUIPO 1 TURBIDIMETRÍA § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio BHI ajustado a diferentes valores de p. H. Traza la curva de desarrollo microbiano en función del p. H dados según los datos que se te presentan en la tabla. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. p. H D. O 600 nm 1 0. 06 3 0. 01 5 0. 23 7 1. 10 8 0. 08 10 0. 02 12 0. 06 Clasifica al microorganismo de acuerdo al p. H óptimo de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0 0. 034 14 0. 456 0. 5 0. 036 16 0. 464 1 0. 038 20 0. 476 2 0. 05 22 0. 482 3 0. 058 24 0. 48 4 0. 05 26 0. 472 5 0. 046 28 0. 48 6 0. 07 30 0. 478 7 0. 109 32 0. 488 8 0. 194 34 0. 476 9 0. 27 36 0. 478 10 0. 36 38 0. 45 11 0. 4 40 0. 42 12 0. 42 48 0. 4 15 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP PARA 5 TUBOS/ 100 m. L § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 5 tubos con CLSS 3 x, con 20 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 5 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/2448 h. En CLBVB se obtuvieron 4 tubos positivos y en EC 2 tubo positivo § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de pescado fresco en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado Conteo de colonias por dilución Condiciones de incubación 25°C/5 dias 10 -4 10 -3 10 -2 Caja 1 7 186 2100 Caja 2 Caja 1 Caja 2 9 164 1700 0 0 3 0 0 5 1 12 135 1 14 152
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 2 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 150 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 35 Agar Baird Parker
EQUIPO 2 TURBIDIMETRÍA § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio BHI ajustado a diferentes valores de p. H. Traza la curva de desarrollo microbiano en función del p. H dados según los datos que se te presentan en la tabla. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. p. H D. O 600 nm 1 0. 06 3 1. 35 5 0. 23 7 0. 06 8 0. 08 10 0. 02 12 0. 06 Clasifica al microorganismo de acuerdo al p. H óptimo de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0 0. 034 14 0. 456 0. 5 0. 036 16 0. 464 1 0. 038 20 0. 476 2 0. 05 22 0. 482 3 0. 058 24 0. 48 4 0. 05 26 0. 472 5 0. 046 28 0. 48 6 0. 07 30 0. 478 7 0. 079 32 0. 488 8 0. 109 34 0. 476 9 0. 27 36 0. 478 10 0. 36 38 0. 45 11 0. 4 40 0. 42 12 0. 42 48 0. 4 15 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 5 tubos con CLSS 3 x, con 20 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 4 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 3 tubos positivos y en EC 1 tubo positivo § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de carne de res en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado Conteo de colonias por dilución Condiciones de incubación 25°C/5 dias 10 -4 10 -3 10 -2 Caja 1 24 286 2523 Caja 2 26 2345 Caja 1 0 2 20 Caja 2 0 1 23 Caja 1 0 0 12 Caja 2 0 0 15
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 3 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 125 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 23 Agar Baird Parker
EQUIPO 3 TURBIDIMETRÍA Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en caldo BHI ajustado a diferentes valores de p. H. § Traza la curva de desarrollo microbiano en función del p. H dados según los datos que se te presentan en la tabla. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. p. H D. O 600 nm 1 0. 06 3 0. 05 5 0. 08 7 0. 23 8 1. 62 10 0. 02 12 0. 06 Clasifica al microorganismo de acuerdo al p. H óptimo de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0 0. 034 16 0. 456 1 0. 036 18 0. 464 2 0. 038 20 0. 476 3 0. 05 22 0. 482 4 0. 058 24 0. 48 5 0. 05 26 0. 472 6 0. 046 28 0. 48 7 0. 07 30 0. 478 8 0. 079 32 0. 488 9 0. 109 34 0. 476 10 0. 27 36 0. 478 11 0. 36 38 0. 45 12 0. 4 40 0. 42 13 0. 42 48 0. 4 14 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 5 tubos con CLSS 3 x, con 20 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 3 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 1 tubos positivos y en EC 0 tubos positivos § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de carne de res en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Condiciones de incubación Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado 25°C/5 dias Conteo de colonias por dilución 10 -3 10 -2 10 -1 Caja 1 0 27 257 Caja 2 0 20 228 Caja 1 0 0 0 Caja 2 0 0 0 Caja 1 0 0 11 Caja 2 0 0 15
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 0 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 150 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 15 Agar Baird Parker
z EQUIPO 4 TURBIDIMETRÍA § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio BHI ajustado a diferentes valores de p. H. Traza la curva de desarrollo microbiano en función del p. H dados según los datos que se te presentan en la tabla. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. p. H D. O 600 nm 1 0. 06 3 0. 05 5 0. 23 7 1. 82 8 0. 84 10 0. 04 12 0. 06 Clasifica al microorganismo de acuerdo al p. H óptimo de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0 0. 034 16 0. 456 1 0. 036 18 0. 464 2 0. 038 20 0. 476 3 0. 05 22 0. 482 4 0. 058 24 0. 48 5 0. 05 26 0. 472 6 0. 046 28 0. 48 7 0. 07 30 0. 478 8 0. 079 32 0. 488 9 0. 109 34 0. 476 10 0. 27 36 0. 478 11 0. 36 38 0. 45 12 0. 4 40 0. 42 13 0. 42 48 0. 4 14 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 10 tubos con CLSS 2 x, con 10 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 10 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 4 tubos positivos y en EC 1 tubo positivo. § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de carne de cerdo en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Condiciones de incubación Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado 25°C/5 dias Conteo de colonias por dilución 10 -3 10 -2 10 -1 Caja 1 0 60 1120 Caja 2 Caja 1 0 58 758 0 0 12 Caja 1 0 0 10 0 3 25 Caja 2 0 2 29
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 1 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 127 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 10 Agar Baird Parker
EQUIPO 5 TURBIDIMETRÍA § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio incubado a distintas temperaturas Traza la curva de desarrollo microbiano en función de la temperatura de incubación. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. T (°C) D. O 600 nm 5 0. 06 20 0. 23 37 1. 82 45 0. 09 55 0. 04 Clasifica al microorganismo de acuerdo a su temperatura óptima de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0 0. 034 26 0. 456 2 0. 036 27 0. 464 4 0. 038 28 0. 476 6 0. 05 31 0. 482 8 0. 058 34 0. 48 10 0. 05 36 0. 472 12 0. 046 40 0. 48 14 0. 07 44 0. 478 16 0. 079 48 0. 488 18 0. 109 52 0. 476 20 22 0. 27 0. 36 56 58 0. 478 0. 45 23 0. 4 60 0. 42 24 0. 42 65 0. 4 25 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 5 tubos con CLSS 3 x, con 20 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 2 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/2448 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 1 tubo positivo y en EC o tubos positivos § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de alitas de pollo en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Condiciones de incubación Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa 25°C/5 dias acidificado Conteo de colonias por dilución 10 -5 10 -4 10 -3 Caja 1 6 186 2123 Caja 2 Caja 1 5 164 2563 0 0 15 Caja 2 Caja 1 0 0 13 0 1 13 1 2 15 Caja 2
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 15 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 135 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 22 Agar Baird Parker
EQUIPO 6 § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio incubado a distintas temperaturas Traza la curva de desarrollo microbiano en función de la temperatura de incubación. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. T (°C) D. O 600 nm 5 0. 06 20 1. 37 37 0. 23 45 0. 09 55 0. 03 Clasifica al microorganismo de acuerdo a su temperatura óptima de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0. 034 2. 6 0. 456 0. 2 0. 036 2. 7 0. 464 0. 038 2. 8 0. 476 0. 05 3. 1 0. 482 0. 8 0. 058 3. 4 0. 48 1. 0 0. 05 3. 6 0. 472 1. 2 0. 046 4. 0 0. 48 1. 4 0. 07 5 0. 478 1. 6 0. 079 6 0. 488 1. 8 0. 109 8 0. 476 2. 0 2. 2 0. 27 0. 36 12 24 0. 478 0. 45 2. 3 0. 4 32 0. 42 2. 4 0. 42 48 0. 4 2. 5 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de agua potable de tu casa, para lo que se inoculó una serie de 10 tubos con CLSS 2 x, con 10 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 6 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 2 tubos positivos y en EC 0 tubos positivos. § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de nueces en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Condiciones de incubación Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado 25°C/5 dias Conteo de colonias por dilución 10 -4 10 -3 10 -2 Caja 1 0 3 25 Caja 2 0 2 26 Caja 1 0 0 0 Caja 2 0 0 0 Caja 1 0 27 257 Caja 2 0 20 228
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 45 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 226 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 12 Agar Baird Parker
EQUIPO 7 § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio incubado a distintas temperaturas Traza la curva de desarrollo microbiano en función de la temperatura de incubación. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. T (°C) D. O 600 nm 5 1. 82 20 0. 23 37 0. 03 45 0. 09 55 0. 04 Clasifica al microorganismo de acuerdo a su temperatura óptima de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0. 034 3. 6 0. 456 0. 3 0. 036 3. 7 0. 464 0. 6 0. 038 3. 8 0. 476 0. 9 0. 05 4. 1 0. 482 1. 2 0. 058 4. 4 0. 48 1. 5 0. 05 4. 6 0. 472 1. 8 0. 046 5. 0 0. 48 2. 0 0. 07 7 0. 478 2. 2 0. 079 12 0. 488 2. 4 0. 109 15 0. 476 2. 8 0. 27 0. 36 18 24 0. 478 0. 45 3. 0 0. 4 32 0. 42 3. 2 0. 42 48 0. 4 3. 4 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética (k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 10 tubos con CLSS 2 x, con 10 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 4 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 2 tubos positivos y en EC 1 tubo positivo. § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de cacahuates en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Condiciones de incubación Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado 25°C/5 dias Conteo de colonias por dilución 10 -5 10 -4 10 -3 Caja 1 1 36 2500 Caja 2 2 27 2623 Caja 1 0 0 0 Caja 2 0 0 0 Caja 1 5 30 350 Caja 2 3 27 380
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 17 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 248 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 13 Agar Baird Parker
EQUIPO 8 § Se realizó la inoculación de una bacteria aislada de una muestra de suelo en medio incubado a distintas temperaturas Traza la curva de desarrollo microbiano en función de la temperatura de incubación. Considera el valor del límite de detección al graficar los valores por debajo de ese límite. T (°C) D. O 600 nm 5 0. 06 20 0. 03 37 0. 03 45 0. 23 55 1. 82 Clasifica al microorganismo de acuerdo a su temperatura óptima de crecimiento que presenta
z Al valor de p. H óptimo de crecimiento se sembró el microorganismos en un matraz nefelométrico t incubación (h) Abs 600 nm 0. 034 3. 6 0. 456 0. 3 0. 036 3. 7 0. 464 0. 6 0. 038 3. 8 0. 476 0. 9 0. 05 4. 6 0. 482 1. 2 0. 058 4. 8 0. 48 1. 5 0. 05 5. 0 0. 472 1. 8 0. 046 5. 5 0. 48 2. 0 0. 07 7 0. 478 2. 2 0. 123 12 0. 488 2. 4 0. 149 15 0. 476 2. 8 0. 27 0. 36 18 24 0. 478 0. 45 3. 0 0. 4 32 0. 42 3. 2 0. 42 48 0. 4 3. 4 0. 45 § Traza la curva de crecimiento e identifica las fases de crecimiento. § Obtén el gráfico log [microorg. /m. L] en función del tiempo de incubación. § Determina el tiempo de generación (g) y la constante cinética(k) obtenida para este microorganismo en las condiciones dadas. *Si el valor de abs obtenido es menor al limite de detección coloca el valor del límite de detección.
z EJERCICIO DE NMP § Se realizó análisis del NMP de coliformes totales y fecales a partir de una muestra de agua potable de tu casa, para lo que se inoculo una serie de 10 tubos con CLSS 2 x, con 10 m. L de muestra, incubados a 35°C/48 h obteniéndose 10 tubos positivos que se resembraron en CLBVB a 35°C/24 -48 h y caldo EC 44. 5°C/24 -48 h. En CLBVB se obtuvieron 1 tubo positivo y en EC 0 tubos positivos. § El informe será: Caldo LBVB 35°C/48 h Caldo EC 44. 5°C/48 h Consulta la NOM-127 -SSA 1 -1994, evalúa si hay contaminación microbiológica
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de una muestra de paté de hígado de res en diferentes medios y condiciones de cultivo. Emite tu informe de los indicadores microbiológicos presentes Medio de cultivo Condiciones de incubación Agar cuenta estándar 35°C/48 h Agar bilis rojo violeta 35°C/24 h Agar para dextrosa acidificado 25°C/5 dias Conteo de colonias por dilución 10 -6 10 -5 10 -4 Caja 1 0 26 237 Caja 2 0 24 245 Caja 1 0 0 0 Caja 2 0 0 0 Caja 1 0 0 7 Caja 2 0 0 5
EJERCICIO CUANTIFICACIÓN: CUENTA EN PLACA § Se realizó el análisis microbiológico de aire, agua de proceso y de la superficie de procesamiento del producto y se obtuvieron los resultados de la tabla Medio de cultivo Condiciones de incubación Muestreo Matriz Conteo Agar ENDO 44. 5°C/24 h Filtración 200 m. L Agua de proceso 2 Agar cuenta estándar 37°C/48 h 30 min a 20 L/min Aire del área de proceso 256 37°C/48 h 10 cm 2 en 5 m. L de diluyente, se inoculó 1 m. L Mesa de envasado 12 Agar Baird Parker
MATERIALES DE CONSULTA § § Métodos de cuantificación de microorganismos viables https: //www. youtube. com/watch? v=o. OVcbloehn 8&t=26 s § Método para realizar diluciones seriales decimales https: //www. youtube. com/watch? v=4 f 3 uiwiio. Rg&fbclid=Iw. AR 39 Nsdn. Rwp. QAUk. IRv 6 x 6 Huw. Rz. P 7 LF 9 Kr. ITyv. F 9 l. Rs. Bo. Fdvll. T 5 MNkoa. Vg § Método para realizar diluciones seriales decimales en alimentos https: //www. youtube. com/watch? v=ojl_o. Ib. V 4&fbclid=Iw. AR 3 i 0 IKNGmc 14 kg. MMRGMEexdn. NJen. OZxtg. RBK 5 Igfml-0 -bl. DHlsmg. ZCsmo § Análisis de mesófilos aerobios por cuenta en placa mediante siembra por vertido (siembra incorporado) https: //www. youtube. com/watch? v=Lvo_JPPw. N 4 c&t=30 s&fbclid=Iw. AR 1 YF q 3 h. GJmh. J 9 Lw. RSb_UGpsn. B 94 dz 4_11 OT-sqa. Cu. Ha. HJVOys. LGf. Qc. Nk. Bo Análisis de mesófilos aerobios por cuenta en placa mediante siembra por extensión superficial (siembra en superficie) § https: //www. youtube. com/watch? v=KX 1 m. Jn 4 o 2 Hs&fbclid=Iw. AR 0 x 2 p 8 Nh. Wfsnj. ZWMIk. I 2 vr. BSKX_Bk 5 S 55 sf. P 91 AVW 3 Rc 8 HP 6 x. EN 0 sq 8 KTI Cuenta en placa de coliformes totales por vertido https: //www. youtube. com/watch? v=nl_2 n 3 dxdq. U&fbclid=Iw. A R 3 Wf. T_XEs. LBKRZe. DCA_iuy. It 0 v. Sl. N 31 Hd. KPy 28 Rpog 4 z. XBey. Gb 7 PGUOp. A § Recuento de coliformes totales y fecales (E. coli) utilizando petrifilm https: //www. youtube. com/watch? v=posc. Ap 07 uco&fbclid=Iw. A R 36 s. Rfl. Cqm. Sna 3 YQEv. W 9 KNy. NDmn. DV 8 lwd. QA 0 m. UHXa. Bh-2 a. BPwr. ZNAzxa. I § Sistema Petrifilm 3 M https: //www. youtube. com/watch? v=2 Cm. G_e. Cq. B_M&fbclid=I w. AR 3 KZ 2 u 6 OI 1 px. BQY 9 pl_M 2 f. Qz. GGq. Eqp. F 5 e 1 r. Rb. SIh. Nx. Mq. LPh 59 NTU Oq 4 Qw § Sistema compact dry https: //www. youtube. com/watch? v=J 4 nusv. L 8 g. QE&fbclid=Iw AR 2 RXY 4 E 4 Cgt. Zl. Egm. ZNIfj. R 9 ED 44 qnfb. St. IX 32 TGPU 94 iay. N 5 dxtjs. Nwxg § Sistemas de muestreo de aire para análisis microbiológicos https: //www. youtube. com/watch? v=l. DRDFM 7_qc&fbclid=Iw. AR 14 r. Tsg. Bo 6 R 9 Er. Ec. XVap 4 xd 3 tc. Kc ao. K 9 b. Q 8 s. Xq. UIXVCR 5 y. By. GYKpt. V 4 VDk
§ Muestreo microbiológico de aire y superficies https: //www. youtube. com/watch? v=n. Evx 1 zah 3 kk&fbclid=Iw. AR 289 x 9 Pd. AJ YPCF 4 a 2 w 7 N 3486 OHMi. WPn 83 Wk 2 -r. V 2 Fv 0 Bye 2 t. YT_MVLGp. RQ § Muestreo microbiológico de agua https: //www. youtube. com/watch? v=a. S 89 Fz 94 UXE&fbclid=Iw. AR 1 d. E 1 n 6 er k-Bvly. UDrcm 4 yp 95_Paa. Chl. Doe 1 KCKEst. Ybbil. ZZTo. Kns. O 7 f. Q § Método de cuantificación mediante el número más probable (NMP) https: //www. youtube. com/watch? v=35 NG 4 BUy. Tlk&t=210 s&fbclid=Iw. AR 0 1 k. Bq. LOi 9 F 9 dqd. TR 9 As. Noz. Ptrgo. ESJJd. Dq 4 agn-p. O_k. Nbe. GKj. Se. CDVogw § Sistema colilert para la cuantificación o detección de coliformes https: //www. youtube. com/watch? v=ME 3 p. Vs. Di. YLA&fbclid=Iw. AR 1 YFq 3 h. G Jmh. J 9 Lw. RSb_UGpsn. B 94 dz 4_11 OT-sqa. Cu. Ha. HJVOys. LGf. Qc. Nk. Bo § Cuantificación por asa calibrada (Urocultivo) https: //www. youtube. com/watch? v=h. Ch. Ippu. Lj. G 8&fbclid=Iw. AR 2 Bg. LLwhk CCrbre. HP 821 NAl. SFVEOgi. Wtjk. Je 6 tju 0 P 2_drosn. Vbhhxmv. Qs Cuantificación por Miles y Misra modificado (Sekhar et al, 2015) https: //www. youtube. com/watch? v=LEqm. Wm. BVIp. A&fbclid=Iw AR 3 bfrn. VMPyu. Ep 9 ehw 0 Q 3 f. C 0 k 0 lp 7 Dfkp. YDu_az. PPUKz. HAHIWE-e. Bu. Qm. MM § Método de cuantificación mediante filtración por membrana https: //www. youtube. com/watch? v=Qcu. Yj. K 6 Q 7 sc § § Normatividad para la preparación de diluciones microbiológicas NOM-110 -SSA 1 -1994 http: //www. salud. gob. mx/unidades/cdi/nom/110 ssa 14. html § Normatividad nefelometría y filtración por membrana NOM 181 -SSA 1 -1998 http: //www. salud. gob. mx/unidades/cdi/nom/181 ssa 18. html? fbcl id=Iw. AR 0_Law. UJFHt. Khoayd. Zt. OCVHit. MBOK 1 t. Fs. M 6 m. Ktah. JLi gd. Khj. DEZCpg_t-c Normatividad NMP coliformes y enterococos NOM-210 -SSA 12014 http: //dof. gob. mx/nota_detalle. php? codigo=5398468&fecha=26 /06/2015 § Normatividad cuenta en placa de bacterias aerobias (mesófilas, psicrótrofas, etc). http: //www. salud. gob. mx/unidades/cdi/nom/092 ssa 14. html#: ~: t ext=1. 1%20 Esta%20 Norma%20 Oficial%20 Mexicana, un%20 m edio%20 s%C 3%B 3 lido%2 C%20 incubado%20 aer%C 3%B 3 bica mente.
§ Normatividad para la cuantificación de coliformes totales en placa NOM-113 -SSA 1 -1994 http: //www. salud. gob. mx/unidades/cdi/nom/113 ssa 14. html ? fbclid=Iw. AR 0 a 8 ybs. Fpzn 339 pmuzkw 0 y 8 FKcir. SSGe. Pa. Lh. I WWub. Np. Ho 8 r. WXc 97 yi 68 Ho § Normatividad para la cuantificación de coliformes totales por el NMP NOM-112 -SSA 1 -1994 http: //www. salud. gob. mx/unidades/cdi/nom/112 ssa 14. html ? fbclid=Iw. AR 289 x 9 Pd. AJYPCF 4 a 2 w 7 N 3486 OHMi. WPn 83 Wk 2 -r. V 2 Fv 0 Bye 2 t. YT_MVLGp. RQ § Normatividad para la determinación de coliformes totales y fecales por filtración por membrana https: //www. gob. mx/cms/uploads/attachment/file/166804/N MX-AA-102 -SCFI-2006. pdf § Normatividad para la cuantificación de mohos y levaduras NOM-111 -SSA 1 -1994 http: //www. salud. gob. mx/unidades/cdi/nom/111 ssa 14. html ? fbclid=Iw. AR 36 s. Rfl. Cqm. Sna 3 YQEv. W 9 KNy. NDmn. DV 8 lwd. QA 0 m. UHXa. Bh-2 a. BPwr. ZNAzxa. I § Normatividad para la cuantificación de Pseudomonas y Clostridium sulfito reductores NOM-201 -SSA 1 -2015 https: //dof. gob. mx/nota_detalle. php? codigo=5420 977&fecha=22%2 F 12%2 F 2015&fbclid=Iw. AR 2 X 1 Os. Juesg. UDlp. Krk. NA 3 ztl. XQ 6 HAOu. CZ 0 Gl 460 WE Ypg 0 ehv. LPJJN 7 Zj. BE § Uso del cuenta colonias https: //www. youtube. com/watch? v=Gptwo 7 MINU&feature=share&fbclid=Iw. AR 0_9 Xpvd WXE_Hk. Ol 20 YD 3 u. Dk. EZe_kmkhu. Sj_6 sg. Pkp. OFi xk-15 K 7 ty. H 5 nc
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