Stanoven kinetiky vyluovn inulinu ledvinami MUDr Lydie Izakoviov

Stanovení kinetiky vylučování inulinu ledvinami MUDr. Lydie Izakovičová Hollá, Ph. D. MUDr. Michal Jurajda Ústav patologické fyziologie LF MU Brno

Cíl: Demonstrovat princip stanovení GFR jako clearance látky vylučované jen glomerulární filtrací Model v Renální insuficience způsobená sníženým počtem funkčních glomerulů. Vyřazení jedné ledviny z funkce podvazem renálních cév. Přínos experimentu: v Praktické měření ledvinné clearance. Sledování vlivu úbytku funkčních glomerulů na clearance inulinu. Praktické vyhodnocení naměřených dat.

Ledvinná clearance látky XY v Objem plazmy úplně očištěný za jednotku času od látky XY. v Rozměr: objem/čas v GFR ≈ clearance pouze filtrované látky v Perfúze ≈ clearance filtrované a zároveň secernované látky (PAHA)

Clearance jako ukazatel GFR v Endogenní látky s konstantní koncentrací v plazmě. v Exogenně podané látky, jejich koncentrace v plazmě postupně během vyšetření klesá

Kreatinin v vzniká ve svalech neenzymovou dehydratací kreatinu v při průchodu ledvinou je z 90% filtrován, z 10% secernován do moči tubuly v koncentrace S-kreatininu je přímo úměrná svalové hmotě organizmu ( a tedy nepřímo závislá na věku a pohlaví) v intraindividuální kolísání nepřesahuje 10 -15%, hladiny se zvyšují až při omezení GFR pod 50% v hladiny - po fyzické námaze, při příjmu exogenního kreatininu (maso, masné výrobky)

Hodnocení Ckr • Ohled na správné a přesné stanovení S – kreatininu (Jaffého reakce - Jaffé pozit. chromogeny - i glu, aceton) • podíl kreatininu vylučovaného tubuly (zvyšuje se při poklesu počtu fungujících nefronů - tzn. čím menší GFR, tím méně přesné stanovení pomocí Ckr) • problém s kvantitativním sběrem moči ( nedostatečná spolupráce - děti, refluxy, staří nemocní. . ) • velikost tělesného povrchu (korekce na stand. 1. 73 m 2 nemusí odstranit diskrepanci 25 -letý atlet x 60 -letý obézní muž

Cystatin C • protein z cystatinové superfamily (120 AK) • vylučován většinou buněk jako inhibitor cysteinových proteáz • filtrován do primární moči a poté resorbován proximálním tubulem, kde je degradován. • z koncentrace v séru je přímo dohadována GFR

Clearance

Stanovení GFR clearance látky, která se jen filtruje a není v tubulech resobrována nebo naopak secernována • inulin (analog : polyfruktosan S -Inutest) • 99 m Tc-DTPA (diethylentriaminopentaoctová kyselina) • 131 I-Iothalamát • kreatinin (též tubulární sekrece - 10%) Platí - rychlost toku (produkce) moči je tolikrát menší proti rychlosti toku (tvorbě) glom. filtrátu, kolikrát je látka ve výsledné moči koncentrovanější proti filtrátu

pro muže 20 -80 let (u žen x 0. 85)

Měření glomerulární filtrace bez nutnosti sběru moči ä Aplikace i. v. látky vylučované jen glomerul. filtrací a měříme v odpovídajících intervalech plazm. koncentraci její koncentrace v plazmě klesají podle exponenciální závislosti ä naneseme-li hodnoty na semilogaritmický papír, dostaneme přímku, ze které můžeme odečíst hodnotu tzv. biologického poločasu (t 1/2) - udává, za jakou dobu klesne koncentrace v plazmě na polovinu výchozí hodnoty (Po)

Inulinová clearance ä Klasické vyšetření na podkladě plazmatické clearens (není-li možný přesný sběr moči) hodnota, kterou lze vyšetřit pouze na podkladě kinetiky sledované látky v extracelulární tekutině jestliže je látka z organizmu vylučována pouze glomerulání filtrací, pak rychlost poklesu jejích plazmatických koncentrací (po předchozí i. v. aplikaci) je určována touto renální funkcí

Hodnotu GFR vypočíteme D množství aplikované látky Po zjišťujeme jako extrapolovanou hodnotu přímky poklesu k času, kdy látka byla injikována t 1/2 vypočteme

Provedení ä uspání laboratorního zvířete ä střední laparotomie, podvlečení ligatury pod a. renalis sinistra (event. zaškrcení této tepny) ä chirurgické zpřístupnění v. jugularis a aplikace inulinu (25 mg/1, 5 ml fyz. roztoku) ä v intervalech 5, 10, 15, 20, 30 min) otevřeme hrudník a punkcí srdce odebereme nejmene 1, 5 ml srážlivé krve ä analýza vzorků , spektrofotometrické stanovení ä výpočet koncentrací inulinu + zhodnocení

Statistické zhodnocení - metodou nejmenších čtverců s třemi vzájemně nezávislými parametry: počáteční koncentrací (stejná u pokusných i kontrolních zvířat) rychlosti poklesu koncentrace inulinu – zvlášť u kontrol a zvlášť u pokusných zvířat (získané rychlostní konstanty by měly být v poměru 1: 2 a rozdíl jejich hodnot vydělený odmocninou ze součtu čtverců celkových chyb jednotlivých rychlostí lze testovat t-testem s počtem stupňů volnosti rovným celkovému počtu zvířat -3 (testovací kriterium)