Quelques techniques simples de quantification Notation des marquages

Quelques techniques simples de quantification Notation des marquages et évaluation de l'intensité 0 (-) + ++ ++++ Notation pas de réaction faible moyenne excellente exceptionnelle Exemple +++ 3 (+) Intensité du bruit de fond Intensité du marquage Commentaire Abondance (ou nombre) de cellules marquées Représentation graphique coupe déchirée Intensité ++++ ++ + 0 1000 100 000 Antisérum : 1/dilution Exemple d'application : influence de l’épaisseur des coupes sur l’intensité de la réaction Coupes sériées d'épaisseur croissante 1 2 Intensité. . 3 4 . . . Marquage spécifique. . Bruit de fond. Pancréas de poulet Fixation : glutaraldéhyde tétroxyde d'osmium Epon Inclusion : Marquage : • 1° anticorps : lapin anti glucagon • 2° anticorps : anti-lapin - FITC 1000 2000 3000 75 500 Epaisseur de coupe (nm)

contrôle de spécificité (microscopie optique) Intensité de fluorescence Glicentine Pancréas de poulet Préparation : idem page précédante Marquage : • 1° anticorps : lapin anti glucagon pré-incubé avec des concentration croissantes de glucagon ou de glicentine • 2° anticorps : anti-lapin - FITC Glugagon Bruit de fond 0 0, 01 0, 1 1 10 Glicentine (précurseur du glucagon) Glugagon Effet de « crochet » (hook effect) : cas de la compétition 1 Intensité 2 3 0 [Antigène] 100 Peptide ng/ml

Effet de « crochet » (hook effect) : cas de la dilution Intensité 1 Lavage 2 3 0 Dilution Ac Exemple d'application : cinétique d’internalisation d’un anticorps armé dans une cellules tumorale (immunothérapie)

Quantification de l’endocytose