Structures Fonction des Protines Pr F BENABDESSELAM MAIZA

Structures / Fonction des Protéines Pr F. BENABDESSELAM – MAIZA Laboratoire Biotechnologies végétales et Ethnobotanique Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie Université A/ Mira de Béjaia

PROTEINES : Rappels Les Protéines sont des macromolécules ( polymères biologiques formés d’ Acides Aminés Les Acides aminés naturels sont en général de la série L à l’exception de certaines protéines des parois bactériennes ( D) Les acides aminés sont liés par une liaison peptidique La séquence des Acides aminés ( enchaînement) constitue la structure primaire de la protéine et détermine sa structure tertiaire. L’enchainement des acides aminés forme le polypeptide , La Protéine désigne la chaine polypeptidique repliée et éventuellement modifiée. Une Protéine peut être constituée de plusieurs chaînes polypeptidiques

Rôles des Protéines �Plusieurs rôles selon leur nature : �- Rôle structurel : ex actine , collagène … �-Rôle dans motilité : ex myosine �- Rôle catalytique : enzymes �- Rôle hormonal : Insuline �- Rôle de transport de molécules : Apolipoprotéines �Ect………

Les vingt acides aminés naturels

Acides aminés hydrophobes

Les acides aminés polaires Les acides aminés S, T et Y peuvent être phosphorylés sur la fonction OH Y et W sont des acides aminés aromatiques ( comme F )

Acides Aminés chargés

Les Protéines constituées d’Acides aminés

Rappels sur les propriétés des acides aminés Amphotères ( fonction acide et fonction basique) Titration des acides aminés charges variables selon le p. H du milieu et les Pk des fonctions alpha carboxylique et alpha amine et des fonctions de la chaine latérale quand elles existent Les fonctions ionisables des radicaux des acides aminés sont d’autant plus protonnées que le Ainsimilieu les radicaux des acides et glutamique passent de la forme COOH à est plus riche en ions aspartique H+, c’est à dire que le p. H est plus faible. p. H même < 2 à lalaforme COOà p. H 7. lysine A p. H = 3, 7, 50 radicaux d’acide De fonction amine de>la passe de % la des forme protonnée NH 3 aspartique sont protonnés ; c’est le p. K deàlap. H fonction radical. Pour l’acide + à p. H < 2 à la forme NH 2 14. Le acide p. K estdedece 8, 9. • glutamique, le p. K est de 4, 25. •

Au p. H des compartiments cellulaires (environ p. H = 6), beaucoup de fonctions ionisables (Asp, Glu, Lys, Arg) sont porteuses d’une charge, ce qui permet à la protéine de faire des liaisons électrovalentes pour stabiliser sa structure tertiaire ou quaternaire ou pour. fixer un ligand. • De même, à p. H = 6 le noyau imidazole de l’histidine est à moitié protonné (p. K = 5, 9) ce qui permet d’échanger plus facilement les hydrogènes dans les réactions chimiques catalysées par les enzymes.

Hydrophobicité Le caractère hydrophobe ou hydrophile des radicaux des acides aminés qui constituent les protéines repose sur la possibilité pour les atomes de ces radicaux d’échanger des liaisons hydrogène avec l’eau qui entoure la protéine . La cohésion naturelle des molécules d’eau tend à rapprocher les radicaux des acides aminés hydrophobes ( « liaison » hydrophobe) et à diminuer la surface de contact entre les domaines hydrophobes de la protéine et l’eau environnante. • Pour montrer cette propriété, plusieurs critères ont été mesurés pour chacun des acides aminés constitutifs des protéines : un indice d’hydrophobie (Kyte and Doolittle) en abcisse et un indice d’hydrophilie (Hopp and Wood) en ordonnées. • Le graphe obtenu illustre très visiblement les groupes d’acides aminés : aliphatiques, soufrés, neutres, aromatiques, acides ou basiques

Polarité indice de polarité (différence d’énergie libre lors du passage d’un solvant apolaire à un solvant polaire) en abcisse et la masse moléculaire en ordonnées. Le caractère polaire ou apolaire des radicaux des acides aminés qui constituent les protéines est très important pour comprendre la structure et les fonctions de ces radicaux dans les domaines de la protéine et les sites spécifiques qu’ils incluent. L’eau étant un solvant polaire, la polarité des radicaux influence la pénétration des molécules d’eau au sein de la protéine. • Le graphe obtenu range les acides aminés d’une manière toute différente de l’image précédente: L’arginine et la lysine apparaissent comme beaucoup plus polaires que les acides aspartique ou glutamique; le glycocolle et l’alanine dont les radicaux sont apolaires, rejoignent les acides aminés aliphatiques bien qu’ils soient beaucoup moins hydrophobes

Spectre d’absorption Les radicaux aromatiques de certains acides aminés (Phe, Tyr, et surtout Trp) ont la propriété d’absorber la lumière ultra-violette. • Sur ce graphe les ordonnées représentent l’absorption de la lumière transmise en fonction des longueurs d’onde représentées en abcisse. • L’absorption à 280 nm est due principalement aux noyaux phénols des tyrosines, parce que cet acide aminé est plus fréquent que le tryptophane, qui est pourtant beaucoup plus opaque à cette longueur d’onde. • L’absorption de la lumière UV à 280 nm est caractéristique des protéines et sert à doser ces protéines lorsqu’elles sont en solution dans l’eau et qu’il n’existe pas d’autres molécules absorbant la lumière UV à cette longueur d’onde (acides nucléiques par exemple).

La polarité est la caractéristique d'une molécule dont les charges négatives et positives sont concentrées les unes à l'oposé des autres, aux deux extrémités de la molécule. L'électronégativité est à l'origine de la polarité de certaines molécules. Une molécule polaire est caractérisée par son moment dipolaire : plus celui-ci est élevé, plus la molécule est polaire (il est nul pour les molécules apolaires). La polarité (ou non) d'une molécule influe sur ses caractéristiques, par exemple les molécules polaires sont facilement solubles dans d'autres composés polaires et pratiquement insolubles dans des composés apolaires. L'une des molécules plus connues, l'eau, H 2 O, est fortement polaire. Une molécule est polaire si : elle contient au moins une liaison covalente polarisée. le barycentre des charges partielles positives ne coïncide pas avec le barycentre des charges partielles négatives. Dans le cas contraire elle est dite apolaire.

Différents niveaux de structure des Protéines

Structure Primaire peptides et Protéines Chaque acide aminé est lié au suivant par un lien peptidique, qui se forme quand le groupement carboxylique d'un premier acide aminé réagit avec le groupement amin d'un second, avec élimination d'eau. les acides aminés sont incorporés dans une chaîne (qu'on appelle chaîne polypeptidique), on les appelle des résidus. Par convention, on désigne le premier acide aminé de la chaîne comme étant celui dont le groupement aminé reste libre; on dit qu'il est en 5' ou encore qu'il constitue l' extremité N-terminale ou le N-terminus. On désigne comme étant le dernier résidu de la chaîne celui dont le groupement carboxylique reste libre; on le dit en 3', ou à l'extrémité C-terminale.

En effet biosynthèse des protéines

Liaison peptidique La chaîne polypeptidique apparaît comme une succession de motifs « liaison peptidique » appelée squelette polypeptidique, sur laquelle sont greffées les chaînes latérales des acides aminés. Motif de la liaison peptidique :

Isomérie cis –Trans : deux configurations possibles Du fait de l’encombrement stérique configuration trans privilégiée sauf pour la Pro. , Configuration trans de deux résidus successifs.

Cette liaison simple se comporte comme une double liaison en raison d'un équilibre entre deux formes mésomériques. La liaison peptidique se fait par des liaisons chimiques covalentes. Ainsi, une rotation serait possible autour de chacune de ces liaisons. Angles de rotation autour de la liaison peptidique

Plan amide L’ effet de résonance cause le partage d'électrons entre les atomes du groupe carboxylique d'un résidu et l'azote du groupe aminé du résidu suivant. Cet effet de résonance coince le lien peptidique en une structure planaire, le plan amide. Les 6 atomes du motif peptidique sont coplanaires : plan amide de la structure peptidique

L'angle de rotation d'un plan amide par rapport au carbone alpha en 5' est noté angle ψ; l'angle entre le plan amide précédent et ce même carbone alpha est noté angle φ. φ , ψ sont deux angles entre deux plans on dit que ce sont des angles dièdres ( angle dièdre ou diédral ) Toutes les valeurs des angles φ et ψ ne sont pas possibles car certaines conduisent à des contacts trop proches entre atomes qui sont énergétiquement très défavorables

Diagramme de Ramachandran: de la 2 D à la 3 D Le diagramme de Ramachandran est une représentation graphique des conformations possibles de la chaine polypeptidique Pour chaque acide aminé de la protéine, on porte la valeur de l'angle φ ( Phi) en abscisse et celle de l'angle ψ ( Psi) en ordonnée, pour des valeurs de -180 à +180 degrés. Amplitudes observées : Hélice α droite - 60° < ѱ < + 30° - 120°< φ < - 30° Feuillet β + 90° < ѱ < + 180° -180°< φ <- 60° Hélice α gauche + 0° < ѱ < + 60° + 45°< φ < + 90°

Le diagramme comporte trois zones favorables. Lorsqu'on analyse une structure de protéine, on observe que la majeure partie des acides aminés ont des combinaisons d'angles (φ , ψ) qui s'inscrivent à l'intérieur de ces trois zones. Les deux principales régions correspondent aux structures secondaires régulières qui sont principalement observées dans les protéines : la région des hélices α et celle des feuillets β. La troisième région, plus petite, correspond à une conformation en hélice gauche (φ>0). Les glycines, qui ne comportent pas de chaîne latérale, ont une plus grande liberté conformationnelle. Elles échappent donc à cette règle et peuvent se trouver en dehors des régions favorables du diagramme.

Exemples de structures Primaires Glu, Cys, Gly (E)(C)(G) Le glutathion est un tripeptide comprenant trois acides aminés : acide glutamique, cystéine et glycocolle. : γ-glutamylcystéinyl-glycocolle. • Par fonction réduit thiol du de la cystéine, le glutathion exister sous Le la glutathion etradical le glutathion oxydé constituent un peut couple d’oxydoune forme réduite(représentée ici) ouest sous oxydée laquelle réduction dont lepotentiel standard deune -230 forme mv. Par cette dans propriété, le deux molécules liés par un pont disulfure. glutathion sert de de glutathion coenzyme sont transporteurd’hydrogène destiné • principalement à maintenir les protéines à l’état réduit (hémoglobine, aconitase, . . . ).

(H)(S)(Q)(G)(T)(F)(T)(S)(D)(Y)(S)(K)(Y)(L)(D)(S)(R)(R)(A)(Q)(D)(F)(V)(Q)(W)(L)(M)(N)(T) Le glucagon est un peptide de 29 acides aminés. • Sécrété par le pancréas (cellules A 2(α ) des îlots de Langerhans), dès que le taux de glucose dans le sang (glycémie) est inférieur à 4. 10 -3 M. (0. 72 g/l) • Son effet est hyperglycémiant : il favorise le retour de la glycémie à la valeur basale de 5. 10 -3 M. (0. 90 g/l) • La structure du glucagon comprend les acides aminés indiqués selon le code à 3 lettres, tous liés par des liaisons peptidiques. Il n’y a ni cystéine, ni acide glutamique, ni isoleucine, ni proline. Les extrémités NH 2 -terminale (par convention, le premier acide aminé de la séquence) et COOH-terminale (par convention, le dernier acide aminé de la séquence) sont libres et ionisées. • La masse moléculaire du glucagon est de 3485 daltons.

MM ( 5807 daltons. ) L’insuline est un peptide à 2 chaînes d’acides aminés : une chaîne A de 21 acides aminés et une chaîne B de 30 acides aminés. le deux pancréas (cellules β des îlots de Langerhans), que le taux de La. Sécrétée structurepar des chaînes de l’insuline comprend les acides dès aminés glucoseselon dans lelecode sangà (glycémie) dépasse 6. 10 -3 M. (10, 8)peptidiques. Il y indiqués 3 lettres, tous liés par des liaisons Son effet est toutes hypoglycémiant : elleponts favorise le retour la glycémie la a • six cystéines, liées par des disulfures, unde dans la chaîneàA, basaleentre de 5. 10 -3 M. chaînes. lesvaleur deux autres les deux •

La structure secondaire est engendrée par la rotation des atomes de la chaîne peptidique les uns par rapport aux autres au cours de la synthèse de la chaîne. Les angles possibles et les structures qu’ils engendrent le plus souvent sont représentés sur la table et le diagramme de Ramachandran La structure secondaire la plus fréquente est l’hélice α qui fait tourner la chaîne carbonée par rapport à elle-même d’un tour tous les 4 acides aminés environ. Elle est stabilisée par des liaisons hydrogènes entre le carbonyl de la liaison peptidique qui suit l’acide aminé n° 1 avec l’amine de la liaison peptidique qui précède l’acide aminé n° 5, puis de même entre les acides aminés 2 et 6, etc. . . • La liaison hydrogène se fait entre les acides aminés n et n+4

Feuillets plissés beta Cette structure est une structure à plat, étirée et étalée : feuillet β plissé. Le sens peptidique des deux brins adjacents peut être identique ou contraire, les feuillets sont respectivement dits parallèles ou anti-parallèles. Ces derniers sont plus stables, les liaisons H subissant de plus faibles distorsions.

Coudes β , tour inverse , épingle à cheveux la chaîne polypeptidique forme des coins et se replie sur elle-même. La présence de ces coudes β appelés aussi coudes en épingle à cheveux conduit à un changement brutal de direction du feuillet β Les coudes ne sont pas des structures périodiques. Il s'agit plutôt d'un repliement particulier du squelette carboné localisé à 3 ou 4 résidus consécutifs. Les coudes permettent bien souvent de relier 2 structures secondaires périodiques (hélices et/ou brins).

Angles dièdres moyen des résidus centraux des différents coudes possibles Résidu i +1 Résidu i+2 Angle Φ Angle Ψ Type I -60° -30° -90° 0° Type II -60° +120° +80° 0° Type III -60° -30° Résidus favorisés suivant les types de coudes. Résidu i i+1 Type I Asp, Ser Pro Arg, Cys Type II Asp, Ser Pro Arg, Cys i+2 i +3 Tout sauf Gly Pro Gly, Arg Gly

Généralement, on trouve des boucles entre : des hélices α, des hélices α et des brins β, des brins β parallèles ou de feuillets différents. Les facteurs de transcription comportent un motif très particulier : hélice-boucle-hélice

Cas particulier du collagène hélice gauche Hélice de collagène. Cette hélice est de pas gauche (elle tourne en montant dans le sens des aiguilles d'une montre). À chaque trois acides aminés on tombe sur une glycine; l'hélice est aussi très riche en proline et en hydroxyproline. Notez qu'au contraire de ce qui se passe dans une hélice α, on ne retrouve pas de ponts hydrogènes stabilisants entre les résidus d'une même hélice de collagène. L'hélice de collagène s'élève de 0, 29 nm par résidu et elle compte un peu moins de trois résidus par tour alors que l'hélice α ne s'élève que de 0, 15 nm par résidu et compte 3, 6 résidus par tour. NB: Stucture quaternaire triple hélice Tropocollagène

Pelote statique Certaines régions protéiques ne sont pas structurées dans des conformations périodiques comme l'α-hélice ou le feuillet plissé β : leur forme irrégulière est qualifiée de pelote statistique (random coil). Cette structure n'est pas pour autant inorganisée, elle obéit aux contraintes locales de voisinage. La taille de cette pelote s'exprime en fonction de la distance quadratique moyenne entre les deux extrémités N nombre de liaisons l longueur des liaisons M masse de la pelote

Structures super-secondaires les protéines globulaires. Celles-ci sont souples et possèdent des activités très diverses. Les structures (ou motifs) super-secondaires correspondent à des associations caractéristiques de feuillets et hélices fréquentes. Les motifs protéiques peuvent être définis d’après leur séquence primaire ou d’après l’arrangement des éléments de structure secondaire.

Un domaine de liaison à l'ADN (ou DBD de l'anglais DNA-binding domain) est un motif protéique qui est capable de lier à l'ADN double ou simple brin avec une affinité pour une séquence nucléotidique spécifique, ou une affinité relative à l'ADN. Les domaines de liaison à l'ADN sont présents dans de nombreuses protéines impliquées dans la régulation de l'expression des gènes (comme les facteurs de transcription ) Il existe de nombreux types de DBD caractérisant des familles de protéines. Hélice-tour-hélice Hélice-boucle-hélice (ou homéodomaine = homéobox = boîte homéotique) Doigt de zinc Domaine leucine zipper (b. ZIP) Winged Hélice (WH) hélice ailée : Protéine Fox

motif de "main EF" de la calmoduline est un motif super secondaire hélice-boucle-hélice • La calmoduline (Ca. M) est une protéine ubiquitaire, • capable de s'associer aux ions calcium présents dans le milieu • cellulaire (rôle régulation du niveau de calcium intracellulaire ). Elle possède e n effet 4 motifs en main EF, chacun étant capable de s'associer avec un atome de calcium.

Les doigts de zinc sont de petits motifs structuraux trouvés dans les protéines et capable d'ordonner en complexe un ou plusieurs ions zinc pour stabiliser leurs plis ( C 2 H 2; C 4; C 6 ou C 3 H selon les types ) Les protéines à doigt de zinc) et fonctionnent typiquement comme des groupes d'interaction liant l'ADN, l' ARN , les protéines ou de petites molécules Un atome de zinc central stabilise le repliement de la protéine en établissant quatre liaisons avec deux résidus cystéine et deux résidus histidine schéma d'une ZFN (Zinc Finger Nuclease). Chaque doigt de zinc reconnaît trois nucléotides spécifiques. Une protéine comportant trois doigts de zinc en tandem permet donc de reconnaître une séquence spécifique de neuf nucléotides. A ce domaine de reconnaissance, on a couplé le domaine endonucléasique de l'enzyme Fok I.

Leucine zipper : Les leucine zipper, littéralement « fermeture éclair à leucine » En général des protéines dimériques contenant deux hélices alpha reliées par des ponts entre leurs leucines. La chaîne alpha est à l'extrémité Cterminale de chaque monomère alors que l'extrémité N-terminale contient un domaine basique de fixation à l'ADN. Elles servent de domaine de liaison à l'ADN et trouvent par conséquent leur utilité dans des protéines telles que les facteurs de transcription. Facteur de transcription à domaine Leucine zipper en complexe avec une molécule d'ADN

Le Pli ou motif Rossman : Le pli Rossmann fold) est un motif présent dans les protéines qui lient les nucléotides, particulièrement dans la nicotinamide adénine dinucléotide (déshydrogénases ) Le motif Rossman est une structure super-secondaire (assemblage de plusieurs types de structures secondaires) : il est composé de 3 feuillets β liés à 2 hélices α de manière alternée (β-α-β). domaine de fixation d'un dinucléotides (tel que NAD+ ou NADP+) contient donc 2 plis Rossmann appariés, chacun d'eux fixant l'un des nucléotides du co-facteur. Deshydrogénase à NAD

Notions de Motifs, domaines, famille ØDomaine protéique: unité structurale (et fonctionnelle) indépendante, évolutivement conservée (doigt de zinc, boucle, . . . ) ➢ Motifs protéiques: plus courts • site de modification post-traductionnelle • site de liaison (ADN, métal, . . . ) • site actif d'enzyme ➢ Famille protéique: ensemble de protéines évolutivement reliées; un ou plusieurs domaines protéiques communs

Motif Protéique Le motif, au sens strict, est un segment court, continu et non ambigu d’une séquence nucléique ou protéique. Il s’agit en général d’un élément structural présent chez tous les membres d’une même famille. Il peut correspondre à des résidus essentiels à une fonction conservée, à des résidus pas nécessairement consécutifs sur la séquence primaire. Le motif peut décrire une famille de protéines (une fonction) Alignements de séquence ( Voir Bioinformatique ) :

Les alignements permettent de comparer des séquences nucléotidiques ou des séquences protéïques différents outils en fonction : • du type d'alignement (local/global) • de la longueur des séquences, etc . . . ➢ alignement contre des banques de données de séquences (séquences nucléiques, protéiques, EST, ARNm, . . . ) Pourquoi étudier et comparer les séquences ? ➢ la comparaison de séquence permet aussi • d'assembler des fragments de une ressemblance entre séquences peut séquences indiquer: • de mettre en évidence les • une fonction biologique proche différences de séquençage entre • une structure 3 D semblable différents laboratoires • une origine et/ou histoire évolutive commune

En bio-informatique, l'alignement de séquences (ou alignement séquentiel) est une manière de représenter deux ou plusieurs séquences de macromolécules biologiques (ADN, ARN ou protéines) les unes sous les autres, de manière à en faire ressortir les régions homologues ou similaires. L'objectif de l'alignement est de disposer les composants (nucléotides ou acides aminés) pour identifier les zones de concordance. Ces alignements sont réalisés par des programmes informatiques(Clustal. W 2 ou MSA…) afin de maximiser le nombre de coïncidences entre nucléotides ou acides aminés dans les différentes séquences. Pour avoir les caractères communs sur des colonnes il est parfois nécessaire d’introduire des "trous" à certaines positions dans les séquences. Ces trous correspondent à des insertions ou des délétions (appelés indel) de nucléotides ou d'acides aminés dans les séquences biologiques. Le résultat final est traditionnellement représenté comme des lignes d'une matrice.

Alignement de séquences de récepteurs nucléaires . Les acides aminés conservés sont surlignés en bleu et en vert. Par endroits, on a inséré des trous, symbolisés par des tirets "-", pour permettre un alignement optimal

comparaison de 2 séquences: séquence A : W L T E K E G S Y P K L séquence B : W L S S S M N N Q V F P Q L

Interprétation : Théorie darwinienne de l’évolution : Séquences alignées : molécules à fonctions similaires : même enzyme chez différentes espèces ( même ancêtre commun ) Les divergences entre les séquences sont interprétées comme résultant de mutations. Les régions contenant des nucléotides ou des acides aminés conservés sont supposées correspondre à des zones où s'exerce une pression de sélection pour maintenir la fonction de la macromolécule pression de sélection c. a. d évolution des espèces vivantes soumises à des contraintes environnementales

Exemple : Protéines liées à l’Insuline IGF et insulines ( Isuline –like Growth Factor ou Facteur de croissance ressemblant à l’insuline ou Somatomedine ) * conservation parfaite : substitution conservative ; substitution semi-conservative E /Q conservative AA polaires et chargés D/E conservative : AA polaires chargés ( acides ) F/V semiconservative : AA hydrophobes mais V petit ( pas dans ce cas mais dans d’autres exemples ) -- : délétion Protéine Humain Cochon et chien : conservation parfaite Cheval, singe pas de conservation divergence

Protéines de la famille des CID (impliquées dans la formation des gouttelettes lipidiques dans tissus adipeux ) * conservation parfaite : substitution conservative ; substitution semi-conservative E /Q conservative AA polaires et chargés D/E conservative : AA polaires chargés ( acides ) F/V semiconservative : AA hydrophobes mais V petit ( pas dans ce cas mais dans d’autres exemples ) -- : délétion

Méthodes de prédiction de structure secondaire On peut soit utiliser les propriétés physicochimiques des chaînes latérales des acides aminés (l’alternance de résidu hydrophobe résidu hydrophyle favorise le feuillet β ) soit des algorithmes ( TD Bioinformatique ) Algorithmes de prédiction de structures secondaires. Approche statistique : Méthode de Chou Fasman. Par apprentissage : Réseaux de neurones. Par homologie : Repliement inverse. Par optimisation : Algorithmes génétiques

Méthode statistique de Chou- Fasman (1978 Analyse de 29 structures résolues expérimentalement pour recher la propension des 20 acides aminés à être dans chaque structure secondaire. Observation : Certains acides aminés sont trouvés préférentiellement dans certains types de structures secondaires. Idée de Chou et Fasman : - calculer précisément ces biais ; - s’en servir pour prédire la position des structures secondaires (hélices, feuillets et coudes ) - Exploiter la répartition non uniforme des acides aminés dans les structures d'hélice α ou de feuillet β. Pour chaque acide aminé sont déterminés empiriquement ( voir TD)des coefficients reflétant la propension de l'acide aminé à figurer dans une d'hélice α ou de feuillet β……. P(h) propension à figurer dans hélice α P(f) propension à figurer dans feuillet β

Règles pour une hélice α : - Identifier les régions de 6 résidus consécutifs pour lesquels les 2/3 des résidus sont P(h) >100 Etendre ces régions dans les deux directions jusqu’à atteindre 4 résidus consécutifs de P(h) moyen < 100 Les régions pour lesquelles P(h) > P(f) sont déclarées hélice α. Règles pour un feuillet β : -Identifier les régions de 5 résidus consécutifs pour lesquels 3 résidus au moins satisfont à P(f )> 100 - Etendre ces régions -Les régions pour lesquels P(f) > 105 et P(f) > P(h) -sont déclarées feuillet β Indice de Correction : 60%

Structure tertiaire Forces de maintien de la structure tertiaire • Interactions hydrophobes : • Les liaisons hydrogènes Entre groupes hydrophobiques les disulfide groupements Ponts disulfures : oucomme NB dans le RE : la PDI, protein cycliques de la phénylalanine et de la tyrosine. Decovalent telles Deux atomes électro-négatifs se lien partagent isomerase. Celle-ci peut cystéines Une cystéine oxydée peutoxyder former des un avec interactions excluent inégalement un atome d'hydrogène. réduites et les forcer à former un pont disulfure. une autre cystéine les molécules d'eau. Forces de Van der Waals Un atome est lié par: réduite, covalence à également l'H, La PDI, sousoxydantes sa forme conditions (ce qui peut n'est pasc'est le. Encas dans Elles s'effectuent entre deux molécules non polaires. présence Cette liaison se fait pour n'importe quel atome mais nécessit Les liaisons ioniques sont des liaisons l'atome donneur. L'autre atome l'atome briser un pont disulfure déjà établi est en un le cytoplasme, d'eau, celles-ci auront tendance à s'associer pourformant exclure l'eau. e une faibles distance résultant de l'attraction entre deux accepteur. Généralement on observe cette Par exemple dans pont temporaire une deux qui est légèrement réducteur). Lescystéines pontsatomes, entre atomes faible : avec moins de des 5 angström. deux groupes polaires de charges opposées. Ces liaison entre les protéines globulaires solubles, la zone hydrophobe (les impliquées, ce permet à ladans deuxième cystéine disulfures sequi forment donc la lumière du même neutres, interactions charge-charge se font donc groupements les éléments deux liaisons peptidiques. On peuvent développer une interaction faible Leur faiblesse d'établir un apolaires pontde ailleurs. Ce processus permet deest réticulum est enfouie à l'intérieur de la molécule, excluant l'eau. Ce entre résidus de charge inverse comme K compensée par les trouve également associant les radicaux et briser les ponts disulfures établis par accident endoplasmique chez les cellules eucaryotes + vs phénomène stabilise les structures tertiaires. R d'une part et Dqui etnotamment E d'autre part -NH 3 leur nombre considérable, lors de(dû l'ajustement de acides aminés polaires. Elles sont faible. des entre deux cystéines n'auraient pas être deux COO surfaces macro-moléculaires. ). Quand une telle interaction est pontées, et permet ainsi à la protéine de retrouver dans uneces protéine globulaire, à l'abri etenfouie instables mais défauts sont unes structure tertiaire plus stable. de l'eau, on qu'il s'agit d'un pont de compensés pardit leur très grand nombre qui (salt bridge). leursel permet d'avoir un rôle essentiel dans le maintien de la structure secondo-tertiaire.

Les interactions avec l'eau sont responsables de la conformation tridimensionnelle La forme de la molécule est déterminée par son affinité avec l’eau Hydrophile (chargée) / hydrophobe (non chargée). Hydrophile = liaisons H avec l’eau. Charges à l’extérieur de la molécule. Hydrophobe = pas de liaisons H avec l’eau. Liaisons H rassemblées au cœur de la protéine. L’élaboration d’une structure tertiaire ne requiert pas d’énergie de la part de la cellule. C’est une forme spontanée. La structure primaire est responsable de la structure tertiaire (disposition des radicaux). Des conformations spatiales spécifiques forment des zones réactionnelles qui peuvent réagir et avoir des interactions avec d’autres molécules (exemple des enzymes spécifiques). Ce qui nous ramène à la notion de Domaine

Les différentes classes de protéines. I Actuellement il est possible de décrire des classes ou des types de structures tertiaires en fonction de la prédominance et de la distribution dans la molécule (ou même une zone structurée d’une partie de la molécule) de structures secondaires en hélice α ou en feuillets ß. Les protéines dans de très nombreux cas présentent une structure tertiaire “sphérique ou ovoïde”.

Structures à domaine alpha Classe de structure la moins représentée Faisceaux d’hélices alpha reliées par des boucles Faisceaux de quatre hélices ou reploiement globine Structures de type α sous-unité de l’hémoglobine cytochrome b 562 myoglobine Myoémérythrine

Structures Bêta antiparallèles 2èmeplus grand groupe de structure Comprend des enzymes, des protéines de transport, les anticorps et des protéines d’enveloppe virale Brins bêta antiparallèles (4 à plus de 10) arrangés en 2 feuillets Structure en tonneau Coeur hydrophobe Superoxyde dismutase ( 8 brins β antiparalleles

Tonneau

Les différentes classes de protéines de type feuillets ß 2 motifs «épingle à cheveux» : 12 possibilités pour feuillet bêta 4 brins �� Tonneau alterné Tonneau clé grecque Tonneau «gâteau roulé» Clé grecque

Structure de type ß Tonneau alterné Protéine plasmatique liant le rétinol : 8 brins tors et courbes : 2 feuillets bêta (vert et bleu) serrés l’un contre l’autre. Certains brins (rouge) participent aux 2 feuillets. La molécule de rétino est liée à l’intérieur du tonneau. Appartient à superfamille de protéines ayant structure 3 D similaire, qui lient de grosses molécules hydrophobes.

Structure α / ß Structure de domaine la plus fréquente et la plus régulière Alternance de brins bêta et d’hélices alpha Motifs β−α−β (les brins béta sont parallèles) Feuillet central parallèle ou mixte entouré d’hélices alpha Présents dans toutes les enzymes de la glycolyse et transporteurs de métabolites triose-phosphate isomérase

Relation structure / Fonctions cas de la myoglobine ( structure tertiaire ) Hémoglobine ( structure quaternaire ) Transport de l’oxygène: myoglobine et hémoglobine La myoglobine a une structure compacte et riche en hélice alpha Classe alpha, reploiement globine

L’atome de Fer a 5 liaisons de coordinence( 4 avec les N du noyau porphyrique et une avec N de l’His ) ( liaison ou la paire d’e- qui assure la liaison est fournie par un seul atome ) Molécule d’Hème enfouie dans une poche hydrophobe

Fixation de l’oxygène au niveau de l’Hème l’atome de Fe joue un rôle primordial Le Fer est sous forme ferreuse ( Fe 2+) ferromyoglobine : 6 liaisons de coordination L’oxydation du fer en ferrique Fe 3+ ( ferrimyoglobine ) rend la molécule inactrive La fixation d’oxygène déplace l’atome de fer par rapport au plan de l’Hème

Structure quaternaire Ce type de structure ne concerne que facultativement les protéines globulaires. l'association de sous-unités dans une même molécule protéique sous-unités sont toujours reliées par des liaisons faibles et jamais par des liaisons covalentes Une sous-unité à l'état libre est un monomère. La protéine est un oligomère. L'élément de symétrie se répétant n fois est un protomère. Si toutes les sous-unités sont identiques le protomère prend le nom du monomère (exemple : protéine α 4) Si la protéine est constituée de 2 monomères α et 2 monomères β alors le protomère est [ α β ] et la protéine contient 2 fois le protomère, elle est dite " α 2 β 2". C'est par exemple le cas de l'hémoglobine

L’Hémoglobine L'hémoglobine est la molécule qui, présente dans les globules rouges, permet le transport de l'oxygène vers les tissus. Elle contribue aussi, dans une moindre mesure, à l'évacuation des ions H+et du CO 2. Chez l'adulte, elle est constituée de deux sous-unités d'a-globine et de deux sous-unités de β-globine. Ces sous-unités sont assemblées de telle façon qu'elles laissent une cavité au centre du tétramère. (Cette cavité ne sert pas à lier l'oxygène, mais elle a un rôle à jouer dans la régulation du rôle de l'hémoglobine, ).

Les structures tertiaire et quaternaire de l'hémoglobine jouent un rôle primordial dans son rôle comme transporteur. La protéine existe sous deux formes, la forme T (pour tendue) qui a une faible affinité pour l'oxygène et la forme R (pour relaxée) de haute affinité Ces deux formes existent en un équilibre rapide qui dépend du p. H ambiant et de la présence d'oxygène. . À p. H élevé et en présence d'oxygène, la forme R est privilégiée (et l'hémoglobine cherche donc à capturer de l'oxygène) à p. H bas et quand l'oxygène est rare, la forme T est privilégiée et l'hémoglobine relâche l'oxygène.

Contrairement au CO 2, le monoxyde de carbone CO compétitionne directement avec O 2 pour le lien libre sur l'atome de fer du groupe hème. Il a en Les cellules contenant beaucoup de CO 2 ont un p. H plus acide, parce que CO 2 + H 2 O -> H 2 CO 3 L'hémoglobine ayant déchargé sa charge d'oxygène peut alors contribuer à évacuer l'excédent de CO 2 et d'ions H+ des cellules. ( . Les ions H+ se lient à l'histidine 146 de la β-globine et à deux autres résidus dans l'α-globine de la forme T. Le CO 2, lui, se lie à l'extrémité N-terminale de chacune des quatre chaînes de globine pour former la carbaminohémoglobine. Contrairement au CO 2, le monoxyde de carbone CO compétitionne directement avec O 2 pour le lien libre sur l'atome de fer du groupe hème. Avec en plus une affinité 240 fois plus élevée. le CO est beaucoup plus toxique le CO 2: alors que le CO 2 est libéré facilement (par simple compétition) quand le patient intoxiqué est mis en présence de O 2, le CO, lui, reste fixé très longtemps sur le groupe hème, puisque l'équilibre entre le CO et O 2 sur le groupe hème favorise grandement le premier.