REACCION EN LA CADENA DE LA POLIMERASA NAYELI

REACCION EN LA CADENA DE LA POLIMERASA NAYELI RUIZ ROSAS PAULINA YOLTIC IVON BENITEZ MARTINEZ EQUIPO: 1

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA v Las técnicas en genética molecular eran muy laboriosas v La mayoría tenia que ver con clonación o detección de genes v Desarrollada por Kary Mullis en 1980 v Técnica “in vitro” que imita la habilidad natural de la célula de duplicar el ADN v Crea un gran numero de copias de un segmento de ADN en poco tiempo, sin necesidad de células vivas

¿Que se necesita? Ø Un pequeño segmento de ADN Ø Ciclos de desnaturalización Ø Apareamiento con cebadores () Extensión por un ADN polimerasa termo-resistente Ø

Se debe de: Ø Conocer la secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento a amplificar Ø Se usan para diseñar dos oligonucleótidos sintéticos de ADN Ø Complementan una porción de cada una de las cadenas dela doble hélice

• Reacción en Cadena de la Polimerasa Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de (PCR) los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alterna das para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente.

Ciclo de amplificación Consiste en una serie de 20 a 35 cambios repetidos de temperatura llamados ciclos. Cada ciclo suele consistir en 2 -3 pasos a diferentes temperaturas. La PCR común se realiza con ciclos que tienen tres pasos de temperatura. Los pasos de ciclos a menudo están precedidos por un choque térmico (llamado "hold") a alta temperatura (> 90 °C), y seguido por otro hold al final del proceso para la extensión de producto final.

� Cada ciclo de PCR consiste en tres etapas : Desnaturalización: El DNA molde es incubado a alta temperatura (92 -98 °C, de 30 a 90 seg. ) 2) Alineamiento: Se produce la hibridación del cebador. Para ello es necesario bajar la temperatura a (40 -68 °C durante 20 -40 seg. ) 3) Elongación: Actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. 1)

ØAplicación de la RCP. Clonación. Análisis y cuantificación de la expresión genética. � Diagnostico clínico. � La amplificación por RCP. � Características de la evaluación � �

CONTAMINANTES � El RCP puede sintetizar copias del ADN tantas veces se requiera de manera in vitro � Gracias a dicho proceso es posible estudiar los distintos genes que codifican para cada proteína � En la microbiología: el rcp se utiliza para la detección de virus o bacterias las cuales no son detectados con reactivos o su aislamiento y cultivo es mas complicado y lento.

� En la evolución también se a utilizado el rcp para completar arboles filogenéticos. � Como herramienta para el estudio de animales en vías de peligro de extinción.