PRINCIPALI TIPI DI ELETTROFORESI Vengono classificati in base

PRINCIPALI TIPI DI ELETTROFORESI Vengono classificati in base al tipo di supporto: • su carta • su gel di Agarosio • su gel di Acrylamide • capillare

Elettroforesi su carta • La striscia di carta viene saturata con la soluzione tampone quindi si introduce il campione su un punto nella zona centrale della carta. • Si applica una ddp di 100 -1000 V (la corrente è nel range dei m. A). • Gli ioni migreranno agli elettrodi per effetto del campo elettrico. • Dopo che è trascorso l’opportuno periodo di tempo, la carta è rimossa e lasciata asciugare ed eventualmente spruzzata con opportuni coloranti per osservare le macchie degli analiti.

Elettroforesi su gel es. Agarosio

Elettroforesi Capillare (CE) L’elettroforesi capillare è una separazione elettroforetica che avviene in un capillare di diametro variabile tra 25 e 100 μm. Strumento • capillare di silice fusa • serbatoi separati contenenti due elettrodi • generatore di voltaggio • sistema di rivelazione • sistema di acquisizione dei dati (computer) Modi di iniezione del campione • elettromigrazione • iniezione idrostatica Sistemi di rivelazione • detector UV-vis • detector a fluorescenza • detector a conducibilità • detector elettrochimico • spettrometri di massa • detector radioattivo L’elettroforesi capillare permette di limitare i problemi legati allo sviluppo di calore Il calore viene facilmente disperso essendo molto alto il rapporto tra la superficie e il volume.

Tipi di molecole separabili con CE • • amminoacidi peptidi proteine acidi nucleici ioni inorganici acidi e basi organiche intere cellule Vantaggi dell’elettroforesi capillare J J J J alta efficienza di separazione (circa 100 piatti teorici) piccola quantità di campione (1 -10 µl) separazione rapida (da 1 a 45 min) selettività automazione possibilità di quantificazione riproducibilità possibilità di accoppiamento con spettrometro di massa