Taxonoma Fungal l La clasificacin fungal es nueva

Taxonomía Fungal l La clasificación fungal es nueva y ha cambiado l Clasificación, según Bar (1988): División l Subdivisión l Clase l Orden l Familia l Eumycota Mastigomycota Chytridiomycetes Spizellomycetales Neocallimasticaceae

Género l El género es distinguido por la morfología l l Thallus: Monocéntrico y policéntrico. Rizoide: Filamentos y bulbos. Zoosporas: Uni- o Multiflageladas Todos los géneros rizoides tiene filamentos, excepto las especies caecomyces. (Trinci et al. 1994)

Especies l Son separadas por sus características morfológicas y estructurales. l Las Piromonas y Sphaeromonas se asumía que eran protozoarios por lo que fueron cambiados a: Piromyces y Caecomyces (Trinci et al. 1994)

Fungis Policéntricos l Neocallimastix joyonii (Breton et al. 1989) Orpinomyces joyonii (Trinci et al. 1994) debido asu patrón de crecimiento policéntrico l Ruminomyces y Anaeromyces tienen características similares al monocéntrico

Aislamiento y Enumeración l Han sido aislados de: bovinos, caballos, canguros y elefantes l En heces y tractos gastrointestinales y fluido ruminal l Orpinomyces fue aislado en charcos y pasturas de las vacas l La dieta animal tiene efectos sobre las poblaciones fungales

La biomasa fungal es difícil determinar l La estimación: método gravimétrico con digestión enzimática con quitina l El conteo (103 – 107 ml) no provee una adecuada estimación fungal l Para el tamaño de las poblaciones fungales se han utilizado diluciones en agar y otra soluciones l

Condiciones para aislamiento Anaerobiosis l p. H de 6. 5 a 6. 7 l T° de 39° l Materiales para aislamiento l l l Bufer: Carbonato/Fosfato Fluido ruminal Resazurina (indicador redox) Carbohidratos Antibióticos

Almacenamiento l T° de 39° C l Fibra en agar l Nitrógeno líquido l Dimetilsulfóxido l Enfriamiento a 1. 5°C l Glicerol

Cultivos y Almacenamiento l l l l Mantenidos por transferencia frecuente ( 2 a 7 días). Algunas especies 24 a 48 horas. Otros Intervalos semanales. Isolados monocéntricos – 2 a 3 días. Isolados policéntricos – semanalmente. Mantenimiento largo en tiempo – 39 o. C en fibra Sisal embebida en agar. En nitrógeno líquido con dimetilsulfoxido como crioprotector para “fungi” anaeróbico sirve también para largo tiempo.

l Preservación 1. 5 o. C por minuto hasta 70 o. C con glicerol como crioprotector. l Resucitados a 39 o. C. l Restos de esporas “fungi” ruminales, l Esporas anaeróbicas de heces. l Inducidas in vitro, no germinadas in vitro (Wubah et al. , 1991 b).

l proceso de manipulación de formación y germinación de esporas – método de conservación. l “Fungi” anaeróbicos no son listados en la ATCC (American Type Culture Collection) como “Fungi” filamentosos o Protistas.

6. Protozoarios Ruminales 6. 1 Introducción l l l Basados en el tamaño relativo Primeros microorganismos ser descubiertos Muy móviles y viables en el rúmen y retículo Inmóviles y aparentemente desintegrados en el omaso y abomaso. Los Protozoarios celulares no identificados en intestino delgado. Utilizados como alimento.

l Explicación de Sobrevivencia l Especificidad del hábitat, esencialidad para el huésped. l Defaunación. l Alta especialización al rúmen o hábitat. l Actividades metabólicas (relación bacterias y “fungi”).

l l l l Protozoas Flagelados. Baja población Zoosporas Fúngicas (decrecimiento) Limitados Esquema de Clasificación ha cambiado algunas veces en 30 años. Terminología difícil Referencia a “Holotrichs” y “Entodiniomorphs”

Papeles en el rumen: Clasificación de efectos a) Medio ambiente del rumen b) Componentes de la sangre c) Metabolismo y digestión en el rumen d) Sobre el animal e) Fermentación de carbohidratos solubles Ø Holoctrichs como principal degradador Ø Entodinromorphs Ø Procurar incrementar la población de Holotrichs

l Digestión de almidón l Entodiniomorphs como principales degradadores l Isotricha l Uso como fuente de energía o síntesis intracelular de polisacáridos l Principales productos

Digestión de Carbohidratos Estructurales l l l Actividad celulolítica (orden entodiniomorfos) Epidinium caudatum, Eudiplodium maggii, Ostrocadinium dilobum y varias Spp Entodinium Holotricha Enzimas que degradan hemicelulosa (10 géneros, entodiniomorfos, subfamilias Diplodiniinae y Ophryoscoliceneae. Baja actividad Orden holotricha

l Monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos l Spp de protozoarios poseen la hidrolasa glicosidica l Pectina es depolimerizada por los protozoarios (metanol, ac. Galacturónico o poligalactoranidos)

Digestión de la Proteína l Los entodiniomorfos digieren la caseína insoluble l Son importante en la degradación de proteínas insolubles l Sp isotricha (caseína soluble e insoluble) l Mayor actividad proteolítica en el citoplasma

Absorción y digestión de bacterias l l l -Gutierrez 1955. Isotricha. No se desarrolla sin bacterias. -Probablemente bacterias proveen mayoría de N para crecimiento. -Inhabilidad para biosintetizar o interconvertir aminoácidos (E. caudatum. -Pérdida gradual de enzimas. -Compuestos preformados por crecimiento de bacterias -Protozoarios pueden “absorber” < 1% de total bacterial / minuto concentrados.

l Productos de digestión de bacterias: Aminoácidos , 50% retenido VFA Amonia l Amoniácidos bacterianos en el animal, digestibilidad de proteina protozoaria. l l Limitado pasaje ruminal. Relacionado con normal después de alimentación.

Cambios en población de protozoarios l Establecimiento de poblaciones: l Contacto directo en etapas jóvenes. l Presencia en la boca de la madre l Saliva en las plantas l Aerosoles entre animales

Variación en el horario Diferencias entre entodiniomorfos y holotricos Alimentación 1 / día, entodiniomorfos 5 -6 horas / gradual 20 a 22 hrs. Holotrichs, pico momentos antes o después de alimentación / Entodiniomorfos Diluciones asociadas a alimentación. Y cambios en crecimiento celular. Migraciones celulares: Paredes rumen, retículo y porción ventral.

OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA CONCENTRACION DE PROTOZOARIOS DIETA forraje : concentrado l 20 – 40 % de concentrado maximiza la Ι protozoariosΙ l 60 % entodinium El efecto del concentrado se puede disminuir controlando el consumo FRECUENCIA DE ALIMENTACION GEOGRAFICAS i. e. Polyplastron multivesiculatum VARIACION ANIMAL i. e. Ophryoscolecidae y Caloscolex

Clasificación de los Protozoarios Ruminales

Identificación de Protozoos ruminales l Como nombrar las partes de un protozoo. l Parte bucal hacia delante se le marca a las 12 hrs. · La parte mas cercana al observador se le denomina superficie superior y la contraria se le denomina superficie inferior.