S ENESCENCIACELULAR ACELERADAEN PACIENTESCON ENFERMEDADRENAL CRNICA P ONENTE

S ENESCENCIACELULAR ACELERADAEN PACIENTESCON ENFERMEDADRENAL CRÓNICA P ONENTE: A NDREA F I GUER R UBIO T UTORAS: J ULIA C ARRACEDO A ÑÓN M ATI LDE A LIQUE A GUI LAR

1. Introducción La ERC se define como una disminución en la función renal, expresada por un filtrado glomerular (FG) o un aclaramiento de creatinina estimado <60 ml/min/1, 73 m 2, o como la presencia de daño renal de forma persistente durante al menos 3 meses. Tratamientos ENFERMEDAD RENAL CRÓNICA (ERC) Conservador (ACKD) Hemodiálisis (HD) Diálisis peritoneal (PD) Trasplante (Tx)

1. Introducción ERC Y ENVEJECIMIENTO ACELERADO o Envejecimiento acelerado: deterioro vascular, inflamación sistémica persistente, fragilidad… o En personas envejecidas hay una reducción de la liberación de IL-7 por las células estromales de médula ósea con lo que hay menos producción de linfocitos. o Hay una inmunodeficiencia (Hakim, F. T. , & Gress, R. E. , 2007).

1. Introducción ERC Y ENVEJECIMIENTO ACELERADO Acumulación de células senescentes: q. Reordenamientos de la cromatina Cambio de expresión génica ØSenescence-associated secretory phenotype (SASP), que varía según tejido y estimulo que lo provoca. (Wang, Cai & Chen, 2017)

1. Introducción CELL SENESCENCE: SENESCENCEASSOCIATED SECRETORY PHENOTYPE (SASP) - Daños en el ADN - Acortamiento telomérico - Aumento del estrés oxidativo - Deterioro de mecanismos celulares como la autofagia - Sobreexpresión de oncogenes. Ej: Ras Antagonismo pleiotrópico: Protege en el joven, pero en el anciano, con la acumulación de células senescentes puede tener consecuencias patológicas. (González-Puertos et al. , 2015 )

1. Introducción SASP: CITOQUINAS Citoquina Función IL-6 Efecto proinflamatorio Aumenta tras el daño al ADN al inducir senescencia por oncogenes Asociado a prevalencia y gravedad de ERC IL-1 Efecto proinflamatorio Regulador positivo autocrino (activa NF-κB) Se ha observado que aumenta tras el daño por quimioterapia IL-8 Efecto proinflamatorio Depende de la secreción de IL-1α Genera proliferación de células mesangiales en la nefropatía Ig. A TNF-α Proinflamatorio Asociado con la prevalencia y gravedad de la ERC Down-regula Klotho TGF-β Genera diferenciación de miofibroblastos para inducir el cierre de heridas

1. Introducción SASP: QUIMIOQUINAS Quimioquina Función MCP-1, 2, 4 Promueve reclutamiento de linfocitos T y macrófagos Aumenta la liberación de moléculas proinflamatorias Promueve reparación tisular MCP-3 (CCL 7) Atrae macrófagos Se ha observado su aumento cuando hay senescencia de células estelares del hígado, próstata y fibroblastos MIP-1α (CCL 3) Proteína inflamatoria de macrófagos Aumenta la adherencia de los macrófagos GROα (CXCL 1) Atrae neutrófilos

1. Introducción SASP: OTROS FACTORES Factor Función GM-CSF y G-CSF Factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos Secretado principalmente por fibroblastos senescentes VEGF (FGF-2) Promueve proliferación, migración, adhesión y diferenciación de células mesenquimales endoteliales y epiteliales residuales Proinflamatoria y angiogénica Aumentada en pacientes con ERC con proteinuria. Metaloproteasas (Ej: MMP) Secretadas principalmente por fibroblastos senescentes MMP-1 y MMP-3 pueden regular la expresión de otros SASP como las MCP y la IL-8

2. Hipótesis y objetivos HIPÓTESIS Y OBJETIVOS Enfermos con enfermedad renal crónica presentan un envejecimiento acelerado, con acumulación de células inmunitarias senescentes que liberan SASP. OBJETIVOS: 1. Caracterizar las poblaciones linfocitarias (T, B y NK) de los pacientes con ERC y observar si existen diferencias entre las distintas modalidades de tratamiento

2. Hipótesis y objetivos PACIENTES Y METODOS Estudio transversal y descriptivo con n: ACKD = 39 HD = 44 PD = 23 TX = 31 Controles = 17 Técnica de inmunofluorescencia directa utilizando citometría de flujo: Marcajes múltiples con Ac. Mo específicos dirigidos a la caracterización fenotípica de poblaciones linfocitarias (T, B y NK)

3. Resultados y discusión Disminución de los linfocitos totales en HD, PD y Tx respecto a los controles. (*p<0, 05) Disminución de los linfocitos T en HD, PD y Tx con respecto a los controles (*p<0, 05) Disminución de linfocitos en personas en HD y PD comparado con los que siguen un tratamiento conservador (ACKD). (#p<0, 05) Disminución de los linfocitos T en pacientes con HD con respecto a ACKD (#p<0, 05)

3. Resultados y discusión Se observa cierta inmunodeficiencia en pacientes dializados La disminución linfocitaria en pacientes trasplantados es esperable debido al tratamiento inmunosupresor recibido con el objetivo de evitar el rechazo del injerto Disminución de los linfocitos totales en HD, PD y Tx respecto a los controles. (*p<0, 05) Disminución de los linfocitos T en HD, PD y Tx con respecto a los controles (*p<0, 05) Disminución de linfocitos en personas en HD y PD comparado con los que siguen un tratamiento conservador (ACKD). (#p<0, 05) Disminución de los linfocitos T en pacientes con HD con respecto a ACKD (#p<0, 05)

3. Resultados y discusión Disminución de los linfocitos T CD 4+ en HD, PD y Tx comparado con los controles. Siendo este descenso significativamente menor en PD comparado con HD. (*p<0, 05) Disminución de los T CD 8+ en los pacientes con HD con respecto a los individuos sanos (*p<0, 05) Disminución del ratio CD 4/CD 8 en HD y Tx (*p<0, 05). Disminución también visible en HD con respecto a ACKD y PD(#, &p<0, 05).

3. Resultados y discusión Se observa una disminución en pacientes dializados y trasplantados de los linfocitos T CD 4 y una tendencia a la inversión del ratio CD 4/CD 8 que también se observa en la población envejecida. Disminución de los linfocitos T CD 4+ en HD, PD y Tx comparado con los controles. Siendo este descenso significativamente menor en PD comparado con HD. (*p<0, 05) Disminución de los T CD 8+ en los pacientes con HD con respecto a los individuos sanos (*p<0, 05) Disminución del ratio CD 4/CD 8 en HD y Tx (*p<0, 05). Disminución también visible en HD con respecto a ACKD y PD(#, &p<0, 05).

3. Resultados y discusión Disminución de los linfocitos B y NK en todos los pacientes con ERC independientemente del tipo de tratamiento (*p<0, 05)

3. Resultados y discusión Se observa una disminución de los linfocitos B y NK en los enfermos renales, en todas las modalidades de tratamiento, posiblemente por agotamiento producido a causa de la inflamación crónica subclínica que presentan estos pacientes Disminución de los linfocitos B y NK en todos los pacientes con ERC independientemente del tipo de tratamiento (*p<0, 05)

5. Conclusión Los enfermos renales presentan inmudeficiencia con una disminución de células NK, B y en algunos casos, de células T CD 4+, siendo esta más destacada en pacientes que tienen un tratamiento con hemodiálisis. CONCLUSIONE S La inmunodeficiencia pudiera estar asociada a una inmunosenescencia, ya que las células senescentes liberan factores como citoquinas, quimioquinas, etc, englobados bajo el nombre de SASP que en el caso de la ERC podrían estar agravando la enfermedad.

4. Perspectivas futuras PERSPECTIVAS FUTURAS Enfermos con enfermedad renal crónica presentan un envejecimiento acelerado, con acumulación de células senescentes que liberan SASP. OBJETIVOS: 1. Caracterizar las poblaciones linfocitarias de los pacientes con ERC 2. Medir las SASP 3. Relacionar las SASP con el posible fenotipo inmunosenescente.

AES-ISCIII (Nº Exp PI 17/01029) Departamento de Genética, Fisiología y Microbiología de la UCM Servicio de Nefrología del Hospital Universitario 12 de Octubre (Unidad Docente de Fisiología) • • • Julia Carracedo Nadia Serroukh Gemma Valera Noemí Ceprián Carlos Oliva • • • Enrique Morales Jara Caro Ignacio González Eva Mérida Claudia Yuste En colaboración con Matilde Alique Universidad de Alcalá, Departamento de Biología de Sistemas

REFERENCIAS • Dai, L. , Qureshi, A. R. , Witasp, A. , Lindholm, B. & Stenvinkel, P. 2019, "Early Vascular Ageing and Cellular Senescence in Chronic Kidney Disease", Computational and Structural Biotechnology Journal, vol. 17, pp. 721 -729. • González-Puertos, V. Y. , Maciel-Barón, L. Á, Barajas-Gómez, B. A. , López-Diazguerrero, N. E. & Königsberg, M. 2015, "Involvement of phenotype secretor of senescent cells in the development of cancer, aging and the diseases associated with age", Gaceta medica de Mexico, vol. 151, no. 4, pp. 491. • Hakim, F. T. , & Gress, R. E. (2007). “Immunosenescence: deficits in adaptive immunity in the elderly”. Tissue Antigens, 70(3), 179– 189. doi: 10. 1111/j. 1399 -0039. 2007. 00891. x • Tchkonia, T. , Zhu, Y. , Deursen, J. v. , Campisi, J. & Kirkland, J. L. 2013, "Cellular senescence and the senescent secretory phenotype: therapeutic opportunities", Journal of Clinical Investigation, vol. 123, no. 3, pp. 966 -972. • Wang, W. , Cai, G. & Chen, X. 2017, "Cellular senescence, senescence-associated secretory phenotype, and chronic kidney disease", Oncotarget, vol. 8, no. 38, pp. 64520 -64533.