Ralisation dun antibiogramme sur la souche bactrienne Matriels

Réalisation d’un antibiogramme sur la souche bactérienne

Matériels sur le poste de travail 5 m. L Tube d’eau physiologique Gélose avec bactéries Gélose Mueller Hinton Ecouvillon Pince inox Plan de dépot Antibiotics disks

1. Preparation de l’inoculum

1. 1. Prélever une colonie bactérienne avec une anse stérile. ATTENTION: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen.

1. 2. Introduire l’anse dans un tube d’eau physiologique stérile de 5 m. L. Dans l’eau, frotter l’anse sur la paroi du tube, pour disperser les bactéries. 1. 3. Répéter l’opération 4 fois, de façon à introduire 5 colonies au total. ATTENTION: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen.

I 1. 4. Homogénéiser le tube par rotation manuelle, puis noter « I » sur le tube.

2. Ensemencement de la gélose Muller Hinton pour l’antibiogramme

2. 1. Dans le tube d’inoculum « I » , introduire un écouvillon stérile. Mouiller l’écouvillon, puis essorer les excédents de liquide contre la paroi du tube. ATTENTION: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen.

2. 2. Ensemencer la gélose Mueller Hinton en frottant l’écouvillon sur sa surface. Réaliser des stries serrées. 2. 3. Reproduire l’opération deux fois en tournant de 60° la boite à chaque fois afin d’assurer une distribution homogène de l’inoculum: 60° Streaks in 3 passes 60° =

2. Dépôt des disques d’antibiotiques

3. 1. Déposer la gélose Mueller Hinton préalablement ensemencée sur le plan de dépôt fourni 3. 2. A l’aide d’une pince stérile, déposer les disques antibiotiques à la surface de la gélose Attention : lors du dépôt, appliquer une légère pression pour assurer le maintien du disque, mais pas trop pour ne pas perforer la gélose

4. Incubation de la gélose Incuber la boite, en position retournée, 16 h minimum à 37°C.

5. Lecture des résultats

5. 1. Après incubation, mesurer les diamètre des zones d’inhibition de croissance autour des disques antibiotiques

5. 2. A l’aide du tableau de lecture ci-dessous, conclure sur la sensibilité ou la résistance de la souche aux différents antibiotiques testés Antibiotique testé Resistance pour tout diamètre d’inhibition inférieur à : Sensibilité pour tout diamètre d’inhibition supérieur à : Ampicilline 14 mm 19 mm SXT 10 mm 16 mm Erythromycine 17 mm 22 mm Gentamicine 14 mm 16 mm

6. Conclusion Proposer un antibiotique adapté pour le traitement de l’infection nosocomiale