Reactii antigen anticorp n Antigen n Anticorp Reactiile

Reactii antigen- anticorp

n Antigen n Anticorp Reactiile antigen – anticorp se utilizeaza 1. pentru identificarea unui microorganism (antigen) cu ajutorul unui ser imun standard (diagnostic direct sau bacteriologic) 2. pentru identificarea anticorpilor cu ajutorul unui antigen cunoscut (diagnostic indirect sau serologic) n

Reactiile antigen – anticorp n n De aglutinare De precipitare RFC Neutralizare a toxinelor bacteriene folosind anticorpi specifici

Reactia de aglutinare n n reactie antigen-anticorp de agregare in care antigenul este reprezentat de celule bacteriene sau fragmente de celule in suspensie Complexele imune formeaza retele tridimensionale in prezenta unor electroliti din mediu si in anumite conditii de temperatura si p. H, constituind agregate vizibile.

Aglutinare pe lama Pe lama se pun alaturi 1 picatura de ser fiziologic si o picatura de ser imun. In fiecare picatura se suspenda un inocul din cultura bacteriana de testat de 18 -24 de ore pe geloza simpla. Daca exista corespondenta antigen – anticorp, in picatura de ser imun apare aglutinarea bacteriilor sub forma de de grunji fini, albi, vizibili cu ochiul liber

AGLUTINAREA PE LAMA

AGLUTINAREA PE LAMA

AGLUTINAREA PE LAMA

Aglutinarea pe lama n n n Reactie de orientare Da relatii de ordin calitativ Evidentiaza o corespondenta intre serul imun folosit si antigenul de identificat

Aglutinarea in tuburi n n n Se fac dilutii din serul persoanei: 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640 Se adauga aceeasi cantitate de Atg =>grunji Titrul reactiei: dilutia cea mai mare de ser la care se mai observa aglutinarea

AGLUTINAREA IN TUBURI

Tipuri de aglutinare 1. “O” (somatica) antigenul “O”- peretele celular - natura GLP - termostabil - alcoolo-rezistent - distrus de formol Aglutinarea “O”- grunji fini care nu disociaza la o aglutinare brutala -bacteriile se unesc prin alipirea cap la cap

2. Aglutinarea “H” (flagelara) antigenul “H”- bacteriile mobile - natura P - termolabil - distrus de alcool - rezistent la formol Aglutinarea “O”- apare rapid sub forma de flocoane care formeaza un sediment abundent care dispare la o agitare brusca -bacteriile se unesc flageli

Reactia de aglutinare pasiva n n Sensibilitate mare Antigenul este o solutie moleculara In urma fixarii pe un suport, devine aglutinabil in prezenta serului imun Latex, polistiren, colodiu, hematii (aglutinare pasiva)

Reactii de aglutinare pasiva Latex-aglutinare: n Evidentierea FR n Detectarea antigenelor de Haemophylus, pneumococ, meningococ

Reactii de aglutinare pasiva n n Antigenul adsorbit pe hematii: Dg tiroiditei Hashimoto Dg PAR Dg infectiilor pt testarea anticorpilor antitoxici

Reactia de inhibare a hemaglutinarii pasive n Dg sarcinii: cercetarea gonadotrofinei corionice in urina femeii

Reactia de precipitare reactie Atg-Atc in care Atg=macromolecule iar Atc=Ig G Reactia de precipitare inelara: n Eprubete mici si inguste in care se pun in contact cei doi reactanti iar la locul de intalnire: inel de precipitare n Industria alimentara n Medicina legala n

Reactia de precipitare inelara: n n R. Vincent-Bellot: dg meningitei cerebrospinale epidemice Identificarea de grup a streptococului

REACTIA DE PRECIPITARE INELARA INEL OPALESCENT DE PRECIPITARE

Reactia de floculare n n n Precipitarea apare in toata masa amestecului sub forma de flocoane Se utilizeaza pentru titrarea toxinelor microbiene si a serurilor antitoxice Flocularea apare prima data in eprubeta in care exista proportie optima atg-atc

Tehnica de lucru n n n Se repartizeaza in eprubete de cantitati crescande de ser antitoxic+ cantitati egale de toxina Se pun in baie marina Se urmareste prima eprubeta in care apare flocularea= unirea unor cantitati echivalente de antigen si anticorp.

Precipitarea in gel de agar n n n Mare sensibilitate si specificitate Utilizeaza gelul de agar ca mediu in care difuzeaza unul sau ambele elemente care intra in reactie Intalnirea celor doua elemente=>linie de precipitare

Tehnici 1. Difuzia simpla: Difuzia radiala Mancini: determinarea cantitativa Ig G, Ig M, Ig A, C 3 2. Dubla difuzie Metoda Ouchterlony: antigene bacteriene, virale, diverse proteine daca exista corespondenta atg -atc => linii de precipitare

PRECIPITAREA IN GEL SIMPLA DIFUZIE-RC MANCINI

PRECIPITAREA IN GEL SIMPLA DIFUZIE – RC. MANCINI

3. Difuzia in camp electric Imunelectroforeza: asociaza principiul electroforezei cu principiul difuziunii in gel -se efectueaza o EF in gel de agaroza in care se separa componentele amestecului - Se adauga ser imun si se lasa se reactioneze cu antigenele separate - la intalnirea atg cu atc apare un arc de precipitare - Fiecare fractiune proteica are un arc caracteristic ca pozitie si morfologie n

Imunelectroforeza Utila in: n Determinarea numarului de fractiuni dintr-un atg complex n Determinarea clasei de Ig. G si a altor proteine din plasma sanguina n Controlul purificarii unor preparate antigenice

Contraimunelectroforeza n n n Atg si atc migreaza in sens contrar in camp electric datorita incarcarii electrice diferite La locul de intalnire cu atc corespunzator=> linie de precipitare Se foloseste pt detectarea atg virusului B

RFC 2 sisteme Atg- Atc n Atg si Atc de testat dintre care unul e cunoscut si altul e necunoscut n Hematii de oaie si Atc omolog Intre cele 2 sisteme oscileaza complementul

Interpretare n n Fixarea C pe primul sistem (RFC pozitiv) nu produce modificari in amestecul de reactie care ramane tulbure Fixarea C pe cel de-al doilea sistem (RFC negativ) produce liza hematiilor, amestecul de reactie devine limpede

Exemple n n n Wassermann- sifilis - citirea se face urmarind aparitia hemolizei (r. neg. ) sau lipsa ei (r. poz. ) Ida-Bengston- leptospiroza, rickettsioza, infectii cu Chlamydii Breadstreet –Taylor- infectii virale, febra Q

Teste care utilizeaza vizualizarea complexelor antigen-anticorp prin artificii tehnice Sensibilitatea reactiei Atg-Atc poate fi marita legind de Atc, mai rar de Atg, un marker usor de identificat: n Subst fluorescente (IF) n Izotopi radioactivi (RIA) n Enzime: peroxidaza, fosfataza alcalina(teste imunenzimatice)

Imunofluorescenta n Prin cuplarea unei substante fluorescente cu anticorpii => anticorpi fluorescenti, care fixindu-se pe antigenul omolog => cx imune fluorescente, observabile la microscop in lumina UV.

Imunofluorescenta n n Metoda foarte sensibila Identificarea streptococilor de grup A Infectii cauzate de mycoplasme, hemofili, bordetele, Neisserii Metoda de electie in diagnosticul rabiei

Radioimunotestarea n n Marcarea cu I 125 a unuia dintre reactanti Se masoara radioactivitatea complexului format Detecteaza enterotoxina stafilococica, toxina botulinica tip A, Ps. aeruginosa in infectii urinare Infectii virale: gripa, infectii herpetice, hepatite cu virus B

Teste imunenzimatice n n n Atg sau Atc se cupleaza cu enzime cu mare activitate: peroxidaza, fosfataza alcalina => cx care retin activitatea imunologica si cea enzimatica Cx imun va fi detectat prin aprecierea activitatii enzimei fata de un substrat specific ELISA (enzyme-linked-immunosorbent-assay)

ELISA (enzyme-linkedimmunosorbent-assay) n n n Se foloseste pentru: Detectari de antigene bacteriene (treponeme, toxine E. coli, difterica, stafilococice), virale (herpesvirusuri, virusuri hepatitice) Detectari de anticorpi antibacterieni (in salmoneloze, bruceloza, rickettsioze) sau antivirali