Sterilizzazione Metodi Fisici Calore Radiazioni Metodi meccanici Filtrazione

Sterilizzazione • • • Metodi Fisici Calore Radiazioni Metodi meccanici Filtrazione Ultrasuoni Metodi chimici Sostanze chimiche

Metodi fisici CALORE • Calore diretto: fiamma becco bunsen (anse, bacchette di vetro, spatole, pinze, imboccatura recipienti sterili) • Calore umido sotto pressione: autoclave, 121 °C ( 1 atm. ) per 15 -20’ (terreni di coltura e sostanze non termolabili, vetreria) • Calore secco: in stufa a 160 °C per 2 ore ( vetreria, pipette, ecc. ) (il termine pastorizzazione non è sinonimo di sterilizzazione)

Metodi fisici RADIAZIONI • Non ionizzanti (raggi UV ottenute da lampade germicide): λ =254 nm. Agiscono sul DNA, sono poco penetranti e vengono utilizzate per superfici o aria. • Ionizzanti raggi X e raggi gamma (γ): determinano l’espulsione di elettroni dalle molecole colpite formazioni di radicali liberi che portano danni ai componenti cellulari in modo particolare al DNA. Vengono utilizzati per sterilizzare materiale monouso, sono penetranti.

Metodi meccanici FILTRAZIONE Filtri dotati di membrane filtranti di acetato/nitrato di cellulosa o di altri materiali con pori di 0, 2 -0, 45 μm. Necessita di un sistema di aspirazione o pressione

Sostanze chimiche Disinfettanti, battericidi, fungicidi, antibiotici Alchilanti (ossido di etilene, formaldeide) Detergenti cationici (sali di ammonio quaternari) Fenoli Alcoli Acidi Metalli pesanti Forti ossidanti

MIC

Terreni di coltura • Chimicamente definiti • Chimicamente indefiniti (complessi)

Terreni di coltura

Per fare un mezzo solido + Agar 15 g/L

Protocollo • • Pesare 3 g/L di TSB Pesare 15 g/L di agar Porre in una bottiglia e aggiungere H 2 O dist. Mettere il tappo alla bottiglia ma non chiuderlo in modo ermetico Porre la bottiglia in autoclave e sterilizzare per 15’ a 121°C Finito il ciclo di sterilizzazione lasciare che l’autoclave si raffreddi prima di aprirla Appena aperta l’autoclave chiudere il tappo delle bottiglie e porle in un bagnetto a 50°C Quando il mezzo è a 50°C versarlo nelle piastre

Conta- diluizione e piastramento