Salah satu cara untuk mengembangkan tanaman unggul adalah

� Salah satu cara untuk mengembangkan tanaman unggul adalah dengan merakit varietas baru yg berproduksi tinggi dan tahan terhadap hama penyakit adl dengan isolasi protoplas � Protoplas sel tumb yg telah dihilangkan dinding selnya atau “sel telanjang”

� Jaringan organ yg digunakan utk isolasi protoplas misalnya tunas batang, buah, akar, bintil akar legum, atau dari kultur suspensi sel, daun muda atau kalus maupun biji � Isolasi protoplas dapat dilakukan dengan melalui: 1. perkecambahan in vitro kemudian di kalus kan diambil protoplas nya 2. kultur kalus embrionik 3. produksi tunas in vitro 4. protoplas mesofil daun dan kalus

1. 2. Persiapan eksplan Eksplan yang digunakan umumnya berasal dari jaringan yang lebih muda misal daun (struktur dinding selnya masih sederhana) Sterilisasi eksplan Bagian yang ingin dijadikan eksplan dicuci kemudian disterilkan dgn Sodium hypoklorit 1 -2 % slama 10 -30 menit kemudian dicuci kembali dengan aquades 3 - 4 kali tergantung eksplan yg digunakan 3. Isolasi protoplasma Mekanik Enzimatik kemudian di sentrifungi atau dapat pula disaring

� Mengupas dinding sel menggunakan alat bedah mikro dengan memotong sel satu persatu � Sel diletakkan pada media dengan konsentrasi yg lebih tinggi (hipertonis) dari dalam sel plasmolisis � Setelah berkerut (jangan terlalu lama) kemudian dipotong dinding sel nya dan diletakkan dilarutan hipotonis deplasmolisis dihasilkan protoplas � Kelemahannya: a. b. Keberhasilan rendah Sering terjadi kerusakan protoplas pd saat pengupasan dinding sel

� Menggunakan enzim yg dapat mengancurkan / meluruhkan komponen dinding sel seperti: cellulase, Hemicellulase, dan pectinase � Selama 12 -18 jam sel-sel akan keluar dan dinding sel akan lisis sehingga didapatkan protoplas.

� Protoplasma yang telah dimurnikan biasanya dikulturkan dalam medium Agar semisolid dan Liquid. � Umumnya menggunakan media MS atau B 5 � Diberi larutan osmotikum (untuk mengurangi daya tarik menari / adhesi antara sitoplasma & dinding sel) seperti: manitol 13% atau sorbitol 500 -600 m. M/L � Penambahan 1 m. M/L Ca. Cl 2 untuk meningkatkan pembelahan sel � ZPT : auksin & sitokinin

1. 2. 3. Jeruk siam simadu dan jeruk mandarin satsuma dari mesofil daun dengan pemurnian larutan sukrosa 25% + manitol 13% Isolasi protoplas mesofil daun mandarin satsuma dan kalus jeruk siam simadu Tanaman Kacang Panjang secara Enzimatis dari mesofil daun dengan perkecambahan in vitro terlebih dahulu kemudian diambil daun muda nya dan di isolasi protoplas

protoplas mesofil daun mandarin satsuma Protoplas kalus embriogenik jeruk siam simadu