Ractions de fixation du complment Anne 2008 quipe

Réactions de fixation du complément Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 1

Rappels n Système du complément = ensemble de protéines synthétisées par les hépatocytes n à l’état inactif n présentes dans le plasma et la lymphe n Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 2

Rappels n Activation des protéines du complément (C’) n n n par contact avec les enveloppes des microorganismes. par liaison à un site particulier des Ac, démasqué lors de la formation d’un complexe immun Activation des protéines du C’ en cascade produisant des composés à action : n n n cytolytique par formation du complexe d’attaque membranaire (CAM), chimiotactique opsonisante. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 3

Cytolyse provoquée in vitro par le Complément (C’) 1) Formation d’un système hémolytique > Globules rouges de mouton (GRM) sensibilisés par des anticorps anti. GRM 2) Activation du C’ en cascade 3) Hémolyse provoquée par la formation de CAM Année 2008 C’ C’ Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 4

Principe des fixation du réactions de complément Préliminaire : Décomplémentation du sérum par chauffage 30 min. à 56°C Élimination de toute autre source de complément que le réactif Calibration de la quantité de C’ présent lors de la réaction Titrage du C’ qui sera utilisé dans la réaction de fixation Préparation d’une gamme de dilution du C’ Mise en contact avec le système hémolytique Détermination du titre : plus forte dilution présentant une hémolyse totale Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 5

Principe des fixation du réactions de complément 1ère étape : Fixation Mise en contact : Sérum + Ag + C’ Sérum positif Sérum négatif C’ C’ C’ fixé : activité C’ résiduelle nulle Année 2008 C’ libre : activation possible par un complexe immun Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 6

Principe des réactions de fixation du complément 2ème étape : Révélation Ajout du système hémolytique Sérum positif Sérum négatif C’ C’ C’ Pas d’hémolyse (NH) Année 2008 Hémolyse (HT) Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 7

Conditions opératoires n Nécessaires aux activités enzymatiques de la cascade d’activation du complément Température : 37°C n Tampon VCM : Véronal, Calcium, Magnésium n Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 8

Témoins Témoin GRS Témoin C’ Témoin Ag Témoin Sérum Tampon GR GRS Tampon GRS C’ Tampon GRS, C’ Ag Tampon GRS, C’ Sérum Résultat attendu NH NH HT HT HT Validation Stabilité des GRS Activité du C’ sur le SH Absence d’activité anti. C’ de l’Ag Absence d’activité anti. C’ du sérum Nom Composition Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 9

Résultats Sédimentation = NH Hémolyse partielle = HP Fixation complète du C’ Hémolyse totale = HT Fixation partielle du C’ Présence d’Ac spécifiques Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET C’ non fixé Absence d’Ac spécifiques 10

Interprétation n Analyse des témoins n n Témoins GR et GRS = NH : Globules Rouges de Mouton Sensibilisés ou non utilisés stables dans les conditions opératoires Témoins C’ = HT : Système Hémolytique GRM-anti. GRM totalement hémolysé par le C’ (bonne quantité de complément et bon équilibrage sur SH) Témoin Ag = HT : Antigène utilisé sans activité anticomplémentaire Témoin Sérum = HT : Sérum à tester sans activité anticomplémentaire. n Conformité de tous les témoins = validation des réactifs et du sérum. n Titre du sérum = plus forte dilution du sérum qui fixe totalement (ou partiellement) l’activité du complément. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET 11