Priprema uzoraka za dokazivanje specifinih anti Candida At

Priprema uzoraka za dokazivanje specifičnih anti. Candida At i Candida Ag i specifičnih anti. Aspergillus At i Aspergillus Ag Marija Živković, laboratorijski tehničar Institut za mikrobiologiju i imunologiju Medicinski fakultet Univerziteta u Beogradu “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA” Edukacija za medicinske sestre i zdravstvene tehničare

Najčešći uzročnici sistemskih gljivičnih oboljenja Candida albicans Aspergillus fumigatus “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Vrste testova • C. albicans Ig. M • C. albicans Ig. G • C. albicans Ag • A. fumigatus Ig. M • A. fumigatus Ig. G • A. fumigatus Ag “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Uzorci pacijenata • • • Krv Serum Likvor BAL Indukovani sputum Aspirat “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Količina uzoraka - odrasli • • Krv 4 -5 ml Serum 1. 5 -2 ml BAL 4 -5 ml Indukovani sputum 4 -5 ml “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Uvođenje uzoraka • Ime, prezime, identifikacioni broj, datum rođenja • Unošenje podataka u protokole laboratorije • Obeležavanje uzoraka brojem iz protokola “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Obrada uzoraka/centrifugiranje Krv • 5 min/2500 obrtaja BAL/sputum • 10 min/2500 obrtaja “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Selekcija reprezentativnog uzorka NORMALAN HEMOLITIČAN ŽUTO-ZELEN LIPEMIČAN “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Pravilan rad sa uzorcima • Komora za sterilan rad • Sterilne ependorff epruvete obeležene odgovarajućim brojem • Sterilni nastavci “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Procedura ELISA testa za At/Ag *Vorteksovanje, inkubacija na 100˚C Centrifugiranje 10 min/10000 obrtaja *Nanošenje *ispiranje Nanošenje konjugata *Nanošenje supernatanta odgovarajućih kontrola i uzoraka Inkubacija supstrata Inkubacija Stopiranje reakcije *Ispiranje * Kritične tačke procedure “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Problemi/greške ELISA testa za At/Ag • • • Korišćenje nedestilovane vode Nesterilni uslovi za rad (komora za sterilan rad!!) Kontaminirane pipete Nesterilni nastavci Loše ispiranje Produžetak inkubacije “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Validacija testa • Pozitivna kontrola • Negativna kontrola • Eksterna kontrola* Produžena inkubacija Kontaminacija Lažno pozitivan rezultat NEQAS - Quality Assurance laboratory in organising the UK National External Quality Assurance Schemes “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Očitavanje testa • • ELISA čitač Filter 405/620 Filter 450/620 Štampanje očitanih vrednosti Plava boja – pozitivan uzorak i pozitivna kontrola Žuta boja – negativan uzorak i negativna kontrola “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Izdavanje rezultata • • • Izračunavanje očitanih vrednosti Validacija (kontrola +/-) Razvođenje rezultata (elektronski/protokol) Monitoring pacijenata i izdavanje rezultata Interpretaciju rezultata vrši lekar Verovatna invazivna gljivična infekcija: üDva uzasopno pozitivna nalaza manana ili galaktomanana üPozitvna antigljivična At (Ig. G) u visokom titru üSerokonverzija gljivičnih Ag i/ili antitela At “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.

Značaj ELISA dijagnostike • Brza i jednostavna dijagnostika • Pravovremeno započinjanje adekvatne terapije • Screening / Praćenje razvoja bolesti “DIJAGNOZA GLJIVIČNIH INFEKCIJA – OD UZORKA DO REZULTATA”, Crowne Plaza BEOGRAD, 13. 03. 2015.