PREPARATE MICROSCOPICE CATEDRA DE MICROBIOLOGIE LP 2 In
PREPARATE MICROSCOPICE CATEDRA DE MICROBIOLOGIE LP 2
• In microbiologia clinica, microscopul este indispensabil. • Microscopia uzuala o facem cu fond luminos. • Numai in circumstante speciale recurgem la: - microscopia cu fond negru, - cu contrast de faza sau - cu luminiscenta.
Microscopia optica pe fond luminos • Bacteriile, fungii, protozoarele le urmarim: in produse patologice sau in culturi fie in stare nativa, vie (preparate umede), fie dupa fixare si colorare (preparate colorate).
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice umede • Indicatii: - depistarea rapida si - identificarea spirochetelor, fungilor sau protozoarelor - observarea rapida a mobilitatii microorganismelor - depistarea si identificarea unor elemente celulare si necelulare in expectoratie, lavaj bronsiolo – alveolar, urina, materii fecale, secretie vaginala, lichid duodenal etc.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice umede • Materiale necesare: - lame de sticla: 76/25 mm. , grosime 1 – 1, 1 mm. - laméle de sticla: 18/18, 20/20, 22/22, 24/24 mm. , grosime 0, 1 - 0, 17 mm. - microscop optic: obiective uscate de 4 x, 10 x, 20 x si 40 x.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice umede • Interpretare: - Miscarea browniana determina oscilatia pe loc a particulelor. Curentii de fluid antreneaza o multime de particule care traverseaza campul microscopic in aceeasi directie.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice umede - Un microorganism este mobil cand isi modifica pozitia fata de un reper din vecinatate. - Bacteriile monotriche sau lofotriche au miscari rapide de rostogolire, - Bacteriile peritriche au miscari oscilatorii.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • Principiu: Fixarea colorantilor (ex. coloranti bazici de anilina etc. ) pe structurile protoplastului mareste refringenta microorganismelor si permite observarea detaliilor morfologice.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • Structuri speciale asociate peptidoglicanului bacterian determina anumite afinitati tinctoriale care apar dupa coloratii diferentiale: Gram, Ziehl – Neelsen etc.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • In coloratiile negative particulele insolubile ale colorantului (carbonul din tusul de India, nigrozina) formeaza fondul negru al campului microscopic pe care se observa usor, ca un halou incolor, capsula unor microorganisme ca: pneumococii, Cryptococcus neoformans etc.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • Indicatii: identificarea microscopica a microorganismelor.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • Procedura: 1. Efectuarea frotiului: Frotiul este materialul microbian etalat in strat subtire pe suprafata unei lame de microscop marcata cu indicativul produsului examinat.
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • Frotiul se efectueaza in 3 timpi: - Etalarea - Uscarea rapida a frotiului in aer cald - Fixarea frotiului pentru bacterioscopie
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate • 2. Colorarea frotiului • 3. Protejarea frotiului prin montarea in balsam de Canada
Microscopia optica pe fond luminos Preparate microscopice colorate Coloratia Gram 1. Colorare cu sol. Violet de gentiana (cristal violet) 1% - 1’. Spalare cu apa de robinet. 2. . Mordantare cu sol. Lugol (sol. de I 2 in KI) – 1’. Spalare cu apa de robinet. 3. Decolorare cu sol. alcool – acetona – 30” – 1’ Spalare cu apa de robinet. 4. Colorare cu sol. Safranina (fucsina bazica diluata) – 1’. Spalare cu apa de robinet.
Coloratia Gram
Coloratia Gram
Link-uri • http: //www. microbiologybytes. com/Lab. Work. ht m • http: //www. ncl. ac. uk/dental/oralbiol/oralenv/tutorials/chris tian_gram. htm • http: //www. uphs. upenn. edu/bugdrug/antibiotic_manual/g ram. htm • http: //serc. carleton. edu/microbelife/research_methods/mi croscopy/gramstain. html • http: //homepage. ntlworld. com/diamonddove/01_Content s/Contents. htm • http: //micro. digitalproteus. com/morphology. php
TEMA PENTRU STUDENTI • Cautati si alte link-uri despre coloratia Gram (“staining Gram”) si imagini cu bacterii Gram (+) si Gram (-). • Desenati in caietul de lucrari bacteriile pe care le-ati gasit.
- Slides: 19
