Praktin uduotis genetikai modifikuoto maisto rodymas PCR PCR
- Slides: 17
Praktinė užduotis: genetiškai modifikuoto maisto įrodymas PCR
PCR eiga 120``, 94°C Denaturation 60``, 94 ° Denaturation 40 cycles 10`, 72 °C Completing 120``, 72 °C Elongation 60``, 55°C Annealing
I. DNR išskyrimas
1. Pasiruošimas 1. 1 Paženklinkite du mėgintuvėlius - ne GMO - maisto mėginys(T) ir jūsų grupės numeris! 1. 2 Paimkite 250 µl homogenizuoto Insta. Gene. Matrix iš jūsų pažymėto mėgintuvėlio “IG”į abu mėgintuvėlius! Abiejuose mėgintuvėliuose turi būti vienodas kiekis medžiagos! supernatant beads
2. DNR genų išskyrimas iš ne. GMO maisto 2. 1 Pasverkite 1 gramą sertifikuoto ne. GMO maisto ir įdėkite į grūstuvę! 2. 2 Įpilkite 5 ml distiliuoto H 2 O!
2. DNR genų išskyrimas iš ne. GMO maisto 2. 3 Homogenizuokite mišinį apie 5 min. ! 2. 4 Dar kartą įpilkite 5 ml distiliuoto H 2 O ir sutrinkite iki vientisos masės!
2. 5 Paimkite 25 µl maisto mišinio ir įdėkite į GMO mėgintuvėlį ! 2. 6 Uždarykite mėgintuvėlį ir gerai pakratykite prilaikydami dangtelį! Norint išvengti užteršimo „+GMO DNA“ „-GMO material“ turėtų būt išgauta pirma! Grūstuvė ir grūstuvėlė turi būti nuvalytos su detergentu ir nuplautos distiliuotu H 2 O!
3. DNR išskyrimas iš maisto mėginio Naudokite pirštines!!! 3. 1 Pasverkite 1 g paruošto maisto mėginio ir įdėkite į grūstuvę! 3. 2 Įpilkite 5 ml distiliuoto H 2 O!
3. DNR išskyrimas iš maisto mėginio 3. 3 Homogenizuokite mišinį apie 5 min. ! 3. 4 Vėl įdėkite 5 ml distiliuoto H 2 O ir trinkite iki vientisos masės!
3. 5 Paimkite 25 µl maisto mišinio ir įdėkite į mėgintuvėlį, pažymėtą “T”! 3. 6 Uždarykite ir gerai pakratykite prilaikydami dangtelį!
4. Fermentų denatūracija 95°C temperatūroje 4. 1 Patalpinkite užsuktus mėgintuvėlius į vandens vonią 95°C 5 minutėms! 4. 2 Centrifuguokite mėgintuvėlius 5 min. 13000 rpm dažiniu! 4. 3 Įpilkite po 50 µl supernatanto į du naujus mėgintuvėlius, kurie buvo pažymėti anksčiau!
Dėmesio: paimkite supernantą tik be Insta. Gene'o lašelių, nuimdami maisto kontrolinę DNR ir testuojamo maisto DNR!
II. PCR pasiruošimas Pagal užduotį kiekviena grupė paruošia savo PCR ir elektroforezės darbo dalį kitoms grupėms
III. PCR atlikimas
1. Polimerazės mėgintuvėlių paruošimas 1. 1 Sunumeruokite savo polimerazės mėgintuvėlius nuo 1 iki 6! 1. 2 Įdėkite PCR mėginius į mėgintuvėlius pagal lentelės duomenis! 1. 3 Sumaišykite PCR mėginius pipete! 1. 4 Atvėsinkite mėgintuvėlius ant ledo iki PCR pradžios!
2. PCR atlikimas Atlikite PCR pagal temperatūros lentelę ant termociklerio! Cycler. Program Overview of the tubes in the cycler Atkreipkite dėmesį į savo mėginių išdėstymą termocikleryje, kad išvengtumėte sumaišties ir įsitikinkite, kad jūsų mėgintuvėliai sandariai uždaryti!
IV. PCR produktų įrodymas elektroforezės būdu (Agarose/PAGE) 1. Pagal savo užduotį įrodykite gautus rezultatus atlikdami agarozės arba PAGE elektroforezę! 2. Pagal užduotį nudažykite gelius ir juos išanalizuokite! Filling the gelslots
