Secuenciacin Dra Mara Isabel Fonseca Secuenciacin El anlisis

Secuenciación Dra. María Isabel Fonseca

Secuenciación • El análisis más detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de nucleótidos.

Secuenciación • Procedencia de las Muestras – Clonación – PCR – Fragmentos procedentes de digestión – Bandas recortadas a partir de geles

Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert • Se basa en la hidrólisis química • Se aplica a secuencias de ADN de menos de 250 nt • Posee tres etapas – marcaje del ADN – Hidrólisis química selectiva del ADN – Análisis de los productos

Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert

Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert

Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger Componentes • El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. • Un enzima que replique el ADN, normalmente la ADN Polimerasa I del bacteriofago T 4. • Un cebador o "primer" • Los cuatro nucleótidos trifosfato (d. ATP, d. CTP, d. GTP y d. TTP). A veces en vez de marcar radiactivamente el cebador, se marca radiactivamente uno de los cuatro nucleótidos trifosfato en cada reacción. • Por último, se necesitan nucleótidos didesoxi (dd. ATP, dd. TTP, dd. CTP y dd. GTP).

Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger

Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger didesoxirribonucleótido EJ: didesoxiciticinatrifosfato (dd. CTP) desoxirribonucleótido EJ: desoxiciticinatrifosfato (d. CTP)

Secuenciacion: Método enzimático

Secuenciación automática

Secuenciación automática

Resolver Método de secuenciación: Maxam y Gilbert • Describir la secuencia que se deduce a partir del gel G A+G C+T C

Respuesta G A+G C+T C A T C T G A C C C T A G T C C

Resolver Método de secuenciación: Sanger • Describir la secuencia de la hebra molde • Describir la secuencia que se deduce a partir del gel

Respuesta