T Biomeditsiini osakond Hamba loomuliku reparatsiooni soodustamine kasutades

TÜ, Biomeditsiini osakond Hamba loomuliku reparatsiooni soodustamine kasutades väikese molekuli GSK 3 antagonisti Alina Kostõgova Natalja Võssotskaja STOM-4 www. Ta. googleslidesppt. com _ 30+ Ready Made Google Slides & Power. Point Presentation for Free Tartu 2017

Promotion of natural tooth repair by small molecule GSK 3 antagonists Vitor C. M. Neves, Rebecca Babb, Dhivya Chandrasekaran & Paul T. Sharpe Received: 29 September 2016 Accepted: 24 November 2016 Published: 09 January 2017 https: //www. nature. com/articles/srep 39654

Ettekanne sisukord 01 Sissejuhatus teemasse 02 Materjalid, metoodika 03 Tulemused 04 Arutelu

Sissejuhatus

Dentiini reparatsioon Dentiin – elus hamba mineraal, toodetakse odontoblastide poolt. Hamba mineraalide kahjustus Pulbikoe paljastumine Reparatsiooni aktivatsioon Odontoblastide teke Dentiini sild Traumajärgne kahjustus või infektsioon (kaaries). Pulbikude muutub väliskeskkonnale avatuks ning võib infitseeruda. Kui pulbikude paljastub, aktiveerub loomulik reparatsiooni protsess. Mesenhümaalsete rakkude diferentseerumine odontoblastideks. Odontoblasti-tüüpi rakud produtseerivad reparatiivset e tertsiaarset dentiini, mis moodustab õhukese riba. Kaitseb pulbi nakkusest, isoleerib väliskeskkonnast.

Wnt/β-cat signaliseerimise rada • • Rada aktiveerimine on varajane vastus koekahjustusele ning on oluline taastamise stimuleerimises kõikides kudedes. Axin 2 on negatiivne regulaator ja ka sihtmärk käesolevas signaalirajas. Peamine tsütoplasmaatiline komponent signaalirajas on ensüüm, glükogeeni süntaasi kinaas 3 (GSK-3), mis Wnt ligandi puudumisel fosforüleerib β-kateniini ja Axin-i, mis viib nende lagunemiseni. Wnt ligandi olemasolul, GSK-3 toime on pärsitud, mis võimaldab β-kateniinil siseneda tuumasse kus ta interakteerub Lef/Tcf transkriptsioonifaktoritega selleks, et reguleerida märklaudgeenide ekspressiooni, millede seas on AXIN 2. = Wnt signalisatsiooni aktivaatorite e. GSK 3 inhibiitorite lisamine pakub tõhusa viisi, et stimuleerida dentiini moodustumist ja seega taastada kaotatud dentiini uue looduslikult tekkinud dentiiniga

Materjalid, metoodika

Uuringu ülesehitus • Käesoleva uuringu eesmärgiks oli uurida, kas loomuliku dentiini paranemist saab suurendada stimuleerides reparatiivse dentiini teket. • Täiskasvanute CD 1 metsiktüüpi hiirte esimesed ülemised purihambad olid kasutatud ja mõjutatud kontrollitud puurimisega. • Ravimainete valik põhines varem tehtud teadusartiklitel ning valiku tehes arvestati ka edaspidist kasutamisvõimalust igapäevases hambaravis.

Materjalid ja meetodid 17 IA 4 rakud Puurimine, hammaste eemaldamine: 21 G nõel luksaatori asemel. Hammaste hoiustamine PBS-is. Skalpell, pintsetid. Pulbikoe säilitamine Sigma RNAlater-is. Ravimainega ja kontrollrühma sööde. MMT lisamine, formasaani teke. Thermo Multiskan Ascent 354 microplate reader. Puurimise protokoll Üldanesteesia; ülemised molaarid; ümar karbiidpuur; nõel pulbiõõne avamiseks; Pulbiõõne sulgemine: MTA Kollageenkäsn - BIO - CHIR - Tideglusib - - - Tsütotoksilis use test In vitro ravimi vabastamine 17 IA 4 rakud Falcon cell culture inserts. Kolspon kuubikud koos ja ilma ravimaineteta. TRIzol-ga RNA kogumine. Pulbikoe kogumine

Materjalid ja meetodid X-gal substraat Beeta-galaktosidaas lõhub X-gal substraati, tekib galaktoos, mis oksüdeerub lahustumatu värviliseks aineks. Hammaste lahastamine, fikseerimine 4% PFAsse, skaneerimine, 2 D pildid, tulemuste hindamine. Q-PCR = Real-time PCR RNA eraldamine TRIzoliga, hulga määramine Nanodrop seadmega, pöördtranskribeerimine c. DNAsse. Mikro KT analüüs Histoloogia 4 nädalat 19% EDTA lahuses, fikseerimine vahaploki sisse, 8 μm lõigud. Masson’i trikroomvärving. β-galaktosidaasi värvimine

Tulemused

Et testida Axin 2 induktsiooni in vivo ülemised molaarid olid puuritud ja tehtud 0, 13 mm ava nii, et oleks avatud pulp. ED avatud dentiin; EP avatud pulp; CS kollageenkäsn; GI klaasionomer; Kollageenkäsnad olid lõigatud ja imutatud lahuses - kolmes erinevas inhibiitorites (BIO, CHIR, Tideglusib). Pärast olid paigutatud kaviteedi sisse kontaktis pulbiga. Klaasionomeertsemendi kasutati, et kata käsnad, mis olid kaviteedi sees.

Töödeldud hambad olid eemaldatud 24 tunni pärast koos kontrollhammastega (MTA, immutamata kollageenkäsn). Pulbirakud olid testitud Axin 2 ekspressioonile kasutades q. PCR. Leiti, et Axin 2 ekspressioon pulbirakkudes, mis olid töödeldud inhibiitoritega, oli 3 korda suurem, kui kontroll gruppis.

Analüüs näitas, et mineralisatsioon tekkis kõigil kolmel agonistidel võrreldes kontrollrühmaga kus ei olnud ilmselget muutust. Mineralisatsioon inhibiitoritega oli umbes kaks korda suurem kui kontrollrühmas ja 1, 7 korda suurem kui MTA-l. Palju reparatiivset dentiini tekkis 6. nädalaks, kui hambad olid ravitud BIO, CHIR; aga Tideglusib täitis terve kaviteedi oklusaalselt pulbini. Kõige tähtsam on see, et pulp jäi vitaalne võrreldes kontrollrühmaga.

Arutelu

o Eemaldada kaariest ja taastada hambastruktuuri kasutades mineraalseid täitematerjale. o Kuna suured hambakahjustused põhjustavad nekroosi, on vaja välja töötada meetodit, mis võiks stimuleerida reparatiivse dentiini teket. o Selles meetodis on kasutatud väikeste molekulite agoniste, kuna see meetod on lihtne, tasuv ja tõestatud eksperementaalsete andmete ja kliinilise kasutuse järgi. o Selle meetodi abil on võimalik saavutada kiiret väikeste molekulide agonistide vabastamist ja käsna kasutamine on parem viis seda tagada.

o Kõik kolm agoniste näitasid oluliselt suurenenud mineralisatsiooni kahjustatud kohas võrreldes MTA-ga või ainult käsna kasutades. o Väikesed doosid antagoniste olid nii efektiivsed, et võimaldasid peaaegu täielikult taastada kahjustatud hambakudet 6 nädala pärast. o Selline lihtne lähenemine võimaldab kasutada seda produkti kliinilises praktikas, kuna ta soodustab reparatiivse dentiini teket ja kaitseb pulbi, mida tänapäeval ravitakse anorgaaniliste tsementidega.

Kasutatud materjalid Neves et al “Promotion of natural tooth repair by small molecule GSK 3 antagonists”, 2017. https: //en. wikipedia. org/wiki/MTT_assay https: //en. wikipedia. org/wiki/Trizol https: //en. wikipedia. org/wiki/Wnt_signaling_pathway

Täname kuulamast! Küsimused?